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【摘要】 目的 对口腔鳞癌转化生长因子β2(TGF-β2)的蛋白表达进行研究，探讨转化生长因子β2(TGF-β2)和口腔鳞癌侵袭及转移的关系。方法 采用SABC免疫组织化学法对口腔鳞癌共40例标本的癌灶组织中TGF-β2的蛋白表达水平进行研究。结果 与正常组织相比，口腔鳞癌中TGF-β2的蛋白表达呈过量表达，TGF-β2表达与口腔鳞癌临床病理分级、临床分期及颈淋巴结转移显著相关。结论 TGF-β2可能与口腔鳞癌的侵袭和转移有密切关系。
【关键词】 转化生长因子β；口腔鳞癌；转移
Expression of transforming growth factor β2 in oral squamous cell carcinoma
MAO Tian-xiang,HU Wen-lan,LIANG Xue-jun,et al.
Xiantao Stomatological Hospital,Xiantao,Hubei 433000,China
【Abstract】 Objective To detect the role of transforming growth factor β2(TGF-β2) on the invasiveness and metastasis of human oral squamous cell carcinoma.Methods Using SABC immunohistochemical method to determine the expression of TGF-β2 in 40 cases of oral squamus cell carcinoma.Results The expression of TGF-β protein were overexpressed in oral squamous cell carcinoma,comparing to the normal oral mucosa;TGF-β2 expression was associated with clinical stage,pathological grade and neck lymph node metastasis.Conclusion TGF-β2 may related with invasive and metastasis of oral squamous cell carcinoma.
【Key words】 transforming growth factor β;oral squamous cell carcinoma;metastasis
口腔鳞癌是口腔颌面最常见的恶性肿瘤之一，目前对其生物学行为和其进展、转移的原因仍了解较少。研究发现转化生长因子β(Transforming growth factor β,TGF-β)是一类具有广泛功能的多肽类生长因子，能调节体内多种细胞的增殖、分化，参与创伤修复，免疫调节，血管形成等多种生物学过程受到广泛关注。TGF-β2是TGF-β家族成员之一，近年来研究发现TGF-β2与乳腺癌、结肠癌、前列腺癌等多种肿瘤的发生发展密切相关［1～3］，TGF-β2与口腔鳞癌的关系如何目前尚未见报道，我们通过检测TGF-β2在口腔鳞癌中的表达，探讨其与口腔鳞癌临床病理特征的关系。
1 资料与方法
1.1 材料 40例口腔鳞癌选自我院1998年5月～2000年3月间手术的患者，患者术前未经化疗、放疗或生物治疗。其中男27例，女13例，年龄22～78岁。按照原发灶部位，其中舌癌21例，颊癌5例，牙龈癌9例，口底癌5例。病理分级为高分化鳞癌11例，中分化鳞癌20例，低分化鳞癌9例。有颈淋巴结转移者13例，无转移者27例，临床分期为Ⅰ期8例，Ⅱ期13例，Ⅲ期10例，Ⅳ期9例。所有原发灶及颈淋巴结转移灶均经病理证实。对照组20例正常口腔黏膜来自非肿瘤患者手术标本。
1.2 试剂和方法 鼠抗人TGF-β2多克隆抗体，SABC试剂盒，DAB显色试剂盒均购自武汉博士德公司。手术切除的组织标本经石蜡包埋切片，连续切片5张，厚约5μm。采用SABC法，免疫组化染色程序按试剂盒说明书进行。操作步骤如下：切片脱蜡至水，新鲜配制的3%双氧水浸泡10min，以消除内源性过氧化物酶；抗原修复，正常兔血清孵育30min，滴加鼠抗人TGF-β2多克隆抗体，4℃过夜；滴加生物素化山羊抗小鼠IgG,37℃孵育20min;滴加试剂SABC，37℃孵育30min；DAB显微镜下控制显色；上述各步之后均用0.01mol/L PBS振荡漂洗3次，每次5min；苏木素复染，脱水透明，封片，显微镜下观察。阴性对照以PBS代替一抗，其余步骤相同。阳性对照采用自身对照，用PBS代替一抗和二抗作阴性对照。
