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Hubei Cancer Institute，Wuhan，Hubei430079.
【Abstract】 Objective In recent years，cyclinE，P27 kip1 ，P63and sruvivin proteins were found to be closed associated with tumorigenesis.To investigate the expression of cyclinE，P27 kip1 ，P63and survivin;and biological signifiˉcance in esophageal squamous carcinomas.Methods The expression of cyclinE，P27 kip1 ，P63and survivin in82cases of esophageal squamous carcinoma were detected using immunohistochemical method.Results The P63was expressed in73of82（89.02%）cases，positive rate of survivin was59.76%（49/82）.Upregulated expression of P63and surˉvivin were strongly associated with poor differentiation，positive rate of cyclinE and P27 kip1 were31.71%（26/82）and42.68%（35/82），respectively.With the lesions progressed，the strong expression for cyclinE increased apparently;in contrast，P27 kip1 decreased with the lesion progressed.Normal esophageal mucosa tissue did not express.Conclusion P63may be closed correlated with tumorigenesis.High-expression of surviving indicates poor prognosis.Abnormal exˉpression of cyclinE and P27 kip1 may be one of the important molecular changes in the early stage of esophageal carcinoˉgenesis，and high-expression of cyclinE and low-expression P27 kip1 may be one of the mechanisms to drive the mild lesion towards carcinogenesis.
Key words esophageal squamous carcinoma cyclinE P27 kip1 P63 survivin immunohistochemical
研究显示，细胞周期调节蛋白、细胞周期蛋白依赖激酶（cdks）和细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂（cdkIs）在细胞周期进程中起重要作用。G 1 期细胞周期调节蛋白，如cyclinD1和cyclinE1与cdk4和cdk2的相互作用可调节G 1 进程，而cyclins和cdks的相互作用又受cdkIs的GIP/KIP家族，p21、p27和p57以及INK4家族p16、p15、p18和p19调控。近年诸多研究表明，存活素（survivin）作为一种新发现的凋亡抑制蛋白在人类众多恶性肿瘤中表达，具有强烈的凋亡抑制功能和促细胞增殖活性，并与部分肿瘤的血管生成和预后有密切关系。P63是新发现的P53蛋白的同源蛋白，可能参与上皮组织的正常发生和分化以及形态学的发生，并可以促进肿瘤的生长。我们应用免疫组化方法同时检测cyˉclinE、P27 kip1 、P63、survivin在食管鳞癌中的表达情况，旨在探讨cyclinE、P27 kip1 、P63、survivin的表达与食管鳞癌的发生、发展关系和生物学意义。
1 材料与方法
1.1 材料 选取湖北省肿瘤医院及省内其他医院近两年经手术切除的食管鳞状细胞癌存档蜡块82例，男53例，女29例。年龄在37～75岁之间，平均年龄56.9岁。
全部标本的组织切片在实验前均进行常规HE染色，由高年资病理医生再次病理证实并按细胞分化程度分为高分化癌、中分化癌、低分化癌。另外选取经病理证实的形态学正常的食管手术残端粘膜组织作为正常对照。
1.2 免疫组化（IHC）检测 P63、survivin购自中山生物技术公司，cyclinE、P27 kip1 购自长岛生物技术公司。实验采用免疫组化S-P方法，具体操作参照说明书进行。按试剂盒提供的说明书进行操作。实验分别设阴性、阳性对照和正常对照。免疫组化检测中cyclinE、P27 kip1 、P63、survivin抗原阳性判定标准:阳性细胞为细胞和细胞浆呈深黄色颗粒或棕黄色颗粒。背景不着色。随机记数100个鳞状上皮细胞中阳性细胞数，用百分率表示:1%～25%为+，26%～50%为++，51%～75%为+++，76%～100为++++。
2 结果
cyclinE、P27 kip1 、P63、survivin在食管鳞癌中的表达:P63在食管鳞癌中的阳性表达率为89.02%（73/82）。食管鳞癌的组织分化程度越低，阳性细胞数越高，细胞的着色越深。Survivin在食管鳞癌中的阳性表达率为59.76%（49/82），与P63蛋白相同，随着食管鳞癌的组织分化程度越低，survivin蛋白的表达越强。cyclinE和P27 kip1 的阳性表达率分别是31.71%（26/82）和42.68%（35/82）。cyclinE的表达的阳性细胞主要是腺癌细胞，随病程发展，cyclinE蛋白的表达也随之增强。P27 kip1 蛋白主要为腺体阳性表达，而且阳性细胞着色强度由组织表层向癌巢逐渐减弱。cyclinE、P27 kip1 、P63、survivin正常食管粘膜组织中均没有表达。
3 讨论
随着分子生物学技术的发展，人们应用多种方法对食管癌变进行深入研究，认为食管癌变是一个多阶段、多因素、进行性的发展过程。P63基因是近年发现的另一个P53基因家族成员，定位于3q27-3q29。P63与P53具有十分相似的结构和功能 ［1］ 。P63在肿瘤细胞内的高表达，可能诱发P53缺陷的肿瘤细胞凋亡;也可能和P53结合并激活P21及Bax等相关启动子;P63主要表达于上皮组织的基底层，提示P63可能是与生长发育相关的基因［2］ 。本实验结果显示，在82例食管鳞癌组织中有73例P63阳性表达，阳性表达率为89.02%（73/82）。食管鳞癌的组织分化程度越低，阳性细胞数越高，细胞的着色越深。证明在食管鳞癌组织中存在着P63基因的过度表达，提示P63可能参与了调控食管鳞状细胞癌的发生、发展过程。研究表明，survivin在 细胞中呈周期依赖性表达，与有丝分裂期纺锤体微管相互作用，调节G 2 /M期，可直接抑制caspase-3和caspase-7的活性。在肿瘤发生发展中，survivin与肿瘤细胞的凋亡负相关，与细胞增殖活性和血管生成正相关 ［3］ 。人类肿瘤中survivin表达上调可能预示生存期缩短和预后不良。我们的研究显示，Survivin在食管鳞癌中的阳性表达率为59.76%（49/82），与P63蛋白的表达相似，随着survivin蛋白表达增强，survivin蛋白阳性细胞百分数也相应升高，食管鳞癌的组织分化程度就越低，提示survivin的高表达可能预示食管癌患者预后不良。食管癌患者生存期与survivin过度表达之间关系以及survivin与P63在肿瘤的发展进程中的协同作用有待随访后做进一步研究。P27可以和cyclin/cdk复合物结合而抑制细胞增殖，是一种细胞周期调节因子。研究结果显示，P27 kip1 的表达随病程的发展而呈下降趋势。cyclinE是cdc2的调节亚单位，是细胞周期中G 1 期进入S期的一个主要调控因子，其复合异构体仅在肿瘤中表达，正常组织一般不表达。显示其具有后翻译调节作用。cyclinE扩增和过度表达可能是肿瘤发生的早期事件 ［4］ 。cyclinE在Barrett食管和食管腺癌中约有50%的高表达 ［5］ 。本实验结果提示，cyclinE、P72 kip1 、P63和survivin在食管癌中的表达程度可能对食管癌的诊断和监测预后具有重要临床意义。
参考文献
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（收稿日期:2004-08-16）
作者单位:430079武汉湖北省肿瘤研究所
430079湖北省肿瘤医院病理科
（编辑海 涛）