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The antitumor effects of the petroleum ether extract from stellera chamaejasmel
Li Fan Junjie，Jia Zhengping，Wang Bin，et al.
Department of Pharmacy，General Hospital of Lanzhou Command，PLA，Lanzhou，Gansu730050.
【Abstract】 Objective To study the antitumor effects of the petroleum ether extract from Stellera Chamaejasˉmel L.Methods The in vitro antitumor activity against human cancer cell lines，such as stomach cancer SGC-7901，hepatocarcinoma BEL-7402and leukemia HL-60，was determined by a MTT assay.The in vivo antitumor activity was evaluated by the antitumor bioassay against transplanted mouse solid tumor S 180 and H 22 .Results The petroleum ether extract strongly inhibited cell proliferation of human tumor cell lines，and its activities are higher than that of vinˉcristine.The petroleum ether extract also showed a lower acute toxicity and the strong antitumor activities against transˉplanted mouse solid tumor S 180 and H 22 in vivo with a positive interaction to the concentration.The inhibitory rates at a dose of0.40g/kg ip against S 180 and H 22 are69.99%and61.33respectively，similar to the inhibitory rates of cyˉclophosphamide at a dose of0.02g/kg p.Conclusion The petroleum ether extract from Stellera chamaejasme L.have strong antitumor activities in vivo and in vitro. Key words stellera chamaejasmel L. the petroleum ether extract MTT antitumor activity in vitro in viˉvo
瑞香狼毒（Stellera Chamaejasmel L.）为瑞香科狼毒属植物，其根入药，民间广泛用于抗肿瘤的治疗，是我国古代抗肿瘤常用的中草药 ［1］ 。近年来本实验室对瑞香狼毒的抗肿瘤作用和机理作了大量的研究，并且对其中的抗肿瘤活性成分进行了研究 ［2～5］ 。用系统溶剂法对瑞香狼毒的体外抗肿瘤活性部位的筛选研究表明，石油醚提取部位是瑞香狼毒中体外抗肿瘤作用最强的部位［6］ 。本文对瑞香狼毒石油醚提取物体内外抗肿瘤作用和急性毒性作了进一步的深入研究，为抗肿瘤活性成分的分离筛选提供有意义的根据。
1 材料
1.1 药材 瑞香狼毒由兰州市药材供应站提供，经西北师范大学植物所晏民生副教授鉴定为瑞香科植物瑞香狼毒（Stellera Chamaejasmel L.）。
1.2 实验动物 Balb/c纯种小鼠，体重18～22g，雌雄兼有，SPF级，由兰州军区总医院动物实验科提供并负责饲养。
1.3 主要药品与试剂 RPMI-1640培养基为Gibco公司的产品;MTT为Sigma公司的产品;小牛血清为四季青公司的产品;试剂均为分析纯;环磷酰胺（CTX），上海华联制药有限公司生产，批号031015;长春新碱（VCR），上海华联制药有限公司生产，批号031102A。
1.4 细胞系人胃癌细胞SGC-7901、人肝癌细胞BEL-7402和人白血病细胞HL-60均引自中国科学院上海细胞生物研究所的细胞库;用RPMI-1640培养液（含10%的小牛血清，100kU/L青霉素，100mg/L链霉素），37℃，5%CO 2 ，相对湿度100%培养，0.25%胰蛋白酶消化传代。
1.5 瘤株 S 180 实体瘤由甘肃省肿瘤所引进，本实验室冷冻保存，用Balb/c小鼠接种传代;H 22 实体瘤由兰州大学生命科学学院引进，本实验室冷冻保存，用Balb/c小鼠接种传代。
2 方法
2.1 瑞香狼毒石油醚提取物的制备 95%乙醇提取物用少量95%乙醇溶解后加入硅藻土适量拌匀，于水浴上挥干溶剂，制成硅藻土混合物。取50ml的玻璃针管一支，下部放置滤纸后，将硅藻土混合物粉末装入针管中，加入石油醚10～20ml匀速流洗，流洗至提取液颜色近无色时结束流洗，溶剂浓缩挥干后得到瑞香狼毒石油醚提取物。抗肿瘤作用的体外实验试样用DMSO溶解配制，体内实验用植物油溶解配制。
2.2 MTT比色法 按参考文献 ［7］ 的方法进行。
2.3急性毒性实验取50只Balb/c纯种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，随机分成5组，腹腔注射给药，0.4ml/只，给药剂量分别为5.06、3.79、2.84、2.13和1.60g/kg，给药后连续观察7天，记录小鼠死亡数。
