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【摘要】 目的 探索艾迪对人肺癌不同表型细胞系常用化疗药敏感性的影响。方法 采用人肺癌不同表型细胞系，用不同浓度的ADM、MMC和CBP等化疗药物处理细胞，观察艾迪对化疗药物的增敏作用。结果 除CBP加艾迪后对AGZY的半数致死浓度与单药比有所增加外，其它各组半数致死浓度均有不同程度的降低。在两细胞系中，MMC加艾迪在浓度为3.0μg/ml组其增敏作用最明显。ADM各浓度组加艾迪后，对Anip973细胞系均有程度不同的增敏作用;而AGZY细胞系只有2.0μg/ml组增加抑制率15.56%，其他各浓度组变化不明显。CBP低浓度时加艾迪对Anip973有明显增加抑制率作用，对AGZY则没有明显的增敏作用。结论 艾迪对ADM和MMC具有一定的增敏作用，对不同转移表型和不同药物浓度其增敏作用不同。
关键词 艾迪 化疗敏感性 肺癌细胞系
Effects of Aidi on chemosensitivity of human lung cancer cells of different transfer phenotype.
Ma Yuyan，Chen Gongyan，Liu Wei，et al.
Cancer Institute，Harbin Medical University，Harbin150040.
【Abstract】 Objective To investigate the effects of Aidi on chemosensitivity of human lung cancer cells of different transfer phenotype.Methods Cells of human lung cancer of different transfer phenotype was dealed with ADM，MMC and CBPof different concentrations.The effects of Aidi on chemosensitivity were studiedbyMTTmethod.Results The lethal concentration was reduced to varying degrees after Aidi added in the all groups except CBP in the AGZY.The effect of MMC on chemosensitivity was obviously increased when concentration of MMC is3.0μg/ml and added Aidi in the two cell lines.The effect of ADM on chemosensitivity was obviously increased when Aidi added to different concentration groups in the Anip973cell line.But the effect of Aidi was not clear except2.0μg/ml concenˉtration group in the AGZY cell line.The effect of Aidi on chemosensitivity was clearly in the Anip973cell line when concentration of CBP was low.But the same result was not observed in the AGZY cell line.Conclusion The chmosensitivity of ADM and MMC has increased by Aidi.The increased effect on chemosensitivity was differenet in the different transfer phenotype and different drug of concentrations.Key words Aidi chemosensitivity lung cancer cell line
化疗是恶性肿瘤治疗中常用的方法之一，但长期以来，化疗药物敏感性低是影响临床疗效的主要因素之一。研究表明，化疗对非小细胞肺癌的效果较差，因此，积极寻找能提高化疗药物治疗效果的新方法是非小细胞肺癌治疗中的关键问题之一。艾迪注射液是一种中成药，具有提高机体免疫功能、诱导产生某些细胞因子从而达到抑制或杀伤肿瘤细胞的作用 ［1～3］ 。有研究表明，临床上艾迪可提高某些化疗药敏感性且降低化疗药物的毒副作用 ［4］ 。但艾迪是否对肺癌常用化疗药物敏感性均有提高作用，目前未见报道。为了探索艾迪对肺癌常用化疗药物增敏作用，我们对Aˉnip973和AGZY两细胞株进行了常用化疗药ADM、MMC和CBP药物敏感性实验研究。
1 材料与方法
1.1 材料 低转移表型肺癌细胞系（AGZY）和高转移表型肺癌细胞系（Anip973）为我所保留细胞株，常规条件下培养。MTT为Sigma公司产品;酶标仪450型，美国Bio RAD公司产品;RPMI1640为Gibco公司产品;胎牛血清为天津血研所产品;DMSO为天津市大茂化学仪器供应站产品，分析纯。阿霉素（ADM）为浙江海正药业股份有限公司产品，丝裂霉素（MMC）为日本株式会社产品，卡铂为北京北大高科技园区产品，艾迪购自贵州益佰制药有限公司。
