点击显示 收起
The study on evaluation of human sub-health status by using Hua multimedia computing microscopy diagnostic instrument （THMMDI）examination
Zhang Yange，Wu Liuxin，Sun Xuelei，et al.
Institute of Aviation Medicine，AF.Beijng100036.
【Abstract】 Objective To explore the accuracy of THMMDI diagnosis with clinical physical examination，and establish the method and standard of diagnose for sub-health by HLB blood test.Methods Blood samples of585orˉdinary people and120pilots from tip of small fingers were examined with THMMDI.Diagnostic results of THMMDI were compared with those of routine clinical physical examination.The result of The HLB blood test of pilots was reˉgarded as the health standard.Results General diagnosed coincidences rates were more than85%，few diseases were low，it is necessary to follow up.Conclusion It is valuable to evaluate the health status for THMMDI.It might be an accurate，rapid，objective and convenient means for HLB bloodtest.
Key words microscopy health diagnosis HLB blood test
亚健康是20世纪80年代末期提出的医学新理念，是指介于健康与疾病之间的边缘状态。按照世界卫生组织对健康的定义，“亚健康”的含义应为躯体、心理社会和环境方面处于欠完满状态，即疾病前状态。若及时采取措施干预，即可阻止其向疾病状态发展。因此，及时鉴别亚健康状态或疾病早期是非常重要的。关于亚健康的检查及诊断目前尚无统一的方法及标准。美国学者布莱福德（Robert W.Braford）研究出一套多媒体超高倍显微分析诊断系统，也称布氏显微镜。根据氧化自由基理论及凝血机制，ROS（reacˉtive oxygen otoxic specis）或相关产物引起的病变最终在所有的疾病状态和代谢紊乱中都起了作用 ［1］ 。由于过剩的自由基改变了正常的凝血通路，使得病理变化在凝血片上反应出来，通过这种特殊显微镜，识别出凝血片中的自由基代谢产物，以此来判定人体的健康状况。布拉德确定了这类生化作用引起的特殊生物标志物，在血中留下特殊的标志，通过显微镜被观察到，他将此检查方法命名为HLB血检（Heiˉtan-Lagard-Bradford Blood Test） ［2］ 。因此，通过HLB血检，可根据血中ROS的分布来诊断和监测人体的功能障碍和病理状态。
这项技术为医学界开辟了新的未知领域，被誉为“显微技术领域中里程碑式的突破”和“21世纪医学的听诊器”。以全息胚理论、自由基理论和细胞学理论为基础，只取指尖一滴血，通过对血细胞形态、部分代谢产物识别，而对人体病理生理功能及亚健康状态做出评估。我们使用清华大学改进的布氏显微镜（THMMDI）对飞行员和普通人群进行了亚健康检查，并与临床检查结果进行对比。旨在建立一套诊断亚健康状态的方法和标准。
1 资料与方法
1.1 一般资料 飞行员120名，均为男性，年龄23～53岁，平均年龄33岁。飞行时间300～2000h，平均飞行时间1291h。普通人群为行政人员和科研干部，585名，男325名，女260名，年龄35～60岁，平均年龄45岁。
1.2 仪器 多媒体超高倍显微分析仪（清华同方研制）。
