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【摘要】 目的 探讨乙型肝炎肝硬化病人左右半肝形态及肝组织标本肝硬化相关因子基质金属蛋白酶22（MMP2）、碱性成纤维细胞生长因子22（bFGF2）的表达。方法 对30例乙型肝炎肝硬化致门脉高压征行脾切除术和乙型肝炎肝硬化失代偿行肝移植手术病人行CT检查,手术中标本摄片,留取形态学资料。同时留取病人肝组织标本，进行苏木精2伊红染色，根据0～4期标准判断肝纤维化程度，并行免疫组化染色检测MMP2和bFGF2的表达。结果 肝硬化病人右半肝萎缩较左半肝萎缩明显；苏木精2伊红染色显示右半肝肝硬化较左半肝明显。病例组左、右半肝MMP2的表达明显高于对照组左、右半肝的表达（χ2=19.45、17.60,P<0.01）；病例组右半肝MMP2的表达明显高于左半肝（χ2=17.37,P<0.01）。病例组左半肝bFGF2 的表达与对照组比较无统计学差异，而右半肝bFGF2 的表达明显高于对照组（χ2=5.80,P<0.05）；病例组右半肝bFGF2 的表达明显高于左半肝（χ2=11.09,P<0.01）。结论 肝硬化时左右半肝纤维化程度存在明显差异，MMP2和bFGF2的表达可能对病变程度起作用。
【关键词】 肝硬化 肝炎 乙型 明胶酶A 成纤维细胞生长因子2 免疫组织化学
A STUDY OF THE MORPHOLOGY OF LEFT AND RIGHT HEMIHEPAR AND THE EXPRESSIONS OF CIRRHOSIS²RELATED FACTOR IN PATIENTS WITH HEPATIC CIRRHOSIS
SUN SHI²JIE, LIU XIAO²FANG, XU HAI²YAN, et al
(Department of Surgery, Yantai Yuhuangding Hospital, Yantai 264001, China);
［ABSTRACT］ Objective To explore the morphology of left and right hemihepar and the expressions of cirrhosis²related factors²matrix metalloproteinase 2 (MMP²2) and basic fibroblast growth factor 2 (bFGF²2)²in patients with type²B²hepatitis cirrhosis.Methods CT scan and intraoperative specimen photographs were done in 30 patients undergoing splenectomy for portal hypertension or liver transplantation for liver in decompensation stage caused by type²B²hepatitis cirrhosis. The liver tissue was taken for HE staining and estimating the extent of hepatic fibrosis based on 0-Ⅳ²stage standard, the expressions of. MMP2 and bFGF2 were detected by immunohistochemistry method. Results Hepatatrophy was observed more seriously in the right hemihepar than the left; HE stain showed cirrhosis was also marker in the right hemiliver. The expression of MMP2 of left and right hemiliver in the patient group was higher than that in the control (χ2=19.45,17.60;P<0.01). In patient group, the MMP2 was higher in the right hemiliver than the left (χ2=17.37,P<0.01). The difference of bFGF2 expression in left hemiliver between the patient group and the control was not significant, while the expression in right hemiliver was higher than that in the control (χ2=5.80,P<0.05). In patient group, the expression of bFGF2 in right hemiliver was higher than the left (χ2=11.09,P<0.01). Conclusion A marked difference of liver fibrosis exists between left and right hemiliver, the expressions of MMP2 and bFGF2 may play a role of this difference.