2.4 小鼠的移植性肿瘤实验 参考文献 ［8］ 的方法进行。瑞香狼毒石油醚提取物配制成0.10g/kg、0.20g/kg、0.40g/kg三个给药剂量组，分别编号为ScL.Pe-0.10、ScL.Pe-0.20和ScL.Pe-0.40;对照组注射等量的植物油，阳性对照组给环磷酰胺0.02g/kg，分别编号为Control和CTX。
3 结果
3.1 瑞香狼毒石油醚提取物对体外培养的肿瘤细胞增殖的抑制作用 瑞香狼毒石油醚提取物和长春新碱对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901、人肝癌细胞BEL-7402增殖和人白血病细胞HL-60显示出较强的抑制作用，在测定浓度范围内呈现出较好剂量依赖性抑制作用，结果见表1。线性回归法计算IC 50 值，结果见表2。瑞香狼毒石油醚提取物的IC 50 别为158.33μg/ml（SGC-7901）104.63μg/ml（BEL-7402）、278.03μg/ml（HL-60），均小于长春新碱的各IC 50 值，这表明瑞香狼毒石油醚提取物比临床常用的植物来源的抗肿瘤药物长春新碱的体外抗肿瘤作用强。表1 瑞香狼毒石油醚提取物和长春新碱对各肿瘤细胞生长的抑制率DOSE （略） 表2 瑞香狼毒石油醚提取物和长春新碱的IC 50 值肿瘤细胞 IC 50 （略）
3.2 瑞香狼毒石油醚提取物急性毒性作用 见表3，实验数据经由蓝宙药学专业软件系列之LD 50 数据处理程序计算得半数致死量LD 50 =3.0659g/kg，说明瑞香狼毒石油醚提取物的急性毒性较小。
3.3 瑞香狼毒石油醚提取物对小鼠移植性肿瘤S 180 生长及脾脏指数的影响 见表4。瑞香狼毒石油醚提取物对小鼠移植性肿瘤S 180 的生长有显著的抑制作用，并和剂量正相关。三个给药剂量组的抑制率分别为35.25%、40.79%和69.99%，与对照组相比中剂量组差异有显著性（P<0.05），高剂量组差异有非常显著性（P<0.01），并且抑制率接近阳性对照组环磷酰胺（CTX）。另外，各剂量组小鼠的体重无明显的下降，说明在给药剂量范围内瑞香狼毒石油醚提取物的毒性很小。瑞香狼毒石油醚提取物低剂量组和中剂量组对荷瘤S 180 小鼠的脾脏指数的影响很小，差异无显著 性（P>0.05）;高剂量组和阳性对照组环磷酰胺（CTX）使荷瘤S 180 小鼠的脾脏指数降低，差异有非常显著性（P<0.01）。
3.4 瑞香狼毒石油醚提取物对小鼠移植性肿瘤H 22 生长及脾脏指数的影响 见表5。瑞香狼毒石油醚提取物对小鼠移植性肿瘤H 22 的生长有显著的抑制作用，并和剂量正相关。三个给药剂量组的抑制率分别为34.07%、47.54%和61.33%，与对照组相比中剂量组差异有显著性（P<0.05），高剂量组的抑制率与阳性对照组环磷酰胺（CTX）的抑制率比较接近，并且与对照组相比差异有非常显著性（P<0.01）。瑞香狼毒石油醚提取物高、中、低剂量组和对荷瘤H 22 小鼠的脾脏指数的影响很小，差异无显著性（P>0.05）;阳性对照环磷酰胺（CTX）组使荷瘤H 22 小鼠的脾脏指数降低，差异有显著性（P<0.05）。表3 瑞香狼毒石油醚提取物急性毒性作用（略）表4 瑞香狼毒石油醚提取物对小鼠移植性肿瘤（略）注:与对照组比较 ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01 表5 瑞香狼毒石油醚提取物对小鼠移植性肿瘤（略）
4 讨论
寻找具有抗癌作用强、抗癌谱广、副作用小的天然活性化合物是研究抗癌药物的重要途径。近年来对瑞香狼毒大量的药理研究表明，瑞香狼毒具有很强的抗肿瘤作用，可作为抗癌中药试用于临床。冯威健等从瑞香狼毒中分离得到抗肿瘤活性很强的二萜类化合物尼地吗啉，并认为尼地吗啉是瑞香狼毒中的主要抗肿瘤活性成分，但其活性剂量与毒性剂量接近，其很强的毒性作用降低了临床应用的价值 ［9，10］ 。目前，对瑞香狼毒大量的化学成分研究表明，除了含二萜类化合物外，瑞香狼毒中还含有结构比较特殊的双二氢黄酮类、木脂素类、香豆素类等化合物，而这些成分对于抗肿瘤活性化合物的筛选具有广阔的研究开发前景，对瑞香狼毒中抗肿瘤活性化合物的研究仍很必要。在以往的研究中，我们发现瑞香狼毒石油醚提取物具有较强的体外抗肿瘤活性，经过体外抗肿瘤活性筛选的药物须通过动物移植性肿瘤实验来验证其体内抗肿瘤作用，动物移植性肿瘤是目前抗肿瘤药物筛选实验中最常用的模型，也是用来检测药物抗肿瘤作用的最终模型。本研究在此基础上对瑞香狼毒石油醚提取物体外和体内抗肿瘤作用及急性毒性作进一步的深入研究，并和常用的抗肿瘤中药成分长春新碱的体外抗肿瘤活性进行比较，从而确认其抗肿瘤作用，为临床疗效提供有意义的根据。
本研究结果表明，瑞香狼毒石油醚提取物的体外抗肿瘤活性高于临床常用的植物来源的抗肿瘤药物长春新碱;瑞香狼毒石油醚提取物半数致死量LD 50 为3.07g/kg，急性毒性较小;并且对小鼠移植性肿瘤S 180 和H 22 的生长有显著的抑制作用，和剂量正相关。高剂量组对小鼠移植性肿瘤S 180 的抑制率为69.99%，H 22 的为61.33%，与阳性对照组环磷酰胺（CTX）的抑制率比较接近，并且与对照组相比差异有非常显著性（P<0.01）;各剂量组小鼠的体重无明显的 下降，在给药剂量范围内瑞香狼毒石油醚提取物的毒性很小。这说明瑞香狼毒石油醚提取物具有较强的体内和体外抗肿瘤作用，有进一步研究的价值。本研究结果为瑞香狼毒的临床抗肿瘤应用及抗肿瘤活性成分的进一步分离筛选提供了依据和资料。
参考文献
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10 Feng WJ，Fujimoto Y，Ohkawa M，et al.Antitumor principles of Stellera Chamaejasme L.Chinese Journal of Cancer Research，1997，9（2）:89-94.
作者单位:730050兰州军区兰州总医院全军临床药理基地