L-精氨酸对应激性大鼠ANP浓度的影响

　　【摘要】 目的  研究L-精氨酸（L-arg）对应激性大鼠不同组织中ANP浓度的影响及与BP变化的关系。 方法  给SD大鼠的饮水中添加L-arg，并给予间断性足底电刺激15天，观察其尾动脉BP的变化情况及15天后大鼠血浆、心耳、心室和血管组织中ANP浓度变化。 结果  单纯应激组在第15天后测得BP与对照组相比明显增高（P<0.01），血浆、心耳、心室和血管中的ANP浓度降低非常明显，与对照组相比差异有非常显著性（P<0.01）。而L-arg+应激组第15天测得BP明显低于单纯应激组（P<0.05），与对照组差异无显著性（P>0.05）。该组大鼠血浆、心室和血管组织中的ANP的浓度与单纯应激组没有明显区别，但显著低于对照组（P<0.01）;心耳组织中的ANP浓度与单纯应激组相比明显回升（P<0.01），但仍低于对照组（P<0.01）。 结论  应激刺激使血压升高与各种组织中ANP减少密切相关，L-arg阻抑了应激性大鼠BP升高的作用可能与促进心耳细胞ANP的产生有关。
            
　　Effect of L-arginine on the atrial natriuretic peptide in stress rats
     
　　Yin Yanru，Bo Lin
    
　　Department of Physiology，The South Medical University，Guangzhou510315.
   
　　【Abstract】 Objective To researth the effect of L-arginine on the atrial natriuretic peptide（ANP）and blood pressure（BP）in stress rat.Methods All the Sprague-Dawley rats were divided into three groups as control，stress and L-arg+stress group，L-arginine were added in drinking-water for L-arg+stress group and electric stimulus were given intermittently to stress and L-arg+stress groups in foot-plate for15days.The BP of tail artery were measured per two days，and the concentration of ANP of plasma，auricle，ventricle and vascular tissues were detected at the last day.Results There are significantly difference in the BP between the control group and stress group in the15th day（P<0.01）.The ANP levels of plasma，auricle，ventricle and vascular tissues decreased significantly com-pared with those of control group（P<0.01）.The difference in the BP between the control group and L-arg+stress group were not remarkable.But in the15th day，the BP of the L-arg+stress group was lower than that of the stress group（P<0.05）.The ANP level of auricle of the L-arg+stress group were higher than that of the stress group（P<0.01）.Conclusion The decrease of ANP may be interrelated with the increase of BP in stress rat.L-arg could resist this kind of effect by inducing the production of ANP in auricle.
   
　　Key words L-arginine nitric oxide atrial natriuretic factor stress BP
      
　　应激性高血压的发生是体内多种因素相互作用的结果。如在应激过程中，肾素-血管紧张素系统（RAS）功能亢进，交感神经紧张性增加，肾上腺髓质释放肾上腺素和去甲肾上腺素等等，同时一些与上述功能有拮抗作用的物质的合成或释放出现异常。已发现，应激性大鼠血压升高时血管内皮细胞及其他组织中的一氧化氮（nitric oxide，NO）合成减少 ［1］ 。本研究观察NO的合成底物L-精氨酸（L-arginine，L-arg）对应激性大鼠血浆、心耳、心室和血管组织中心钠素（atrial natriuretic peptide，ANP）浓度的影响及血压（BP）的关系，以揭示应激性发生时L-arg或NO对ANP浓度变化的影响及与血压变化的相关性。

　　1 材料与方法
    
　　1.1 实验动物与分组 雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠（200±5g）由第一军医大学实验动物中心提（动物合格证号:99B023）。随机分为三组，即对照组、应激组和L-arg+应激组，每组10只。对照组:动物自由饮水，不给应激刺激。应激组:动物自由饮水，给间断性不定时足底电刺激与噪声刺激，刺激输出电压100～150V，刺激方波波宽20ms，间隔时间5～10s。每日2次，每次2h，持续15天。L-arg+应激组:动物自由饮水，饮水中添加L-arg，用量为500mg·kg -1 ·d -1 ）。并给应激刺激，条件同应激组。
   
　　1.2 主要试剂 L-arg由上海丽珠生物技术公司提供。ANP药盒由北方免疫试剂研究所提供。
   
　　1.3 指标测定 BP测定:各组动物隔日上午9～11时测定尾动脉BP一次，共测2周。ANP浓度测定:第15天每只动物测BP后，取血分离血清，取心耳、心室和血管组织在冷生理盐水中冲洗残留血液后滤纸吸干，准确称取重量，放入装有2ml冷生理盐水的匀浆器中进行研磨制成各组织匀浆，3000rpm，离心10min，取其上清液备用，集齐样本进行ANP测定，操作按其说明书进行。
   