1.3 方法 用采血笔快速刺入右手小指尖，轻轻挤出一小滴，于玻片的重量接触皮肤，顺序采取6滴血液于玻片上。将标本置于无空气污染处干燥3～5min，再轻轻挤一滴血，立即用盖玻片盖上血滴，轻压使之完全散开，以备作活血观察。然后，用相差光或暗视野镜下观察标本。用DIN20镜头观察凝血片。以THMMDI仪器的诊断方法对每位受试者作出健康状态的描述，与受试者主诉及临床检查结果作对比。检查内容包括:脊柱系统疾病、头颈部疾病、胃部疾病、心血管疾病、脂肪肝、泌尿生殖系统疾病、关节疾病、结石及肿瘤等，其中30名检查了血甘油三酯和胆固醇，并与镜下乳糜微粒的数量进行了对比。HMMDI检查与临床检查均为阳性为符合。受试者都接受病史调查及临床全面体检。
2 结果
2.1 健康飞行员HLB检查结果 由于飞行员都是经全面体检，健康状况较好的人群，故以此做为健康人的HLB血液检查标准。
2.1.1 活血片检查结果 在20000倍显微镜下，观察到的RBC，为双凹圆盘状，单个游离状态，WBC可看到中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，单核细胞，及血小板。见不到跳动的乳糜微粒及胆固醇结晶。
2.1.2 凝血片检查结果 健康飞行员的凝血片为连接致密的纤维蛋白网之间的红细胞团。以此做为健康人的HLB血检标准。根据Braford的描述，将其定为0级。
2.1.3 标准为0级，飞行人员健康的评估 飞行员0级比例为84.2%（101/120），表现为连接致密的纤维蛋白网之间的红细胞团，见不到白色的ROS。见图1，图2。
2.2 普通人群HLB检查结果
2.2.1 活血片检查结果 在血粘稠度高的人中，可见到红细胞呈缗钱状排列，在血脂增高（甘油三酯或胆固醇）的人群中可见到跳动的乳糜微粒。一般情况下，空腹、血脂正常时，活血片中，镜下见不到乳糜微粒。但并不是绝对的，与前一天晚餐的脂肪含量有关。在镜下见到数量不等的乳糜微粒的人群中，有65%甘油三酯增高;21%甘油三酯属正常高限（1.5～1.7mmol/l）;14%血脂正常。我们将镜下乳糜微粒的数量与血中甘油三酯和胆固醇的含量进行了相关性分析，相关系数分别为0.2和0.19，P>0.05无统计学意义。即无法根据镜下乳糜微粒的数量评估血甘油三酯和胆固醇的含量。但在其中12名受试者中，乳糜微粒每5个视野平均8～10个以上时，血脂>1.9mmol/L。
2.2.2 健康人的比例 以凝血片0级为健康标准，在585 名受试者中，有39名符合健康人的标准，占6.7%，将过敏体质这一项未归为亚健康。
2.2.3 各项阳性指征的诊断符合率 以THMMDI诊断结果与受试者主诉及临床检查结果进行比较。两者都判为阳性者为符合。见表1。图1 健康人的凝血图
图2 健康人的纤维蛋白网，连接致密
表1 HLB血检与临床检查结果的符合率（略）
注:表中符合率=THMMDI与主诉及临床检查均为阳性人数/THMMDI阳性人数
2.2.4 在THMMDI检查中发现的有价值的病例 病例A，该受试者1～6滴干血片为广泛分布的大块活性氧毒性物（ROS，reactive oxygen species）。做超声检查后证实，为双侧肾脏萎缩（图3）。病例B，该受试者1～6滴干血片中央区可见2个较大ROS，并有内容物。临床确诊为子宫颈癌，（图4）。发现3例ROS偏位，临床确诊为乳腺腺瘤。1例中央区3～6滴较大ROS，临床确诊子宫肿瘤。
2.2.5 根据ROTS的数量将干血片分级 分为健康型（0 级），标准为无ROS出现或偶见细小散在ROS。亚健康型（Ⅰ级），标准为红细胞被10%～20%的ROS取代;亚临床型（Ⅱ级），标准为红细胞被30%的ROS取代，建议做进一步临床检查;临床型（Ⅲ级），标准为红细胞被30%～40%以上的ROS取代;必须做进一步临床检查。 图3 该病例双侧肾脏萎缩，肾功异常图4 子宫颈癌，中央区可见大块ROTS，有内含物
3 讨论
WHO的一项全球性调查表明:真正健康的人仅占5%，患有疾病的人占20%，而75%的人处于亚健康状态。亚健康状态的普遍存在，严重影响着人类的学习、工作效率，对社会整体的可持续发展起着不可忽视的内在制约作用。因此，亚健康问题已成为受社会关注的的热点之一。亚健康作为健康与疾病的中介状态，具有可向疾病发展、又可向健康逆转的双向性，因此，对亚健康的诊断，及时采取干预措施，有助于个体向健康方向转化，对阻止疾病的发生、发展是极其有价值的。但只根据临床表现评价亚健康，缺少一定的客观性，很难发现躯体内潜在的疾病。HLB血检查通过取自小指指尖的一滴血，对全身的健康状况进行评估，简便易行。观察分为两部分，活血部分即在布氏显微镜下直接观察血中各种细胞成分，观察其形态、分布及白细胞活力，通过和临床检查结果对比，发现在普通人群中，比较有意义的亚健康指标为红细胞呈缗钱状排列，提示血粘稠度偏高。乳糜微粒每5个视野在5～6个以下时，我们将镜下乳糜微粒的数量与血中甘油三酯和胆固醇的含量进行了相关性分析，相关系数分别为0.2和0.19，P>0.05.无统计学意义。即无法根据镜下乳糜微粒的数量评估血甘油三酯和胆固醇的含量，尤其是在60岁以上人群。但是，当乳糜微粒每5个视野平均8～10个以上时，提示血脂一定是增高的。镜下见到胆固醇结晶的临床意义还不能确定，因为胆固醇结晶的数量与快速血胆固醇检测值相关性分析，无统计学意义。
