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【摘要】 目的 探讨原发性高血压患者血管紧张素Ⅱ受体-1（AT1R）基因多态性与双氢克尿噻降压疗效的相关性。方法 200例未服用过任何药物或者已停用抗高血压药物两周的原发性高血压患者入选本实验，其中符合研究目的且资料完整的共计177例，入选人群同时开始服用双氢克尿噻12.5mg/日，共6周，在服药前及服药后每两周记录血压数值一次。用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）及限制性酶切方法进行AT1R基因A1166-C位点的多态性分布检测，并测定入选者的空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白。入选人群按AT1R基因多态性分为AA、AC基因型两组。结果 双氢克尿噻对于AA及AC基因型原发性高血压患者的收缩压和舒张压均有明显的降压效果（P均<0.05），并且这种降压效果主要表现在用药后的前两周内。AA及AC基因型患者的收缩压下降程度的比较无统计学意义（P>0.05），而AC基因型患者的舒张压下降程度与AA基因型患者的比较差异有显著性（P<0.05）。结论 双氢克尿噻对于原发性高血压患者舒张压的降压效果可能与AT1R的基因型有关。
关键词 血管紧张素Ⅱ受体-1 基因多态性 原发性高血压 血压 双氢克尿噻 疗效
Correlation of angiotensinⅡTypeⅠReceptor gene A1166C polymorphism with the effect of antihypertensive treatment by hydrochlorothiazide
Gao Wenjing，Hao Bing，Wu Shouling，et al
Division of Cardiology，Affiliated Kailuan Hospital，Tangshan063000.
【Abstract】 Objective To study the correlation of AngiotensinⅡTypeⅠReceptor（AT1R）Gene A1166C Polymorphism with the effect of antihypertensive treatment by Hydrochlorothiazide in essential hypertensive patients.Methods 177hypertensive subjects who were untreated or who had untaken medicine for two weeks were enrolled.Blood pressure was measured before taking medicine and was examined every two weeks after taking Hydrochlorothˉiazide12.5mg per day for six week.Polymerase Chain Reaction（PCR）combined with restriction enzyme digestion was used to detect the variation of A1166C allele.Fasting blood glucose and serum cholesterol、triglyceride and high density lipid were measured in the enrolled subjects.The patients were characterized according to the observed alleles as AA or AC.Results The reduction in SBP was no statistical significant difference between AA and AC groups（P>0.05）.But the reduction in DBP of AC group was higher than that of AA droup（P<0.05）.Conclusion There may be correlation of AT1R A1166C polymorphism with the effect of antihypertensive treatment in DBP by Hyˉdrochlorothiazide in essential hypertensive patients.
Key words angiotensinⅡTypeⅠReceptor gene polymorphism essential hypertension blood presure Hydrochlorothiazide efficacy
尽管目前有多种不同类型的抗高血压药物，但是血压能被较好控制的患者仍然不到40% ［1］ ，不同的患者对于同一种抗高血压药物有不同的反应，患者对于抗高血压疗效的反应及药物副作用的个体差异与遗传有一定关系，因此目前对于某些基因多态性与各类抗高血压药物降压效果间的对应性研究颇受关注。肾素-血管紧张素系统（Renin angiotensin system，RAS）是体内调节血压和水电解质平衡的主要系统，刺激或抑制该系统可引起血压的变化，因此在原发性高血压（Essential Hypertension，EH）发病机理中起着重要的作用，编码RAS的基因被公认是与EH相关性最强的基因。RAS中的血管紧张素Ⅱ（angiotensin II，AngⅡ）收缩血管的作用主要是通过AngⅡ受体-1（AT1R）介导的 ［2］ ，本研究旨在观察抗高血压药物双氢克尿噻的降压效果与AT1R基因A1166C多态性的关系。
1 资料与方法
1.1 研究对象 本院2001年1月到4月收治的1～2级EH患者共200例，均未服用过任何抗高血压药物或者已停用抗高血压药物两周，其中符合研究目的且资料完整的共计177例，男92例，女85例，平均年龄（65±8）岁。血压的测量方法及诊断标准采用《1999WHO/ISH高血压治疗指南》。临床化验检查除外继发性高血压、其他心脑血管疾病、糖尿病、恶性肿瘤，严重肺部、肝脏、肾脏疾病。
