Ki67、TIAI、GranzymeB鼻腔淋巴瘤中的表达及临床意义

　　【摘要】 目的 探讨核抗原Ki67和细胞毒蛋白TIAI、GranzymeB在鼻腔淋巴瘤（NK/T）的表达及意义。方法 以NK/T淋巴瘤34例石蜡组织标本为研究对象，同部位B细胞淋巴瘤8例为对照，行免疫组织化学染色（SABC法）。结果34例NK/T中CD45RO阳性20例，CD3阳性25例，CD56阳性18例，TIAI阳性28例，GranzymeB阳性20例，Ki67阳性率60%～95%34例。B细胞淋巴瘤除Ki67阳性率为30%～80%者6例以外，各免疫表型均为阴性。背景反应性中性粒细胞和组织细胞常表达TIAI，但不表达GranzymeB，肿瘤细胞异型性、Ki67阳性率与GranzymeB表达显著相关。结论Ki67阳性率、TIAI、GranzymeB对NK/T淋巴瘤诊断有很大参考价值，尤其GranzymeB特异性大于ITIA，NK/T的常规诊断可联合使用CD45RO、CD3、CD56、细胞毒蛋白、Ki67等免疫组化染色确定。

　　 Expression and clinical significance of Ki67， TIAI，Granzyme B in nasal lymphoma

    Zheng Jinhua，Zhang Rongjun，Gao Zifen

　　Department of Pathology，Mu Dan Jiang Second Hospital，Mudanjiang157000.

　　【Abstract】 Objective To investigate the expression and significance of Ki67，cytotoxic proteinsTIAI，GranzymeB in nasal lymphoma（NK/T）.Methods Paraffin-embedded tissues of34cases of nasal NK/T-cell lymˉphoma，8midline B-cell lymphomawere studied using immunohistochemical method.Results In34NK/T-cell lymphoma，positive immunoreactivity was observed in20forCD45RO，25for CD3，18for CD56，28for TIAI，20for GranzymeB，60%～95%in34cases for Ki67.No positive reactivitywasdemonstrated in8midline B-cell lymphoma for these antibodies，except30%～80%in6cases for Ki67.The reactive polymorphonuclear leucocytes and histioˉcytes were positive for TIAI，but not for Granzyme B;The tumor cell pleomorphism and positive rate of Ki67were sigˉnificantly associated with Granzyme B expression.Conclusion Positive rate of Ki67，TIAI，GranzymeB are very imˉportant to diagnose NK/T lymphoma，especially Granzyme B has higher specificity than TIAI.The immunostaining usˉing a panelof antibodies including CD45RO，CD3，CD56，cytotoxic proteins and Ki67is helpful in routine pathologic diagnosis of NK/T-cell lymphoma.

　　Key words NK/T-cell lymphoma Ki67 cytotoxic protein immunohistochemistry 

　　鼻腔NK/T细胞淋巴瘤是一种特殊类型外周NK细胞和T细胞淋巴瘤，近年来对其研究获新进展。NK/T的组织病理学改变虽已明确，但对其特异性免疫标记、细胞来源等问题尚需进一步认识。本研究组对960例恶性淋巴瘤回顾性研究，并对诊断为鼻腔NK/T细胞淋巴瘤的34例用Ki67、TIAI和GranzymeB抗体做免疫组化染色，探讨用于外检病理诊断最佳组合，以及Ki67、细胞毒蛋白在该肿瘤的表达及其意义。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

    选自北京大学医学部病理学系220实验室2001～2003年间鼻腔组织活检，病理诊断为NK/T的34例。对照为同时期连续病例中同部位B细胞淋巴瘤8例;另外随意选4例非特殊性外周T细胞淋巴瘤作为细胞毒蛋白对照。标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色。

    1.2 方法

    免疫组化采用SABC法，均经微波抗原修复处理。采用抗体:B细胞标记CD79a、CD20;T细胞和NK细胞相关标记CD45RO、CD3;细胞毒颗粒相关蛋白TIAI，Granzyme;同时进行细胞增殖活性Ki67。抗体均购自Dako公司，染色结果按阳性肿瘤细胞半定量分析，0～5%为（-）:6%～10%为（+/-）;11%～20%为（+）;21%～50%为（++）;>50%为（+++）。（+）以上为阳性标记，以下为阴性。

　　2 结果

　　2.1 临床资料

    34例NK/T细胞淋巴瘤中男26例，女8例。年龄14～74岁。其中鼻腔20例，鼻咽8例，口咽4例，会厌2例。临床表现为鼻塞、咽痛、头痛或伴发热。大体检查:病变部位多隆起，界限不清，常见溃疡及坏死，表面常附白苔或干痂。对照组中面部B细胞淋巴瘤8例，其中男4例，女4例，年龄32～75岁，平均56岁;鼻腔2例，咽部4例，会厌2例。

　　2.2 病理检查

    34例NK/T肿瘤细胞均有不同程度的凝固性坏死，异型细胞弥漫增生并穿插于腺体与表皮之间，细胞体积中等偏大，胞浆宽、透明，核大，异型明显，染色质粗细不等，有时可见核仁。血管增生较明显，可见肿瘤细胞浸润血管和浸润神经现象。背景炎细胞可见淋巴细胞、中性粒细胞、浆细胞、嗜酸性粒细胞和组织细胞。