凝血片检查的理论基础是自由基学说。这种学说认为，机体在代谢过程中不断产生自由基，人体过剩的自由基会损伤细胞膜，进而损害细胞器，损伤细胞内的遗传基因，导致衰老与疾病 ［3］ 。例如，癌症的发生是由于自由基攻击基因，导致基因断裂、重排和交联，使得人体内的原发癌基因大量复制成为癌变细胞。心脑血管疾病也是常见的自由基疾病，是由于体内过剩的自由基攻击细胞膜，使血小板凝集、红细胞老化、血管内皮细胞损伤，产生血栓、动脉粥样硬化，进而形成心肌和脑组织缺血，即心脑血管疾病。布拉德根据氧化自由基理论，过剩的自由基改变了正常的凝血通路，使得病理变化在凝血片上反应出来，他将此检查方法命名为HLB血检（Heitan-Lagard-Bradford Blood Test）。事实上，血液凝固过程是要有许多凝血因子参加的极为复杂的 连锁化学反应。总的结果是使血液中的呈溶胶状态的纤维 蛋白原变成凝固状态的纤维蛋白。血液凝固过程可被描述为单位链的形成，纤维蛋白网的交叉连接，形成血凝块。在单位链形成前，首先是纤维蛋白原的活化，通过各种凝血因子（XIII），导致纤维蛋白网的形成，导致血凝。当血液凝固时，大多数因子被消耗，合成凝血块。血液暴露在玻璃表面，活化了凝血的内源通路，正常情况下，血凝块在显微镜下应是交叉的显微蛋白网间的血细胞团 ［2］ 。
在病理状况下，由于氧自由基代谢过剩，产生半透明的纤维蛋白复合物，也就是我们所称的活性氧毒性物（ROS）。ROS的沉积，代替了RBC及纤维蛋白网。ROS的形状和程度提示特殊的病理变化。在治疗有效后，凝血模式（clotting pattern）转变为正常模式。这些变化被认为是因为一种疾病状态是由于血液成分的变化和凝血能力的变化。高凝和低凝状态、过量的ROS产生及清除能力的下降，可在所有退化性疾病中见到。这些过程将无疑会导致正常血凝过程的改变和异常凝血模式的发展 ［4］ 。
在癌症病人，通过ROS代谢标记可诊断和监测癌症病人的治疗反应。在癌症病人，ROS大量的产生，同时身体内源性清除酶（SOD）降低或消失，谷胱甘肽过氧化酶和过氧化氢酶在癌症病人剧减，产生大量的过氧化氢，损害机体细胞和许多生物系统。过氧化氢的作用包括影响红细胞的溶解、抑制硫氰酸酶和其它的酶、抑制免疫系统、改变胞膜、影响消化系统、改变机体代谢活动、抑制硫氰酸盐的产生 ［5］ 。为什么血检查对于监测癌症有价值?在代谢性疾病包括癌症病人，其原发机制是唾液酸酶的活动，唾液酸酶直接对纤维蛋白原起作用，产生纤维蛋白单体，导致唾液酸的释放。纤维蛋白单体的产生和唾液酸组成的糖蛋白，在癌细胞外形成外衣。过氧化氢的过量产生，刺激唾液酸酶，导致唾液酸从纤维蛋白单体中清除。纤维蛋白原然后聚合，产生凝胶样纤维蛋白复合物沉积（SFC or FCD，soluble fibrin complex deposits）。
在几乎所有疾病中，都是由于ROS相关酶的缺乏或ROS的过量产生引起的ROS增加，生物机制为:过氧化氢刺激唾液酸酶，使唾液酸从纤维蛋白单体中清除，导致纤维蛋白原聚合，产生FCD。这是为什么在凝血片中可监测各种代谢疾病中ROS的过量产生的理由。根据我们的结果，我们将凝血图分为0～3级。0级为完好的凝血片，为健康型;1级，亚健康型，标准为红细胞被10%的ROS取代;亚临床型（Ⅱ级），标准为红细胞被20%的ROS取代，在此水平，如果FCD是恶性病变的结果，癌本身在临床上可能并不会被检测到。此指征可成为癌的早期预警系统，建议做进一步临床检查;临床型（Ⅲ级），标准为红细胞被30%以上的ROS取代;必须做进一步临床检查，将得到临床证实。研究已显示治疗的介入可改变FCD，因此，HLB血检对于监测病情，药物剂量是有价值的。德国已有学者使用扫描电镜结合HLB血检查揭示了FCD结构的区别。清晰的区域和特殊的疾病有高度的相关性。提示对疾病有高度的预见性。HLB血检查对于提示体内的病理状态是一个有价值的工具。通过指血的系列血滴，在干净的玻片上，在显微镜
下观察。血滴的解释来自上万例玻片的检查。经验数据确定了凝血模式与不同疾病的相关性。通过广泛的研究发现了不同的凝血模式和已确诊疾病的密切关系。