1.2 实验方法 血液生化指标的测定应用自动生化分析仪，随时质控检测，性能稳定。检测AT1R基因:每例采晨起空腹静脉血3～5ml，2%EDTA抗凝，用低渗法分离白细胞，蛋白酶K消化，氯仿/异戊醇法提取DNA，TE保存。引物设计为:上游5′-ATAATGTAAGCTCATCCACC-3′，下游5′-GAGATTGCATTTCTGTCAGT-3′，PCR反应设置94℃预变性240s，后进入循环94℃变性60s，94℃退火60s，72℃延伸90s，循环30次，后延伸72℃，300s后结束反应。PCR扩增产物经DdeI酶切后，用2%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，紫外线灯下观察结果。
1.3 给药方法 入选人群同时开始服用双氢克尿噻（江苏省丹阳市药厂LotNo.242107）12.5mg/日，共6周，在服药前及服药后每两周记录血压数值一次，在观察期间不加用其它任何抗高血压药物或增减药量。
1.4 统计学方法 资料输入计算机，用Excel软件建立数据库，用SPSS10.0软件进行统计分析，计量资料用均数±标准差（ˉx±s）表示，组间计数资料比较用χ 2 检验，组间计量资料比较用t检验或方差分析，组间血压下降数值的比较因为方差不齐，故比较时采用秩和检验。P<0.05为有统计学意义。
2 结果
（1）AA、AC不同基因型间的性别、年龄、体重指数、胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、肌酐、血糖的比较无统计学差异，AA基因型组的收缩压和舒张压均较AC组的低，两组比较差异有显著性，见表1。
表1 AA、AC两组人群临床参数比较 （略）
（2）AA、AC两组基因型患者服用双氢克尿噻2周后收缩压和舒张压均有明显下降，（P均<0.05），并且这种降压效果主要表现在用药后的前2周内。服药4周及6周时的收缩压、舒张压与前一次的血压数值比较无统计学意义（P>0.05），见表2。
表2 AA、AC两组基因型患者治疗前、后收缩压、舒张压水平变化 （略）
注:组间比较 ※ P<0.05;组内比较 Δ P<0.05（服药后每经过两周与前一次血压值比较）
（3）AA及AC基因型患者的收缩压下降程度的比较无统计学意义（P>0.05），而AC基因型患者的舒张压下降程度与AA基因型患者的比较差异有显著性（P<0.05），见表3。
表3 AA、AC两组基因型患者治疗后收缩压、舒张压下降水平变化 （略）
注: 组间比较 ※ P<0.05
3 讨论
EH是一种由遗传因素和环境因素共同作用引起的多基因遗传病，尽管目前有多种不同类型的抗高血压药物，但是血压能被较好控制的患者仍然不到40% ［1］ ，这与EH发病需要一组易感基因和一组环境因素的共同作用、不同患者的发病可能存在这些因素的不同组合有关。基于EH发病机制的特点，目前对于高血压的治疗提倡个体化原则，对于某些基因多态性与各类抗高血压药物降压效果间的对应性研究也越来越受到重视。近年来一项在美国进行的TOHP临床实验进行了血管紧张素原（AGT）基因的G-6A多态性分析，发现AA基因型组在限盐摄入或减轻体重后，血压的降低程度显著大于GG基因型组，提示基因多态性分析可帮助我们估计患者对治疗的反应效果。
由于利尿剂可使尿钠排泄增加，使血浆容量、细胞外液容量和心输出量下降，以致使血压下降的作用已得到肯定，因此利尿剂在EH的治疗中被广泛应用。最近Turner等人在EH的个体化治疗的研究中发现噻嗪类利尿剂（双氢克尿噻）的降压效果与G蛋白β 3 亚基C825T基因多态性有关，研究表明噻嗪类利尿剂对于低血浆肾素、主要由容量负荷所致的EH患者中的TT基因型患者的收缩压和舒张压的降压效果与CC、CT基因型患者的相比疗效显著、两者比较差异有显著性 ［3］ 。本研究主要是探讨双氢克尿噻的疗效与AT1R基因多态性的关系，血管平滑肌细胞上主要存在的是AT1R，AT1R是调节血压的主要中介，它与AngⅡ结合后引起多种生物学效应，如血管收缩、醛固酮分泌、心肌细胞正性肌力作用;此外还参与AngⅡ的促有丝分裂原活性，引起血管平滑肌细胞增生、间质组织胶原表达以及心肌肥厚 ［4］ ，因此AT1R基因结构与表达量的变化与高血压关系密切。本研究结果显示，AA、AC两组基因型患者服用双氢克尿噻2周后收缩压和舒张压均有明显下降（P均<0.05），并且这种降压效果主要表现在用药后的前2周内，这与利尿剂在最初几周可使血容量降低以致使血压下降有关。双氢克尿噻对于不同基因型（AA、AC）EH患者收缩压的治疗效果的比较没有统计学意义，但AC基因型患者舒张压的降压幅度要明显大于AA基因型患者，两者比较差异有显著性。说明双氢克尿噻对于原发性高血压患者舒张压的降压效果可能与AT1R的基因型有关。了解不同基因型对于药物的不同反应，对于指导我们制定合理的治疗方案与估计疗效有一定的指导意义。
有研究表明，AT1R基因A1166C多态性与血浆血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）活性有关，但本实验没有测定不同基因型患者的血浆肾素活性水平、血浆醛固酮浓度、尿醛固酮排泄率、血浆AngⅡ活性水平等指标，因此尚不能解释不同基因型对于利尿剂的不同反应是否与血浆肾素活性水平、血浆AngⅡ水平及醛固酮的激活有关。另外本实验入选患者年龄较大、样本量较小，这是本实验不足之处。基于EH的特殊遗传背景，今后的研究除进一步扩大样本量，还要在基因 组的水平上，观察多个EH后选基因与药物疗效的关系。用分子生物学手段检测基因型对于药物开发及其疗效与作用的评估预测有极重要的意义，药物基因组学的研究进展将最终使我们能够根据基因分型结果实现EH患者个体化治疗。
参考文献
1 Meissner I，Whisnant J，Sheps S，et al.Detection and control of high blood pressure in the community:do we need a wake-up call?Hyperˉtension，1999，34:466-471.
2 Smith RD，Timmermans PB.Human angiotensin receptor subtypes.Curr Opin Nephrol Hypertens，1994，3:112-122.
3 Turner ST，Schwartz GL，Chapman AB，et al.C825T polymorphism of the protein beta（3）-subuint and antihypertensive response to a thiazide diuretic.Hypertension，2001，37:739-743.
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（收稿日期:2004-06-30）
（编辑守 中）
作者单位:063000河北唐山开滦集团公司医院心内科