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[关键词] 组织染色；免疫组化；原位杂交
免疫组织化学、原位杂交等染色后显微镜观察满意的片子，为保存结果，以便进一步观察、照像、统计分析等，需作封片处理。如何才能将切片封好，使染色结果清晰、无水珠，是一个值得注意的问题。传统的封片步骤为：将干燥的片子进梯度酒精脱水、二甲苯透明，然后中性树胶封片。传统方法步骤较多，耗时长，且有时因梯度酒精置换不干净，使细胞表面存有细水珠，影响观察照像等，对生长在盖玻片上的培养细胞，因其接种于多聚赖氨酸处理过的盖玻片上，盖玻片小而薄，在水、酒精、二甲苯等液体内不易认清正、反面，易导致盖玻片损坏。为此，我们在实验过程中对传统的封片方法进行了改进。现将该方法介绍如下，供同行参考。
1 封片前处理
组织切片，进行免疫组织化学和原位杂交实验常规显色，用0.01 mol的PBS或TB终止显色后，入蒸馏水洗3次。如是漂片染色，应在用蒸馏水漂洗后才将其裱在粘附剂处理过的载玻片上。对生长在盖玻片上的培养细胞，实验过程是在培养板内完成的，终止显色后，盖玻片用蒸馏水漂洗，洗后尽量吸出水份。经漂洗处理后的放有盖玻片的培养板或是贴附有组织的载玻片放入烤箱内，60 ℃，3 h，或37 ℃，2 d，彻底烤干。
2 封片
贴附于载玻片上的组织切片，可直接浸在二甲苯内，或直接滴加二甲苯于组织切片上进行透明，重复一次，组织彻底透明后滴加中性树胶，用干净的盖玻片封片即可。对于长有细胞的小盖玻片，烤干后放置于洁净的载玻片上，有细胞的一面朝向上，直接滴加二甲苯于盖玻片上，5～10 min后吸除并更换新的二甲苯一次，使细胞充分透明。另取洁净的载玻片滴加中性树胶，从原来的载玻片上轻轻取下盖玻片，将细胞面覆盖于中性树胶上封片。
3 体会
在实验过程中笔者体会到本方法具有如下优点：①简化了封片步骤，省略了梯度酒精脱水，节约了药品和时间；②避免因脱水不彻底而使组织封片后，组织细胞表面附着细小水珠，而影响结果的观察和照像；③组织用0.01 mol的PBS或TB终止显色后，再用蒸馏水漂洗3次，以防止干燥后组织切片上出现磷酸盐结晶，影响切片的清晰度；④生长有细胞的盖玻片在处理的过程中要注意区分正反面。
(第三军医大学基础医学部解剖学教研室，重庆400038)
（编辑：左艳芳）