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【关键词】 经皮肝穿；树鼩；实验动物
树鼩(Tupaia belangeri )是一种低等灵长类动物，具有体积小、数量多、分布广的优点，且具有对人类疾病相关病毒的易感性，因此树鼩作为肝炎的动物模型有着很多优点。在病毒性肝炎的实验中，常常要抽取活体肝脏作病理检查，但树鼩肝穿技术一直是实验者的一个难题。我们通过多次经皮盲穿树鼩肝脏，发现树鼩左侧卧位时，肝脏位于胸腔右下侧。在此启示下，本文作者建立了一种树鼩活体肝脏穿刺采集组织法，现报告如下。
1材料与方法
1.1实验动物 树鼩30只，雌雄不限，体重(140±200) g，昆明医学院实动物中心提供。穿刺的时间点为第1天、第15天、第30天、第60天，每次采肝量长3.0～5.0 mm，共4次。分别测定肝细胞颗粒变性、枯否氏细胞、炎细胞浸润、小叶结构情况、嗜酸性变、点状坏死等指标。
1.2方法按30 mg／kg体重，使用1 mL注射器经腹腔注射1％戊巴比妥钠溶液进行麻醉；或速眠新0.3～0.6mL/kg肌肉注射麻醉；或氯胺酮稀释成10 mg/mL，按10 mg/kg肌肉注射麻醉。麻醉成功后，树鼩左侧卧固定。倒数第3～4肋间备皮，用碘酒、酒精消毒，助手握住带软管和充满灭菌生理盐水的50 mL注射器，软管接到20号穿刺针，操作者右手持穿刺针，左手绷紧皮肤，针头与剑突成45°角进针，进入皮肤后，助手抽出5～10 Pa的压力，使针管内形成负压，针尖穿过肝脏时，助手回放压力，操作者反复抽提穿刺针，负压消失时退针，把针内的肝组织通过灭菌生理盐水推到滤纸上，经固定后送病理科检验。穿刺完毕，给予注射少量抗生素放回笼内保温。
2结果
应用本法肝穿树鼩120次，一次穿刺成功率达98％以上，用这种方法所取材料做病理切片，所要检验指标完整，能准确观察到病理组织变化，对树鼩病毒性肝炎模型成功与否的检测起到重要的作用。30只树鼩肝穿120次，死亡树鼩4只，死亡率13.3%，死亡时体重下降，无肝脏溃斑和其它大体病变。
3结论
本活体肝脏穿刺法操作简单、定位准确、肝穿量多，且一只树鼩可以重复多次穿刺而仍然成活是其最大特点。但应注意以下几点：①麻醉药浓度不宜过大，用量要准确。如用3％戊巴比妥钠，常因药量掌握不准致动物死亡。我们用1％的浓度和用1 mL刻度注射器，一次麻醉多只动物，提高了工作效率，麻醉效果又好。使用速眠新也必须按0.3～0.6 mL/kg稀释后注射；氯胺酮注射后容易流涎，但苏醒时间比较理想。②肝穿时，树鼩要保持“S”形体位，防止体位不正、刺伤内脏。③进针应沿肋间隙，边进针边回抽活塞，见有血液涌人针管时，立即退针重新穿刺，注射器内负压不宜过大，穿刺针反复插入深浅适宜，不宜过深以免损伤其它脏器。④天冷时肝穿后的树鼩要注意保暖，供给充足的饮水，增加饲料的营养。⑤穿刺后取右侧卧位，待麻醉苏醒，不得随意改变体位，目的是利用肝脏本身的重力压迫穿刺部位，以减少出血。 肝穿刺对机体是一种创伤［1］，但肝脏穿刺活检术是各种病毒性肝炎模型的常规操作技术［2］。实验动物经皮肝脏穿刺活检，没有腹腔镜或B超引导，存在肝脏大出血、胆漏、气胸、局部感染等并发症隐患［3］。实验中虽然发生率极低，但危害性大，所以要加强实验树鼩的饲养管理，增加营养，使创伤及早恢复。操作者要多练，技术娴熟后才能取得满意的穿刺结果。
【参考文献】
1］ 周良, 唐继来, 冯玉明, 等. 经皮经肝穿刺胆管引流治疗内镜难治性恶性胆道梗阻［J］.实用老年医学,2007,21(6）:401-402.
［2］ 梅筱玲，周敏. 肝穿刺前后的护理体会［J］.现代医药卫生,2006,22(9):1311.
［3］ 邱德凯．肝脏活体检查慢性肝病临床并发症［M］.上海：上海科技出版社,2001.28.
作者单位：昆明医学院实验动物中心，云南 昆明 650031