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1 材料与方法
选用Wistar大鼠150只（由吉林大学动物实验中心提供），体重（150±10）g，显微镜下暴露一侧颈动脉长度约1.0cm，正中横断血管，生理盐水冲洗血管腔。缝合组颈动脉采用11-0尼龙线等针距缝合8针端端吻合作对照。激光吻合前采用11-0尼龙线三定点端端吻合法等针距缝合3针对合血管断端，（120±20）mW的光束脉冲式对断端进行照射，吻合成功后去除支持线。
于术后1d、3d、5d、7d、10d、13d、16d各取5只大鼠剖杀采取吻合口在内的血管一段进行透射电子显微镜、TUNEL法检测细胞凋亡和增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组织化学检测。统计学分析:所得数据采用χ 2 检验分析。
2 结果
透射电镜下凋亡的血管内皮细胞和平滑肌细胞亚显微结构表现为细胞核明显固缩，染色质浓缩，偏向一侧，呈新月体状，而正常血管内皮细胞和血管平滑肌细胞核明显大于凋亡细胞核，无染色质浓缩、偏集和细胞核固缩。
血管吻合7天以前吻合口血管内皮细胞和平滑肌细胞增殖细胞核抗原指数均大于凋亡指数，其差异有非常显著性（P<0.01）;平滑肌细胞增殖细胞核抗原指数大于血管内皮细胞，差异具有显著性（P<0.05）;平滑肌细胞凋亡指数与血管内皮细胞差异无显著性（P>0.05）。激光组吻合口血管内皮细胞和平滑肌细胞增殖细胞核抗原指数均大于缝合组，其差异有非常显著性（P<0.01）;激光组吻合口血管内皮细胞和平滑肌细胞凋亡指数与缝合组差异无显著性（P>0.05）。
血管吻合7天以后吻合口血管内皮细胞和平滑肌细胞凋亡指数大于增殖细胞核抗原指数，差异具有显著性（P<0.05）;激光组吻合口血管内皮细胞和平滑肌细胞凋亡指数大于缝合组，差异具有非常显著性（P<0.01）;激光组平滑肌细胞凋亡指数大于血管内皮细胞，差异具有显著性（P<0.05），缝合组平滑肌细胞凋亡指数小于血管内皮细胞，差异具有显著性（P<0.05）。
3 讨论
血管吻合口修复存在血管内皮细胞和平滑肌细胞增殖和凋亡的动态平衡。增殖细胞核抗原（PCNA）是反映细胞增殖的可靠指标，当血管内皮细胞和平滑肌细胞生长活跃时，PCNA以强阳性的表达。当细胞核中的PCNA增强时，可以吸引细胞间质中的巨噬细胞增多，巨噬细胞通过分泌细胞因子促进血管内皮细胞和平滑肌细胞增殖。激光吻合血管手术操作时间短，避免缝线过多、缝合过紧、结扎造成血管壁全层或部分裂伤，最大限度减少血管内皮细胞和平滑肌细胞损伤，保持充分血液供应促进血管内皮细胞和平滑肌细胞增殖。适当剂量的激光照射能增强细胞的有丝分裂并活化增殖过程。由于缝线吻合对血管壁破坏严重，缝合组血管由于缝线产生严重异物反应。缝线损伤的血管壁发生炎症反应，限制血管内皮细胞和平滑肌细胞增殖，影响血管吻合口早期修复，实验证实激光吻合血管愈合速度明显大于缝合组 ［1］ 。严重异物反应，大量单核/巨噬细胞趋化并激活平滑肌细胞过度增殖也是引起吻合口狭窄的细胞学基础。
在修复细胞增殖的同时，机体适时启动细胞凋亡基因诱导细胞凋亡 ［2］ 。大量血管内皮细胞凋亡可促进单核/巨噬细胞趋化并激活，分泌多种炎症因子和细胞因子，诱导平滑肌细胞迁移和增殖，缝合组血管内皮细胞大量凋亡可启动平滑肌细胞增殖过程。巨噬细胞减少导致细胞因子生长依赖的血管内皮细胞凋亡 ［3］ ，故后期吻合口血管内皮细胞和平滑肌细胞凋亡指数大于增殖细胞核抗原指数。激光吻合血管吻合口没有异物残留，巨噬细胞存在时间短，激光组吻合口血管内皮细胞和平滑肌细胞凋亡指数大于缝合组。激光吻合组平滑肌细胞凋亡指数大于血管内皮细胞可保证血管吻合口通畅。
在实验过程中应该选择微型、智能化激光吻合机使激光吻合更加规范、标准 ［4］ ，最大限度减少血管损伤达到最佳修复效果。
参考文献
1 刘珍，王奕，于惠秋，等.激光焊接大鼠颈动脉的生物力学研究.浙江临床医学，2004，11:930-931.
2 Blagosklonny MV.A node between proliferation，apoptosis and growth arrest.Bioessays，1999，21:704-709.
3 Zhang LX，WangZ，Yang GP，et al.The effect of the angiogenesis in-hibitor，angiostatin，on hypertrophic scarring.J Surg Res，2003，114:262.
4 刘珍，刘铜军，王忠义.激光焊接皮肤研究的某些进展.中国激光医学杂志，2004，1:51-52.
* 基金项目:温州市科技计划项目（Y2003A106）
作者单位:325000浙江省温州市第三人民医院