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Home医源资料库在线期刊中华医学研究杂志2006年第6卷第5期

龙葵有效成分的提取方法及定量

来源:中华医学研究杂志
摘要:【摘要】据《本草纲目》记载,龙葵为我国的传统中草药,具有清热解毒,活血散瘀,消水利肿,止咳祛痰的功效。近年来龙葵在抗肿瘤、抗高血压等方面取得的临床疗效得到越来越多的关注,同时其有效成分提取方法也得到更深一层的研究。【关键词】龙葵。提取龙葵属茄科茄属,一年生草本植物。...

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    【摘要】  据《本草纲目》记载,龙葵为我国的传统中草药,具有清热解毒,活血散瘀,消水利肿,止咳祛痰的功效。近年来龙葵在抗肿瘤、抗高血压等方面取得的临床疗效得到越来越多的关注,同时其有效成分提取方法也得到更深一层的研究。

    【关键词】  龙葵;药物;提取
   
    龙葵属茄科茄属,一年生草本植物。根据其果色及有关性状可分为四个类型,龙葵、少花龙葵、黄花龙葵和黄果龙葵。龙葵广泛分布在我国大江南北,可全草入药,可内服外用。1961年LARSEN首先开始了龙葵药理毒理学的研究[1],此后,海内外科学家在中医理论基础的指导下对其单味和复方制剂的临床疗效进行了系统的研究,并对其单味制剂进行提纯分析,获得了大量有临床参考价值的客观数据资料。龙葵除了含有多种营养价值的成分,如氨基酸、矿物质和多种维生素之外[2],在治疗上主要起关键作用的成分是生物碱和多糖。龙葵全草所含的生物碱有澳洲茄碱和澳洲茄边碱等[3],从目前的资料来看,其提取工艺虽然还没有统一的规定,但已经形成了一定的规模并取得了一些突破。下面就其主要的提取方法进行介绍。

  1  龙葵生物碱的提取

  1.1  醇回流提取法[4]  取龙葵全草,粉碎后过200目筛备用。准确称取龙葵全草干燥粉末120g,于2000ml三角瓶内加入90%乙醇2000ml,在恒温60℃的条件下搅拌5h后,在相同条件下以相同的乙醇提取2次,滤渣弃去,合并乙醇滤液,蒸馏回收乙醇,得浓缩液,经轻压蒸干后溶于40ml HAC溶液中,准确提取同体积的氯仿进行萃取,弃去氯仿层,用浓氨水调至pH=10左右,再用等体积的氯仿进行萃取。氯仿层与浓硫酸有显色反应,与碘-碘化钾试剂有沉淀反应。氯仿层溶液经处理后得到白色粉末,主要成分为澳洲茄碱、澳洲茄边碱等生物碱。酸溶碱沉氯仿萃取的工艺可能导致龙葵生物碱的乳化。但通过对温度和乙醇质量分数的摸索可以得到最有利的提取条件。在含量测定方面,澳洲茄碱和澳洲茄边碱的苷元均为澳洲茄胺,澳洲茄胺的分子结构中不含共扼双键,当用HPLC测定时灵敏度较低,实验证明,用薄层扫描法测定龙葵中澳洲茄胺的含量有专属性灵敏度高、稳定性好等特点[5]。

  1.2  微波辅助提取法  生物碱的提取常见的是回流提取法,存在费时多,效率低下的问题,自Ganzler[6]1986年首先将微波辅助提取法应用于天然植物活性成分的提取之后,其简便易行,高效省时的特点得到广泛的采纳。      微波辅助提取的预备实验表明[7],提取时间、提取功率和料液比对提取效率的影响最大,因此,须选择三因素三水平的正交实验来寻求最佳的工艺条件,经实验分析,影响显著性的顺序为:功率>时间>料液比,最佳的工艺条件为料液比1:20,在585W功率下提取8min。通过薄层色谱(TLC),反向高效液相色谱(RP-HPLC)定性分析显示,微波对生物碱有效成分的结构没有造成影响,同时对提取前后的样品进行的扫描电镜(SEM)分析结果显示,未经处理的组织细胞呈密闭状态,表面粗糙,传统的回流提取3h后,组织细胞呈扩张状态,有效成分释放出来,但各细胞保持规则状态,微波辅助提取3min后所不同的是,细胞壁由于温度的突发升高而发生扭曲,细胞壁已经完全破坏碎,不再有规则形态存在,从而使有效成分大量涌出,这解释了微波辅助提取的效率高于传统回流提取的原因。