［KEY WORDS］ Liver cirrhosis; Hepatitis B; Gelatinase A; Fibroblast growth factor 2; Immunohistochemistry
原发性肝癌(肝癌)是我国常见癌症之一，年死亡率仅次于胃癌和肺癌，居第三位。我国原发性肝癌90%以上都是HBsAg阳性的乙型肝炎病人。每年约有2%～3%的慢性乙型肝炎病毒感染者发展至肝硬化，而肝硬化病人每年约有4%～5%将发展至失代偿期肝硬化，肝硬化病人中每年肝癌的发生率约为3%～10%。临床上肝癌病人常有急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化的病史，可见肝炎、肝硬化与肝癌关系极为密切,因此肝硬化的研究对肝癌的防治至关重要。临床上我们观察到肝硬化病人左右半肝肝硬化程度存在明显的差异, 而国内外未见左右半肝肝硬化有显著差异性的报道。因此，我们选取了乙型肝炎肝硬化病人,从形态学方面来探讨左、右半肝肝硬化的程度是否存在显著差异，以为临床肝脏外科肝叶、肝段切除提供理论指导。同时，对左右半肝肝硬化相关因子基质金属蛋白酶²2（MMP2）、碱性成纤维细胞生长因子²2（bFGF2）的表达进行检测，以探讨左、右半肝发生肝硬化的机制。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 标本 本文收集的CT、术中照片和左右半肝组织标本来源于2006～2007年青岛大学附属烟台毓璜顶医院及四川大学华西医院，均为乙型肝炎肝硬化致门脉高压征行脾切除术和乙型肝炎肝硬化失代偿行肝移植病人。本组30例,其中男19例，女11例；年龄31～72岁,平均57岁。均排除肝癌病人、非乙型肝炎肝硬化病人和门静脉内有血栓病人。同时，取肝组织正常手术病人左右半肝组织15例作正常对照。所有标本均石蜡包埋。
1.1.2 试剂 免疫组化染色MMP2鼠抗人单克隆即用型抗体及bFGF2鼠抗人多克隆即用型抗体，免疫组化SP试剂盒，DAB试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。
1.2 方法
1.2.1 形态学检查 所有病人均行CT检查,CT片给予拍照,术中肝脏给予摄片,留取形态学资料。
1.2.2 苏木精²伊红染色 所有标本均行苏木精²伊红染色，显微镜下观察，按文献[1]标准判断肝纤维化程度。
1.2.3 MMP2和bFGF2检测 采用常规SP免疫组化方法，以脂肪组织作阴性对照，以PBS为空白对照及无关兔血清为替代对照。阳性染色强度判断标准：以100个细胞中阳性细胞百分比计算，0为-，30%以下为+，30%～60%为¶，60%以上为·。
1.2.4 统计学方法 采用PPMS 1.5统计软件[2]进行统计学处理，组间比较采用四格表χ2检验。
2 结果
2.1 肝硬化病人左右半肝形态学变化比较
30例中左右半肝同时萎缩以右半肝为重者21例（70.0%）,以左半肝为重者4例（13.3%）,右半肝萎缩左肝代偿性肥大4例（13.3%）,左半肝萎缩右半肝代偿性肥大1例（4.8%）；右半肝萎缩严重者25例（83.3%），左半肝萎缩严重者5例（16.7%），右半肝萎缩较左半肝萎缩者明显增多（χ2=26.67，P<0.01）。
2.2 肝硬化病人左右半肝肝组织病理切片苏木精²伊红染色比较
30例肝硬化均经苏木精²伊红染色证实。主要表现如下：广泛的肝细胞变性坏死；结缔组织增生，假小叶形成。按文献[1]标准判断肝纤维化程度，右半肝肝硬化明显者23例（76.7%）,左右半肝肝硬化无明显差异者6例（20.0%）,左半肝肝硬化明显者1例（3.3%），右半肝肝硬化比例高于左半肝（χ2=97.28，P<0.01）。
2.3 左右半肝肝组织MMP2及bFGF2免疫组化检测比较
MMP2蛋白定位于肝细胞的胞膜和胞浆内，bFGF2蛋白定位于肝细胞胞浆内，阳性反应均显示为棕黄色颗粒，弥漫、散在、局灶分布。病例组左、右半肝MMP2的表达则明显高于对照组左、右半肝的表达（χ2=19.45、17.60，P<0.01）；病例组右半肝MMP2的表达明显高于左半肝（χ2=17.37，P<0.01）。病例组左半肝bFGF2 的表达与对照组比较，差异无统计学意义（χ2=0.011，P>0.05），而右半肝bFGF2 的表达则明显高于对照组（χ2=5.80，P<0.05）；病例组右半肝bFGF2 的表达明显高于左半肝（χ2=11.09，P<0.01）。见表1。
表1 两组左右半肝MMP2及bFGF2的表达（略）
3 讨论
