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【摘要】 目的 模拟临床检测酸性磷酸酶（ACP）的试验条件，探讨其对ACP活性测定的影响。方法 采用不同的试管收集静脉血标本，在不同时间、不同条件下分离血清并检测ACP总活性（ACPT）和耐酒石酸酸性磷酸酶（TrACP）活性，观察其变化规律。结果 低温离心后血清置室温1h内测定ACPT和TrACP活性与其真实值较为一致;血清置室温2.5～3.5h酶活性下降约11%。离心后未及时分离血清或全血置室温2.5h再分离血清可使测定结果偏高，后者可使酶活性升高达20%。促凝胶可使血清ACPT显著升高，但对TrACP影响不显著。柠檬酸钠抗凝和氟化钠—草酸钾抗凝血浆ACPT均比普通真空管明显降低，尤以后者对ACP活性的抑制更显著。结论 不同试验条件可使ACPT与TrACP的测定结果产生明显差异，做好分析前的质量控制对ACP活性测定非常重要。
关键词 酸性磷酸酶 试验条件 酶活性
Effects of changes of different experimental conditions on
determination results of acid phosphatase
Jiang Xianyong，Liu Qingwu，Huang Rong
The Affiliated Hospital of Xiangnan University，Chenzhou423000.
【Abstract】 Objective To explore the effects of changes of different experimental conditions on determination results of acid phosphatase（ACP）.Methods Different tubes were used to collect the samples of venous blood，and blood serum was separated under different conditions and at different times，and ACPT and the activity of TrACP were determined.Results ACPT and the activity of TrACP were determined after the centrifugation of serum in low temˉperature and the serum in room temperature for an hour，the value was roughly equal to the real value;After the serum was put in room temperature for2.5hours to3.5hours，enzyme activity fell by11%，the determination result would be higher if the serumwas not separated in time after centrifugation or blood was put in room temperature for2.5hours and then the serum was separated，the latter could make the enzyme activity rise to20%.Coagulant could make ACPT rise obviously，but it had little effect on TrACP.Conclusion The determination results of ACPT and TrACP can be different greatly under different experimental conditions，so it is very important for the determination of ACP activity to do the quality control before analysis.
Key words acid phosphatase experimental conditions enzyme activity
酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）在哺乳类细胞中存在两种类型 ［1］ ，一类存在于溶酶体中，最适pH值较低，主要与溶酶体的功能有关，另一类存在于细胞浆中，最适pH值要稍高一点，是细胞增殖生长的重要标志。ACP的活性与细胞数目的多少成正比 ［2］ 。目前发现有4个不同的基因位点生成4类不同的同工酶，主要分布在前列腺、红细胞、破骨细胞和一些吞噬细胞中。研究表明ACP在进展期、转移性前列腺癌中阳性率占70%～80%，骨肿瘤中阳性率10%～20% ［3］ 。临床测定ACP活性浓度主要用于前列腺癌的诊断以及作为观察疗效的指标。其同工酶的测定对血液病、骨骼疾病的诊断与鉴别诊断均具有重要价值。但在临床实验室检测中，该酶活性测定结果的可比性却存在明显不足，在一定程度上限制了其临床应用。可能是由于该酶分子中唾液酸含量的不同导致其不均一性，再加上不同组织学来源的ACP生化反应特性不一，且在室温下非常不稳定，测定其活性时易受到多种试验条件的影响，条件控制不佳会使测定结果产生明显误差。为了探索ACP活性的变化规律，我们在不同试验条件下测定了ACP总活性（ACPT）和耐酒石酸酸性磷酸酶（TrACP）活性，发现其中一些因素对酶活性测定有明显影响。
1 对象与方法
1.1 研究对象 30名本院保安、帮洁物业公司工人，均为男性。年龄20～52岁，平均年龄38 + 岁。
1.2 仪器和试剂 采用Belkman Culter Allegra TM 21R低温高速离心机;OLYMPUS AU640型全自动生化分析仪。样品管采用普通干燥真空采血管、氟化钠—草酸钾抗凝管、柠檬酸钠抗凝管、促凝管4种不同的样品管收集同一受试者静脉血。ACP和TrACP测定采用英国朗道试剂盒（批号ACI012）;ACP标准品采用美国DADE BEHRING公司产品（批号0KB048）;质控血清采用DADE非定值血清（批号EMI-031l、EMl-0312）.