　　8例B细胞淋巴瘤中4例可见凝固性坏死，肿瘤细胞弥漫分布，需与NK/T细胞淋巴瘤鉴别。

　　2.3 免疫组化

    阳性表达详见表1，其中28例TIAI（+）以上，20例GranzymeB（+）以上，背景反应性细胞表达TIAI，不表达GranzymeB。肿瘤细胞体积稍大、异型明显者11例，其TIAI、GranzymeB均阳性;而肿瘤细胞体积稍小、异型较小的 23例中TIAI16例（+），7例性（P>0.05），而与GranzymeB表达相关（P<0.05）。Ki67阳性率为80%～95%者15例，其中表达TIAI（+）11例，GranzymeB（+）11例;而Ki67阳性率60%～79%者为19例，其中表达TIAI（+）17例，TIAI（-）2例，GranzymeB（+）9例，GranzymeB（-）10例，经统计学处理肿瘤细胞Ki67阳性率的高低与TIAI表达无相关性（P>0.05），而与GranzymeB表达有相关性（P<0.05）（见表2）。表1 34例鼻NK/T细胞淋巴瘤细胞毒蛋白的表达细胞毒蛋白 阳性程度（%）    n  -  +/-  +  ++  +++TIAI  34（100.0）  1（2.9）  5（14.7）  9（26.5）  9（26.5）  10（29.4） GranzymeB  34（100.0）  8（23.5）  6（17.6）  7（20.6）  6（17.6）  7（20.6）表2 34例鼻NK/T细胞淋巴瘤细胞毒蛋白的表达和肿瘤细胞的异型性及Ki67的相关性n TIAI    +  -  P GranzymeB    +  -  P异型性 34  +  11  0  11  0     -  16  7  >0.05  9  14  <0.05 Ki67  34  60%～79%     80%～95%  17 11  2 4  >0.05  9 11  10 4<0.05对照组中面部B细胞淋巴瘤8例，CD20和CD79a（+），而，CD54RO、CD3、CD56、TIAI、GranzymeB（-）;颈淋巴结外周T细胞淋巴瘤4例，全部CD20（-）、CD79a（-）、CD56（-），CD45RO（+）、TIAI（+），1例GranzymeB（+）。

　　3 讨论

    T/NK细胞淋巴瘤较B细胞淋巴瘤低，常发生在结外。目前认为，T/NK细胞淋巴瘤是一种特殊类型的肿瘤。但难以确定其细胞来源是真性NK细胞还是表达NK相关标记的细胞毒T细胞（CTL）。NK/T的一般特征为:（1）组织学呈血管中心性浸润、凝固性坏死、细胞异型性;（2）免疫学表现CD45RO、CD3、CD56;（3）临床上较结内T细胞淋巴瘤预后差。由于该肿瘤常表现细胞大小、形态不一，CD56表达常不理想，另外因取材受限、坏死、炎症背景等影响诊断。具有细胞毒功能的NK细胞和CTL胞质中存在一组特化的溶解蛋白，在介导细胞毒过程中起关键作用，其主要成分有T细胞内抗原（TIAI）、孔形成蛋白-穿孔素和丝氨酸蛋白酶-粒酶B（GranzymeB），前者存在于所有细胞毒细胞，后两者存在于活化的细胞毒细胞。TIAI除标记NK和CTL细胞以外，还可以标记中性粒细胞和淋巴细胞。本研究中端粒酶B阳性率为60%，较TIAI阳性率80%为低。但特异性强，与TIAI联合使用对NK/T诊断帮助大。目前认为，CD3、CD56、细胞毒性蛋白，以及EBV原位杂交的表达有利于诊 断NK/T细胞淋巴瘤。而细胞毒蛋白比EBV更有参考价值。本研究中，GranzymeB的表达与肿瘤细胞的异型性及Ki67表达程度相关。近来研究表明，GranzymeB阳性的CTL淋巴瘤在组织学上可见更明显的血管侵袭、坏死、细胞异型 ［1］  ，也有人认为，GranzymeB阳性病例易复发，生存率下降，GranzymeB可作为预后不良的指标 ［2］  。Ki67阳性程度与GranzymeB表达相关需进一步研究。

　　综上所述，TIAI和GranzymeB对NK/T细胞淋巴瘤的诊断有较好的特异性和敏感性，后者的特异性大于前者。诊断NK/T细胞淋巴瘤时，联合使用CD45RO、CD3、CD56、TIAI或GranzymB等免疫组化染色为HE形态学诊断提供重要参考。

　　参考文献

　　1 De-Bruin PC，Kummer JA，Van der Valk P，et al.GranzymeB expressˉing peripheral T-cell lymphomas:neoplastic equivalents of activated cytotoxic T cell with preference for mucosa-associated lymphoid tissue localization.Blood，1994，84:
3785.

　　2 Kim GE，Yang WI，Lee，et al.The significance of GranzymeB expression in patients with angiocentric lymphoma of the head and neck.Cancer，2001，91:2343.

　　作者单位:1157000黑龙江省牡丹江市第二人民医院病理科

    2牡丹江市肿瘤医院

    3北京大学医学部病理学系