肝硬化是各种原因所致的肝脏慢性、进行性的弥漫性改变。其特点是一种病因或数种病因反复、长期损伤肝细胞，导致肝细胞变性和坏死。广泛的肝细胞变性坏死后，肝内结缔组织再生，出现纤维组织弥漫性增生。同时，肝内肝细胞再生，形成再生结节，正常肝小叶结构和血管形成遭到破坏，形成假小叶。经过一个相当长的时期(数年甚至数十年)，肝脏逐渐变形，质地变硬[3]。在我国肝硬化比较常见，大多数为肝炎后肝硬化，少部分为乙醇性肝硬化、自身免疫性肝硬化和血吸虫性肝硬化等。
形态学观察肝硬化早期可见肝脏增大、质密，晚期肝脏缩小，肝表面凹凸不平，呈结节状、锯齿状、台阶状变化，不规则萎缩变形，密度不均。病人可伴随门脉高压征特点，有的病人可伴有腹水。本研究结果显示，30例肝硬化病人肝脏大小形态均有改变,右半肝萎缩较左半肝萎缩者明显增多。
肝硬化病理发展的基本特征是肝细胞的坏死、再生和肝纤维化。本组苏木精²伊红染色显微镜下观察有以下特点：①广泛的肝细胞变性坏死，再生的肝细胞形成不规则排列的肝细胞再生结节；②结缔组织增生，始于汇管区及包膜下，向肝小叶内延伸，与肝小叶内结缔组织联合成膜样结构，把肝小叶分隔而改变成假小叶；③在假小叶内，中央静脉常偏居小叶的一侧，门静脉、肝静脉与肝动脉小支间可发生直接交通而出现短路；④在增生的结缔组织中有程度不等的炎细胞浸润，并可见到胆管样结构（假胆管）。本研究苏木精²伊红染色亦显示右半肝肝硬化较左半肝肝硬化者明显增多。
为探讨肝硬化病人左右半肝肝硬化存在明显差异的机制，我们应用免疫组化方法对肝硬化相关因子MMP2及bFGF2的表达进行检测。现已证实，MMP2及bFGF2在乙型肝炎肝硬化中起重要作用，两因子表达可比较客观反映出肝硬化的程度。
肝硬化主要是由于肝脏细胞外基质（ECM）代谢失衡，合成超过降解所致。MMP2的功能是降解肝脏ECM,许多研究结果都表明，随着肝纤维化的发生发展,MMP2的表达与活性明显增加[4]。此外,MMP2能促进活化的肝星状细胞（HSC）增殖，并可能以自分泌的形式作用于HSC,从而加剧肝纤维化的发生发展。在正常人肝脏组织中MMP2很少或检测不到。WATANABE等[5]和EL²GINDY等[6]研究显示，MMP2对诊断肝硬化有较高的敏感性。
目前研究显示, bFGF 在正常细胞不表达或弱表达,而在肝纤维化、肝硬化时,bFGF 表达主要见于纤维间隔区、肝窦内皮细胞、肝细胞、纤维母细胞及再生肝细胞等,且胞浆中亦呈高表达,并随着纤维化程度增高而增强[7]。在肝病的早期阶段,由于肝组织发生微循环障碍而合成bFGF 增加,bFGF 有助于HSC 的分裂和增殖,增强HSC 的游走性, 而HSC 的激活是肝纤维化发生的中心环节,从而推动肝纤维化不断向前发展。bFGF 另一个重要功能是促进ECM的沉积。
本研究应用免疫组化方法对30例肝硬化及15例对照肝组织中MMP2和bFGF2的表达进行了检测，结果表明，MMP2的表达对左右半肝纤维化程度存在明显差异性起重要作用，bFGF2的表达可能起一定作用。
综上所述，肝硬化时左、右半肝发生肝硬化程度存在显著差异，右半肝萎缩较左半肝萎缩者明显增多。本文结果为我们今后在治疗肝硬化并肝癌时，手术切除肝组织大小及部位提供了新的理论依据。
【参考文献】
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[3]李玉林,唐建武. 病理学[M]. 第6版.北京:人民卫生出版社, 2004:2052209.
[4]曹名波. 基质金属蛋白酶及其抑制物与肝纤维化[J]. 国外医学:消化系疾病分册， 2005,25:1142117.
[5]WATANABE T, NIIOKA M, ISHIKAWA A, et al. Dyna2mic change of cells expressing MMP22 mRNA and MT12MMP mRNA in the recovery from liver fibrosis in the rat[J]. J Hepatol, 2001,35(4):4652473.
[6]EL2GINDY I, EL RAHMAN A T, EL2ALIM M A, et al. Diagnostic potential of serum matrix metalloproteinase22 and tissue inhibitor of metalloproteinase21as non2invasive markers of hepatic fibrosis in patients with HCV related chronic liver disease[J]. Egypt J Immunol, 2003,10(1):27235.
[7]OKADA2BAN M, THIERY J P, JOUANNEAU J. Fibroblast growth factor22[J]. Int J Biochem Cell Biol, 2000,32:2632267.
作者单位：烟台毓璜顶医院肝胆外科，山东 烟台 266400