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随着输血医学的不断发展，临床输用血小板需求量日趋增加。而目前国内外通用的血小板保存方法及供应数量、供给及时性远不能满足临床需要。常规保存方法（22℃，5d）极大的限制了血小板的临床应用。深低温保存可能是维持生物细胞、组织活性最理想的方法之一，也是许多研究人员目前致力的重要方向。宜昌市中心血站为满足临床危重病人的抢救需要，于2003年开展冰冻血小板的制备，笔者现对冰冻血小板的制备过程做一介绍和总结。
1 材料与方法
1.1 采集对象 血小板计数>150×10 9 /L，体检合格，1周内未服任何影响血小板功能的药物，来自本市的自愿献血者78名。均为男性，年龄20～48岁，平均34岁。
1.2 材料 CS—3000PLUS血细胞分离机、4R2210单采管道、二甲基亚砜（10ml装）、冰冻保护袋、塑料灌装针、注射器。
1.3 方法
1.3.1 采集方法 选择程序，分离夹为TNX-6，产品夹为A-35，采用16号针头双侧肘正中静脉连续流动式采血。采集后的血小板作外观检查，不可有血小板聚集和纤维蛋白析出。
1.3.2 冰冻方法 在无菌室操作台制备，单采血小板袋与专用冰冻保护袋相连，将血小板压入冰冻保护袋，连接塑料注入针，针尖部处于袋内中央，用注射器抽取二甲基亚砜，以1ml/min的速度缓慢注入袋内，边注边摇动冰冻保护袋，使之水平旋转，防止注入过程中产热。二甲基亚砜在产品中的终极浓度为5%。完毕后热合封口立即放入-80℃冰箱。
1.3.3 解冻复融方法 将冰冻的血小板取出后，置入42℃恒温水浴箱中，轻轻摇动冰冻袋，以防损伤，直至融化。融化后放置时间不宜过长，应立即输注给病人。
1.4 检测方法 分别在机采血小板制备及加入保护剂后留样，加入了保护剂的样本与产品同时冰冻，以备复融后检测。用瑞士产ABX-MICROS血细胞计数仪检测。
1.5 计算公式
细胞含量=细胞计数×容量/1000
血小板采集效率=产品的血小板计数×容量/（处理全血量-ACD用量）×供者的血小板计数
2 结果
CS-3000PLUS血细胞分离机采集，血小板78例，采前每位供者都取手指血进行细胞计数，见表1。解冻后样本血小板计数，见表2。
表1 采前供者血细胞计数及机采血小板产品的细胞计数和含量（略）
表2 复融前后产品血小板计数（略）
3 讨论
低温保存血小板的目的简单地说就是要保存新鲜血小板的生理功能，其冻存效果检测也是紧紧围绕这个中心进行。二甲基亚砜是细胞内深低温保护剂，分子量小，易透过细胞膜进入细胞内，起到对细胞膜的保护作用。对血小板保存效果好，对人体没有副作用及制作方便，输入时不用洗涤。有一定的抑菌和抗血小板凝集作用可明显防止微循环堵塞。低温保存血小板与新鲜血小板相比功能恢复情况，国内外文献报道不一。Towell等认为在冻存与解冻过程 中，一般有15%～40%的血小板会损失掉。在做了大量比较工作后他得出了新鲜血小板输注后在1～24h测得的CCI值高于输注低温保存血小板。重庆、长春等血站的试验结果:-80℃冰冻保存1周血小板回收率为88.53%，1个月回收率为87.39%基本相同。我站为（72±6）%。多数研究认为低温冻存后，血小板体内存活率减少40%～50%。而Barnard等则报道与新鲜血小板、保存液体血小板相比，冰冻血小板的膜表面粘附受体的结合能力明显增强，促凝血活性明显提高，我国学者刘景汉等认为输入低温保存血小板后虽然血小板计数增加不明显，不如新鲜血小板，但出血症状改善明显，止血效果明显优于液体保存血小板，并在大量临床应用中得到了满意的效果。
在操作中应均匀、缓慢地加入二甲基亚砜，并同时轻柔顺时晃动冰冻袋中的血小板，加入速度为1ml/min，混合好的血小板应迅速置入-80℃低温冰箱保存，复温温度37℃～42℃，快速复温应在2～3min内完成等等，已基本上得到认可与共识。在复温溶解后，二甲基亚砜洗涤的问题上，许多学者认为应采用4500r离心5min22℃，去除二甲基亚砜并使用其自身血浆重悬后输注;而我国有学者则认为二甲基亚砜无需洗涤，冰冻保存血小板复温后可直接输注。他们认为二甲基亚砜无明显毒副作用，可静脉输注;不洗涤可防止处理过程中对血小板带来的进一步损害，以及洗涤过程中可能带入污染的细菌因素。在制备过程中，高质量的浓缩血小板是整个过程的基础，加入二甲基亚砜的过程是关键，融化过程是否成功是结果，三个过程不可忽视任何一环，只有这样，才能使制品成功地应用于临床。
（收稿日期:2004-04-28）
（编辑李 木）
作者单位:443000湖北省宜昌市中心血站