1.3 方法 （1）40min内采集30名研究对象静脉血10ml，分别采入2支普通真空采血管、1支氟化钠—草酸钾抗凝管、1支柠檬酸钠抗凝管和1支促凝管，立即置冰水浴中。（2）按ACP测定试剂盒的说明新鲜配制底物液，并设定仪器参数。（3）采血完毕，将1支普通真空采血管和氟化钠—草酸钾抗凝管、柠檬酸钠抗凝管和促凝管立即置低温高速离心机中，4℃离心10min（3000r/min）。随即取出血清或血浆立即上机测定ACP和TrACP活性。（4）每支样品管中各加入从第1支真空采血管内吸取的剩余血清，每管200μl，分别于室温（约25℃）放置1
h、2.5h和3.5h后测定ACP和TrACP活性。（5）另一支真空采血管内的静脉血置室温（约25℃）2.5h后用普通离心机离心10min（3000r/min），取出血清上机测定ACP和TrACP活性。（6）第1支真空采血管置室温3h后再一次吸取部分剩余血清检测ACP和TrACP活性。
1.4 统计学方法 所有数据录入计算机，根据资料的性质，用统计软件包SPSS11.0采用相应的统计方法分析。所有数据均以ˉx±s表示。两组资料比较用t检验，两组以上资料用F检验（方差分析），并作两两比较。
2 结果
2.1 真空采血管采血后时间、温度对ACP活性测定的影响 普通真空采血管采血后放置不同时间、温度测定ACPT和TrACP的结果见表1。采血后将真空采血管置冰水浴中，低温离心后立即测定的结果较接近血清中ACP活性的真实水平。将分离后的血清置室温1h后测定，其结果与立即测定的结果差异无显著性。置室温2.5h和3.5h后测定，ACPT约下降11%。离心后不立即吸取血清，室温静置3h后再吸取血清测定，ACPT有明显上升。TrACP活性改变与ACPT基本一致。
表1 普通真空管采血后时间、温度对测定ACPT和TrACP的影响 （略）
2.2 真空采血管采血后血细胞对ACP活性测定的影响 普通真空采血管采血后，将分离后的血清置室温2.5h后测定ACPT、TrACP的结果与全血置室温2.5h后再分离血清测定结果比较，差异有显著性，见表2。
表2 真空采血管采血后血细胞对测定ACPT 和TrACP的影响 （略）
2.3 不同样品管对ACP活性测定的影响 使用不同类型 的样品管采集静脉血，促凝胶管血清ACPT与普通真空管差异有显著性，但对TrACP活性影响不显著。而柠檬酸钠抗凝和氟化钠—草酸钾抗凝血浆ACPT活性均比普通真空管明显降低，尤以后者对ACP活性的抑制更显著。见表3。
表3 不同试管对测定ACPT和TrACP的影响 （略）
3 讨论
ACP由于其稳定性较差，在临床检测中如试验条件控制不严将会使测定结果产生明显误差。本试验旨在探讨影响ACP活性测定的一些因素，希望对临床样本分析前的质量控制有所帮助。
试验结果表明，低温离心后立即测定与血清置室温1h测定的结果差异无显著性。但随着放置时间的延长，ACP活性会明显下降。这可能是因为血清在室温和未密闭条件下CO 2 逸出，导致pH值升高，使酶发生不可逆失活所致。温度和pH值对保持ACP的稳定性起至关重要的作用。在室温和pH>6.0的情况下，ACP均会迅速失活。值得注意的是，真空采血管离心后未及时吸取血清，而是在室温下放置3h再吸血清测定ACP活性，这样比采血后低温离心并立即测定的ACP活性有显著升高;真空采血管采血后，置室温2.5h再离心吸取血清测定ACP活性，这样比采血后立即分离血清置室温2.5h后测定的ACP活性有显著升高。这两种情况主要是由于红细胞、血小板中均含丰富的ACP，血液凝固时血小板释放ACP的同工酶3所致;部分ACP活性亦可能来自于红细胞的释放。
既往的研究表明，EDTA抗凝剂对ACP活性测定无干扰 ［4］ 。本试验测试了促凝胶、柠檬酸钠和氟化钠—草酸钾等对ACP活性测定的影响，结果表明促凝胶可使ACPT有较明显上升，这可能与促凝胶在加速血液凝固过程中使血细胞有形成分内含的ACP释放有关。而柠檬酸钠和氟化钠—草酸钾对ACP活性有显著抑制，尤其是氟化钠—草酸钾可使ACPT下降36%以上;对TrACP的活性抑制更为明显，这可能与5带耐酒石酸酸性磷酸酶（TrACP 5 ）含唾液酸的5b带部分对氟化物敏感（但耐酒石酸和耐肝素）有关 ［5］ 。红细胞中ACP活性是血浆中的67倍 ［6］ ，溶血样本会使ACP活性测定结果明显升高。轻度溶血［Hb（0.43±0.14）g/L］即可使血清ACP明显升高，中度溶血［Hb（1.14±0.27）g/l］升高更显著，且溶血血清ACP与Hb浓度之间呈非常显著的正相关 ［7］ 。检测ACP活性的样本应完全避免溶血。从本试验可以看出，对临床检验的新鲜血清标本，应在1h内检测完毕。试验条件的不同对ACP活性的测定可产生明显影响，直接关系到各实验室ACP活性测定室内质控的精密度和室间质评结果的一致性，全面质量控制包括分析前质量控制、分析中质量控制、分析后质量控制。分析前质量控制应引起各实验室的高度重视。
参考文献
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作者单位:1 423000湖南郴州湘南学院附属医院检验科
2 423000湘南学院医学部预防教研室
3 423000湖南省郴州市第三人民医院检验科
（收稿日期:2004-08-30） （编辑田 雨）