1.3 免疫组化结果判定 在不知任何背景资料的情形下，采用双盲法进行判定，以肿瘤细胞膜和(或)胞浆出现淡至深棕黄色颗粒为阳性。显微镜下观察，染色结果按阳性细胞百分比，阳性细胞数＜5%为阴性(-)，阳性细胞数在5%～20%之间为(+)，阳性细胞数在25%～75%之间为中等阳性(++)，阳性细胞数＞75%为强阳性(+++)。
1.4 统计学处理 采用Kendall tau 等级相关分析。
2 结果
2.1 TGF-β2免疫组化特征 TGF-β2阳性物质分布于细胞内，细胞膜不着色，阳性颗粒在细胞浆中粗细不等，在正常口腔黏膜和口腔鳞癌组织中均有表达，但染色程度存在差异。正常口腔黏膜组织可见少量着色，癌组织中阳性物质主要分布在癌巢边缘的肿瘤细胞上，与正常口腔黏膜染色强度相比，TGF-β2在癌组织中呈过量表达。
2.2 TGF-β2与口腔鳞癌临床病理特征的关系 40例口腔鳞癌中，阴性6例，弱阳性6例，中等阳性12例，强阳性16例。根据Kendall tau等级相关检验，可见TGF-β2表达与口腔鳞癌临床病理分级、临床分期及颈淋巴结转移显著相关(见表1)。
表1 TGF-β2表达与口腔鳞癌临床病理特征的关系（略）
3 讨论
TGF-β2是细胞生长、分化的负性调控因子，对细胞的增殖、分化起双重调节作用。研究发现，TGF-β2的生长调节作用与细胞类型有关：对纤维母细胞，TGF-β2能促进其生长，这一作用通过血小板源生长因子(PDGF)来介导［4］；对上皮来源的细胞，TGF-β2有生长抑制作用，TGF-β2使培养细胞阻滞于G1期；同时伴有RB基因低磷酸化。若在RB蛋白磷酸化而失活后加入TGF-β2即失去细胞生长抑制作用［5］，因此提示TGF-β2可能通过RB蛋白发挥生长抑制作用。另外TGF-β2有明显的免疫抑制作用，能抑制T细胞和B细胞生长，抑制B细胞合成免疫球蛋白及NK细胞的细胞毒作用，若将TGF-β2基因转至具有免疫原性的纤维肉瘤细胞，可使其对裸鼠致病率大大提高［6］。
近年来TGF-β2在肿瘤形成和预后中的作用已逐渐引起人们的重视。Maxwell等［7］研究发现TGF-β2在脑胶质瘤中有过量表达，而在正常组织中无过量表达，TGF-β2的表达与脑胶质瘤的恶性程度和预后有关。本研究发现TGF-β2在正常口腔黏膜中有少量表达，可能与TGF-β2对上皮细胞有抑制作用有关。在口腔鳞癌组织中TGF-β2表达与正常口腔黏膜相比呈过表达，这与文献报导TGF-β2在其他肿瘤中的研究结果相一致［1～3］。口腔鳞癌TGF-β2的表达与口腔鳞癌病理分级、临床分期及有无淋巴结转移密切相关，结果表明TGF-β2表达越强，口腔鳞癌分化越差，其恶性程度越高，越易发生转移，提示TGF-β2可能参与了口腔鳞癌的发生发展及颈淋巴结转移过程。口腔鳞癌中的各部分的增殖能力是不同的，在口腔鳞癌中增殖能力强的细胞是位于癌巢边缘的肿瘤细胞，癌巢边缘的肿瘤细胞比癌巢中心部位的肿瘤细胞其增殖能力强5～10倍［8］，增殖能力越强，越易发生转移。本研究中TGF-β2的表达位于癌巢边缘的肿瘤细胞，可能与其不同的增殖能力有关。提示TGF-β2是由肿瘤细胞分泌的，TGF-β2在口腔鳞癌中的过表达可能与其合成、分泌增加或释放机制有关。
对TGF-β2如何导致正常细胞恶性转化的机理目前尚不清楚。近年来研究表明TGF-β是细胞信号转导系统中的一部分，TGF-β的功能和作用是通过其表面的Ⅰ型、Ⅱ型受体(TβR)起作用的，Ⅰ型和Ⅱ型受体属于跨膜的丝氨酸/苏氨酸激酶，TGF-β与Ⅰ型、Ⅱ型受体结合后形成异聚体复合物。TGF-β与受体间的相互作用对完成TGF-β的作用是不可或缺的。因此探讨TGF-β2与口腔鳞癌侵袭和转移的关系时，尚需从多方面做深入的研究。
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7 Maxwell M,Galanopoulos T,Neville-Golden J,et al.Effect of the expression of transforming growth factor-β2 in primary human glioblastoma on immunosuppression and loss of immune surveillance.J Neuro Surg,1992,76(5):799-804.
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(编辑：守 中)
作者单位： 433000 湖北仙桃，仙桃市口腔医院
422000 湖北松滋，松滋市人民医院
430079 湖北武汉，武汉大学口腔医院