1.2 方法
1.2.1 药物浓度设定 根据临床药物用量计算出PPC浓度，设定药物浓度梯度。ADM的药物梯度浓度为0.08、0.40、2.00和10μg/ml，MMC为0.3、1.0、3.0和10.0μg/ml，CBP为1.0、5.0、10.0和20.0μg/ml，艾迪为0.4μl/ml。
1.2.2 实验分组 本实验分三组进行，即对照组（加等量PBS）、单药组和单药加艾迪组。每个浓度设3个复孔，对照设5个复孔。
1.2.3 实验方法 分别取对数生长期的AZGY和Anip973细胞以2×10 4 个/孔接种于96孔细胞培养板中，待细胞贴壁后分别加入不同浓度的实验用药，置37℃、5%CO 2 孵箱中孵育48h后加MTT（5mg/ml），继续孵育4h，翻板，加DMSO（100μl/孔），溶解甲，测定λ=490nm吸光度（A）值。药物对细胞生长的抑制率以下式计算:抑制率（%）=（1-加药孔平均A值对照孔平均A值）×100%。
1.2.4 统计学方法 半数致死浓度以SPSS10.0软件包的Probit方法计算，抑制率差别的显著性检验采用U检验法。
2 结果
2.1 艾迪对常用化疗药物半数致死浓度的影响 在Aˉnip973细胞株中艾迪对常用化疗药物半数致死浓度均有明显的降低作用，其中ADM加艾迪后半数致死浓度由5.49μg/ml降到1.22μg/ml，降低了77.78%。在低转移细胞株AGZY中，艾迪对ADM和MMC的半数致死浓度有程度不同的降低。而CBP加入艾迪后其半数致死浓度不但没有降低，反而增加19.45%，见表1。表1 艾迪对肺癌高、低转移细胞株常用化疗药物半数致死浓度的影响（略）
2.2 艾迪对常用化疗药物抑瘤率的影响 在Anip973细胞株中ADM的抑瘤率随ADM的浓度增加而升高，但当浓度达10.00μg/ml时稍有下降。加0.4μl/ml艾迪后，各浓度的抑瘤率均有不同程度增加。加艾迪后，ADM抑瘤率随其浓度增加而增加，10.00μg/ml组增加抑瘤率27.99%。而ADM对肺癌低转移细胞株AGZY的抑瘤率除10.00μg/ml组高于Anip973组外，其他各组均低于Anip973，0.40μg/ml组抑瘤率仅是Anip973抑瘤率的66.54%。在低转移表型（AGZY）肺癌细胞中，ADM加艾迪后，对抑瘤率的影响不大，只有2.00μg/ml组增加最大，为15.56%（见表2，图1）。
MMC对Anip973肺癌细胞株和AGZY肺癌低转移细胞株的抑瘤率均随药物浓度的增加而增加，但两组间各浓度组的抑瘤率存在明显差异（P<0.001），Anip973对MMC的敏感性明显高于AGZY对MMC的敏感性。MMC加艾迪后，除3.00μg/ml组抑瘤率有显著的增加外（P<0.001），其他各组变化不明显（见表3，图2）。
CBP对Anip973和AGZY的抑瘤率除最高和最低浓度组两组间差异有非常显著性（P<0.001），其他两浓度组两细胞系的抑瘤率无差别。两组抑瘤率均有随药物浓度的增加其抑瘤率显著增加的趋势（P<0.001），但并不是随药物浓度增加的倍数抑制率也成倍增加。低浓度CBP加艾迪对Anip973具有显著增加抑制率的作用（P<0.001），高浓 度时尽管抑瘤率也有所增加，但不显著。CBP加艾迪对AGZY的抑瘤率总体看没有明显的作用（见表4，图3）。图1 艾迪对ADM药物敏感性的影响表2 艾迪对化疗药ADM抑瘤率（略） 图2 艾迪对MMC药物敏感性的影响（略）表3 艾迪对化疗药MMC抑瘤率（略） 表4 艾迪对化疗药CBP抑瘤率（略） 图3 艾迪对CBP药物敏感性的影响
3 讨论
尽管近年来我国在恶性肿瘤的诊断和治疗方面的研究有明显的进展，但由于早期诊断率并不高。所以，大部分患者确诊时已属中晚期，故化疗仍是治疗的主要手段之一。单药化疗有效率较低，联合化疗可显著提高有效率。
艾迪注射液主要成分为扶正培本中药人参、黄芪、刺五加，药理研究表明，人参皂甙、刺五加多糖能增强巨噬细胞、NK细胞以及LAK细胞的活性，从而提高机体免疫功能，达到抑制及杀灭肿瘤细胞的作用。艾迪注射液中所含的斑蝥不仅可影响癌细胞DNA、RNA生物合成和基因表达，诱导癌细胞分化、凋亡，而且可促进骨髓造血干细胞成熟、分化，促进边缘池粒细胞的释放 ［5，6］ 。资料显示，艾迪注射液辅助化疗，治疗前后T细胞亚群无明显变化 ［7，8］ 。因此，艾迪是一种既能提高机体免疫功能又具有抗癌作用的双相抗癌药。我们的研究结果表明，不同化疗药物联合应用艾迪作用于不同细胞株存在明显的差别。与单独应用化疗药物比，艾迪可大幅降低MMC和ADM的半数致死浓度。而 CBP联合应用艾迪后，Anip973细胞株的半数致死浓度下降了32.64%，而AGZY细胞株的半数致死浓度则提高了19.45%。所以，在应用联合化疗时要考虑肿瘤患者的个体差异，不能一概而论。
化疗时也要考虑到化疗药物的使用浓度。我们的实验结果表明，对于某些化疗药，当药物浓度过高时其抑制率反而降低。特别是应用联合化疗时，药物浓度的配伍应引起特别注意。本研究结果证明，CBP和ADM联合应用艾迪注射液，对肺癌细胞株Anip973的抑制率在化疗药低浓度时明显高于高浓度。
常用化疗药联合应用艾迪注射液对肺癌细胞株抑瘤率的影响是协同作用、相加作用还是拮抗作用，目前还未见报道，有待于进一步研究。