  2  龙葵水溶性多糖的提取
     
  近20年来对多糖的研究表明,多糖能用于治疗肝炎、风湿痛、癌症艾滋病等[8],同时多糖的研究给肿瘤化疗开辟了新途径。现将龙葵的水溶性多糖成分介绍如下[9]。

  采集龙葵新鲜全草样品,切碎后用95%乙醇浸泡2个月,晒干。取干燥龙葵1kg,加10kg蒸馏水,沸水浴中加热6h,共2次,过滤,浓缩至850ml,在浓缩液中加入850ml乙醇,离心、干燥得棕色固体A为粗多糖提取物,将提取物加水溶解,采用Sevage法除蛋白质(水合茚三酮呈阴性反应)。再经过反复的溶解醇析,得到初步纯化的固体样品B 0.8g,EDTA纤维素柱层析上样固体B,上样体积为16.2ml,以1mol/L的NaCl为上限溶液进行梯度洗脱,分别收集二主峰用无水乙醇沉淀、干燥,凝胶G-100柱层析,以蒸馏水洗脱,收集其中单峰区域部分(2、5主峰),浓缩后加无水乙醇,沉淀干燥。通过三种浓度的乙醇沉淀的比旋度测定结果表明各组分都为均一成分。再通过红外光谱的分析,两组分在840cm-1,890cm-1有吸收,表明有a、β型糖苷键,再经过HPLC和Smith降解分析结果认为,其中一组分为1,4或1,4,6GlC残基,另一组分是以1,3或1,3,6Glc残基为主通过α、β苷键结合而成。

  关于龙葵的各种药用价值的学术报道屡见于海内外的医药刊物,对其有效成分提取的深入探讨将更加有利地促进其在医疗上的研究以及疗效的确定,为以后的开发和利用提供参考。

  【参考文献】

  1  Larsen K.Medicinal and poisonous plants I.Solanum nigrum and solanum dulcamara.Nord Med,1961,10(12):1418.

  2  米拉.野生龙葵果中营养成分的研究.内蒙古农业大学学报,2000,21(3):98.

  3  李秀霞,张海洋.龙葵的药理作用及临床应用.佳木斯医学院学报,1998,21(1):23.

  4  刘颖,张燕玲,王雁.从天然植物龙葵中提取生物碱的工艺研究.辽宁丝绸,2003,(2):32.

  5  梁生旺,王浴铭,张广强,等.薄层扫描法测定龙葵中澳洲茄胺的含量.中国药学杂志,1997,32(8):494.

  6  Ganzler K.A novel sample preparation method for chromatography.J Chromatography,1986,(371):299.

  7  刘覃,陈小青,蒋新宇,等.微波辅助提取龙葵中总生物碱的研究.天然产物研究与开发,2005,17(1):65.

  8  Hatanaka K,Yoshida T,Miyahara S,et al.Synthes of New Hepar inoids with high antiagulant activity.J Med Chem,1987,30:810.

  9  方积年.多糖的分离、纯化及其纯度鉴别与分子量测定.药学通报,1984,19:10.

  作者单位: 515041 广东汕头,汕头大学医学院第一附属医院

  (编辑:秋  实)

作者: 汤丹灵,林朝仙,杨快儿,杨倚华 2006-8-19
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