另一个有价值的指征是凝血成分（纤维蛋白网），做为生物探针评价体内代谢平衡状态。纤维蛋白是被称为纤维蛋白单体的蛋白单位的链，构成这个链的单位形成于纤维蛋白原的活化，使其聚合成纤维蛋白。然而，纤维蛋白只代表凝血形成的第一阶段。纤维蛋白链是可溶的，在湿的情况下（未完全凝集时），镜下不能被识别。在第二阶段，通过凝血因子XIII的作用，纤维蛋白链交叉形成硬凝（不可溶的）。大量的研究证明，ROS作用于因子XIII，抑制其活化 ［6］ 。先天的因子XIII缺乏，极少见，而因子XIII的缺乏在各种疾病中较常见，源于活力的减低。包括癌，肾病、肝病、动脉粥样硬化、胃炎和各种血液病。研究提示因子XIII的活力水平和疾病的严重程度相关 ［7］ 。这个结果符合前面提到的血中ROS的活动与疾病的进程有关。ROS抑制因子XIII的活化，抑制纤维蛋白网的产生，使得纤维蛋白网断裂，在镜下可观察到。因此，通过一滴血，根据在HLB血检镜下观察到的FCD和纤维蛋白网的情况，可评估个体的健康状况。第三个理论根据是全息胚学说。生物体由处于不同发育阶段的、具有不同特化程度的全息胚组成，其中发育程度较高的全息胚又由发育程度较低的全息胚组成。全息胚理论表明机体的某一部分都具有整体的缩影，储存着机体的全部信息，点滴血液同样具有机体的信息相关性，这也源于我国传统的中医理论生物全息律。布氏以玻片上一滴血的中心划分8个同心圆，每一区域代表人体不同系统或脏器。ROTS出现在某一区域，就表明相应系统或脏器功能失调或病变。国内也有学者应用布氏显微镜对普通人群进行了亚健康研究 ［8］ ，符合率和我们的结果相似。我们共做了120名飞行员和585名普通人群的HLB血检，在检查中发现了一些有价值的病例。有的符合率较高，有的符合率稍低，有些病例还需进一步跟踪，以探索对疾病的预测准确性。飞行员是一特殊职业，经严格的选拔，定期体检，在临床上是健 康的。由于常规的体育锻炼，合理的饮食结构，尽管工作压力比较大，但他们的健康状况优于普通人群。这点在我们的研究中也得到了很好的验证。作者以飞行员群体作为健康人的HLB血检标准，对于评估个体的健康状况进行了有意义的探索。从我们的结果来看，HLB血检根据ROS的量及纤维蛋白网连接的致密程度，对于评价人体的体质及应激能力有其特殊价值。它为进一步做临床实验室检查提供了线索，是亚健康筛查比较有意义的一项特殊方法，值得深入进行研究。
参考文献
1 Oxidology.The Study Reactive Oxygen Species（ROS）and Their Metabolism in Health and Disease，Bradford，RW，Allen，HW&Culbert ML，1985，Bradford Research Institute，Chula Vista，CA.Chem.Absts，103:69356.
2 Oxidology，Bradford R，Allen H Chula Vista，CA.Bradford Foundation.2nd Edition，June，1997.
3 赵克然.氧自由基与临床.北京:中国医药科技出版社，1999，11.
4 Shacter E，Williams J A，Levine R L.Oxidative modification of fibrinoˉgen inhibits thrombin-catalyzed clot formation，Free Radical Biol Med，1995，18:815-21.
5 Zawadzk-Bartczak E，Kopka L，Gancarz A.Antioxidative Enzyme Proˉfiles in Fighter Pilots.Aviation，Space and Environmental Medicine，2003，6，654-658.
6 Lewis S D，Janus T J，Lorand L，et al.Regulation of formation of factor XIIIa by its fibrin substrates.Biochem，1985，24:6772-6777.
7 Muszbek L，Adany R，Mikkola H.Aspects of blood coagulation factor XIII.I.Structure，distribution，activation，and function，Crit Rev Clin Lab Sci，1996，33:357-341.
8 钱锦康，巴福森，吴元亮，等.多媒体显微诊断仪对人体健康状态检测.航天医学与工程，2000，13（6）:444-447.
作者单位:1100036北京空军航空医学研究所
清华同方电子股份有限公司