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【摘要】 目的 为了解决胆红素试剂的稳定性，尽量排除基质效应对测定的影响，本科室采用了双试剂方法测定。方法 对双试剂测定作了重复、线性、回收试验;分别对单、双试剂作了对比、试剂开瓶试验。结果 改良J-G法（Y）与双试剂法（X）相关性良好，相关方程为:Y TB =0.999X TB -0.482（r=0.998）;Y DB =1.011X DB +1.612（r=0.999）;总胆红素批内、批间高低平均变异系数分别为:1.34%、1.37%;3.22%、3.34%，平均回收率达98.8%，在0～470μmol/L范围内线性良好。直接胆红素批内、批间高低平均变异系数分别为:1.42%、1.50%;3.51%、3.62%，平均回收率达98.1%，在0～410μmol/L范围内线性良好。溶血、脂血样品TB 1 、DB 1 明显高于TB 2 、DB 2 ，无黄疸标本DB 1 也明显高于DB 2 ，黄疸标本两法间差异无显著性，双试剂工作液在2℃～30℃放置60天均稳定，单试剂在配制后2℃～30℃7天后试剂变黄结果明显偏低。结论 双试剂能提高试剂的稳定性，排除基质效应，更适合全自动分析测定。
关键词 胆红素 双试剂 全自动分析
为了解决胆红素试剂的稳定性，尽量排除基质效应对测定的影响，本科采用了双试剂方法测定。现报告如下。 1 材料与方法 1.1 试剂组成 Trace试剂。总胆红素试剂A:盐酸0.1mol/L，对氨基苯磺酶0.050mol/L，表面活性剂1%;试剂B:亚硝酸0.072mol/L;直接胆红素试剂A:盐酸0.165mol/L，对氨基苯磺酶0.029mol/L;试剂B:亚硝酸0.072mol/L。 1.2 试剂配制 1.2.1 TBil单试剂法（TB 1 ） 试剂A:试剂B=50:1，使用前混合。 1.2.2 TBil双试剂法（TB 2 ） 第一试剂R 1 为A;第二试剂R 2 为试剂B与双蒸水50:1配制使用。 1.2.3 DBil单试剂法（DB 1 ） 试剂A:试剂B=100:1，使用前混合。 1.2.4 DBil双试剂（DB 2 ） 第一试剂R 1 为A:第二试剂R 2 为试剂B与双蒸水100:1配制使用。 1.3 仪器 美国康宁560生化分析仪。 1.4 测定主要参数 见表1。 2 结果 2.1 方法比较 本方法与改良J-G法比较，改良J-G法（见全国临床检验操作规程第二版）为手工操作，设为Y，n=40，TB浓度2.76～456.3μmol/L，Y TB =0.995X TB +1.680，r=0.999，DB浓度0.89～402.8μmol/L，Y DB =1.011X DB +1.612，r=0.9984。 2.2 重复性试验 总胆红素批内n=10，ˉx 低 =34.3±0.46，CV%=1.34%;ˉx 高 =376.7±2.54，CV%=1.37%;直接胆红素批内n=10，ˉx 低 =11.9±0.14，CV%=1.42%，ˉx 高 =169.3±2.54，CV%=1.50%;总胆红素批间n=10（天），ˉx 低 =34.8±1.12，CV%=3.22%;ˉx 高=376.7±5.12，CV%=3.34%，直接胆红素批间n=10（天），ˉx 低 =22.5±0.79，CV%=3.51%;ˉx 高 =167.9±5.23，CV%=3.62%。 2.3 回收试验 取已知定值血清加入一定量标准品，测定其回收率，总胆红素回收率96.8%～102.7%，平均为99.5%;直接胆红素回收率为96.6%～103.2%，平均为98.8%。 表1 康宁560主要参数 注:ˇλ1为主波长，λ2为副波长，双试剂第一时间点为样品空白读数 2.4 线性试验 按NCCLS线性评价方法 ［1］ ，取TB、DB含量分别为:高值470μmol/L、410μmol/L;低值6.7μmol/L、3.6μmol/L的血清高低值等量混合得中值，中值血清与高低值血清等量混合得五种不同浓度的样品，对其进行测定，测得值（Y）与理论值（X）作统计学处理，回归方程Y TB =0.9973X TB -0.4965，r=0.9993;Y DB =1.016X DB +1.278，结果表明TB、DB分别在0～470μmol/L、0～410μmol/L范围内测定线性良好。 2.5 单双试剂对比试验 按NCCLS评价方法 ［2］ ，取50例TB、DB含量不同的血清标本（TB0.97～462.3μmol/L，DB0.54～398.2μmol/L），以本法（Y）和改良J-G（X）法同时测定，对结果进行统计学处理，回归方程分别Y TB =1.001X TB +0.489;（r=0.999）配对t检验，t=1.28<1.96，P>0.05两法测定差异无显著性，Y DB =0.987X DB +1.8751r=0.998;配对t检验，t=1.53<1.96，P>0.05两法测定差异无显著性;说明TB、DB双试剂测定方法与J-G测定方法一致性良好。 2.6 单、双试剂测定胆红素的比较 按NCCLS干扰试验评价方法 ［2］ 在常规标本中选择正常血清120例，溶血标本40例:Hb1.0～6.0g/L，脂血标本（脂浊度在±～3+）TG为1.89～12.7mmol/L;黄疸标本50例（TB26.9～469.1μmol/L， DB11.6～387.5μmol/L）同时用两种方法测定，结果见表2，由表2显示:溶血、脂血样品TB 1 、DB 1 明显高于TB 2 、DB 2 ，无黄疸标本DB 1 也明显高于DB 2 ，黄疸标本两法间差异无显著性，结果与文献 ［3］ 基本一致。 2.7 试剂开瓶试验 由表3显示，工作试剂单试剂在7天后使胆红素测定结果明显偏低，双试剂的工作试剂在60天内无明显变化，（注: ˇ 试剂配制后测定时间均在室温状态下操作，工作完成后再把工作试剂放回2℃～4℃冰箱）。 表2 单、双试剂测定胆红素的比较 注:类标本相同项目的方法间比较 ˇˇ P<0.001， ˇ P<0.05 表3 单双试剂开瓶试验观察时间 注:“/”表示没再测定 3 讨论 双试剂方法精密度良好，线性比单试剂明显提高，双试剂总胆红素、直接胆红素工作液增多为液体双试剂，经试验证明:双试剂工作液由于各工作液没单独的化学反应，试剂在2℃～4℃，室温均能稳定保存，无需临时配制工作液，既方便了工作，又提高了工作效率，由于双蒸水的加入最终使工作液的pH值发生了变化，缓冲液pH值对完成反应及反应速度有明显的变化，随着pH值的增高，反应速度加快，灵敏度增高 ［4］ ，样品空白、双波长参数的设置可以消除背景的吸收，减少样品的颜色和浊度所产生的影响，双波长对电源波动还有些补偿效果。（可能这也是双试剂测定方法线性提高的主要原因，有待探讨。）由试验结果表明溶血和脂血标本严重干扰单试TB 1 、DB 1 法，使血清胆红素假性增高，这主要归结于仪器参数的选择问题，单试剂法无法设置样品空白，而双试剂法能够有样品空白，这样就能有效地扣除共存基质的干扰，尽可能地排除误判、错判;正常血清TB测定单、双试剂变化不明显; DB单试剂法常高于6μmol/L，黄疸标本（无溶血，无脂血）两法有可比性。双试剂法（扣除样品空白的二点终点法）经试验及1年多的临床证实，确为一种方便、准确测定血清胆红素的常规方法，适用于具有参数设置为:双试剂、样品空白，双波长功能的生化分析仪使用。 参考文献 1 杨国昌，许叶，张抗.精密度评价和方法比较中NCCLS评价方案的应用.临床检验杂志，1999，17（1）:47-49. 2 杨国昌，许叶，张抗.线性评价和干扰试验中NCCLS价方案的应用.临床检验杂志，1999，17（3）:184-186. 3 黄维嘉，阳萍，陈宏础.双试剂自动分析法测定血清胆红素.临床检验杂志，1998，17（1）:30-31. 4 邱谷.高碘酸钠氧化法测定血清总胆红素.临床检验杂志，2000，18（6）:345-346. 作者单位:512300广东省韶关市仁化县人民医院检验科 （收稿日期:2004-02-04） （编辑