　　1.4 统计学方法 数据以ˉx±s表示。各组数据采用t检验。

　　2 结果
    
　　2.1 应激大鼠BP的变化 大鼠经15天应激刺激后BP较应激前升高，也较对照组高（P<0.01）。而L-arg+应激组应激前后BP变化不明显（P>0.05），但与应激组相比差异有非常显著性（P<0.01）。见表1。
    
　　表1 应激性大鼠BP的变化 （略）
   
　　注:①compared with control P<0.01;②compared with stress P<0.01
    
　　2.2 应激大鼠不同组织中ANP浓度的变化 大鼠经过单纯应激15天，血浆、心耳、心室和血管中的ANP浓度降低非常明显，与对照组相比差异都有非常显著性（P<0.01）。而L-arg+应激组的大鼠经过15天的应激刺激后，血浆中ANP的浓度与单纯应激组没有明显区别，仍明显低于对照组（P<0.01）。心耳组织中的ANP浓度与单纯应激组相比明显回升（P<0.01），但仍低于对照组（P<0.01），心室和血管组织中ANP的浓度与单纯应激组没有明显区别（P>0.05），但仍比对照组低（P<0.05）。见表2。
    
　　表2 应激大鼠不同组织中ANP浓度的变化 （略）
    
　　注:①compared with stress P<0.01;②compared with con-trol P<0.01
    
　　3 讨论
    
　　1984年De Beld首先发现在心肌细胞内存在着一种快速、强烈的利尿钠因子，并证明它是一种主要由心房合成、储存和分泌的多肽激素，称为ANP。由于ANP具有强大的利钠、利尿、舒张血管、降低血压、对抗肾素-血管紧张素系统（RAS）和加压素的作用，因此它在各种高血压疾病的发病和防治上具有重要意义。ANP与其特异性受体结合，活化鸟苷酸环化酶，使cGMP水平升高，进而激活G蛋白激酶可以增进膜钙泵和抑制钠钾ATP酶的活性，促进细胞内钙离子外流，产生舒张血管等效应 ［2］ 。
   
　　慢性应激刺激使血压升高是最常发生的变化。大鼠经 15天应激BP显著升高，这时血浆、心耳、心室和血管中的ANP浓度降低非常明显，说明机体在应激的过程中心脏及其他组织中ANP的合成或释放有障碍并且与血压升高的发生和维持密切相关。由于ANP浓度降低，其舒张血管的效应、利钠、利尿及对抗RAS的作用都降低了。因此，RAS功能相对亢进，AⅡ浓度升高，血压升高。
     
　　应激性高血压发生的原因是多方面。研究发现NO轻度减少就足以引起肾排钠障碍，导致细胞外液容量增加，血压升高 ［3，4］ 。慢性应激大鼠的血管内皮细胞及其他组织中NO合成或释放减少，与应激性血压升高密切相关。本研究给大鼠应激性间断足底电刺激15天的同时在饮水中添加了NO的合成底物L-arg，结果BP没有升高且有降低趋势，同时心耳组织中的ANP浓度显著高于单纯应激组，血浆、心室和血管组织中ANP的浓度与单纯应激组没有明显区别，但均低于对照组。上述实验结果说明，应激刺激使血压升高与各种组织中的ANP减少密切相关。特别是心耳细胞中的ANP尤其重要，L-arg阻抑了应激性大鼠BP升高的作用可能与促进心耳细胞ANP的产生有关，与其他组织中的ANP相关性不大。
   
　　应激性大鼠的血管内皮细胞及其他组织中NO和ANP合成减少，因此血压升高。有资料显示，无论是在体还是离体状态下，ANP有增加NO合成和分泌的能力 ［5］ 。由此可见，在应激状态下ANP合成或释放减少也影响了NO合成或释放。二者同时减少，致使血压升高。L-arg或NO增多又是如何使心耳组织中的ANP浓度增加的?其机制并不清楚，相关文献也鲜有报道，有待进一步探讨。
   
　　由此可见，应激刺激使血压升高与多种因素密切相关，如各种组织中ANP和NO合成或释放减少;相反L-arg或NO增多可以促进心耳细胞ANP的产生，从而调控应激性大鼠BP的变化。
     
　　参考文献
    
　　1 尹艳茹.应激性大鼠不同组织中NO浓度的变化与血压的关系.中国临床药理学与治疗学，2004，9（2）:223-225.
   
　　2 Pilz R B，Casteel DE.Regulation of gene expression by cyclic GMP.Circ Res，2003，93（11）:1034-1046.
   
　　3 Edward GS，Nobuyo Maeda HS，Kim P，et al.Elevated blood pressures in mice lacking endothelial nitric oxide synthase.Proc Natl Acad Sci USA，1996，93（23）:13176-13181.
   
　　4 Ernesto B，Alejandro S，Maria T，et al.Effect of salt intake on endotheli-um-dervied factors in a group of patients with essential hypertension.Clinical Science，2001，101:73-78.
   
　　5 Maria AC，Laura V，Gonzalez B，et al.Atrial natriuretic peptide modifies arterial blood pressure through nitric oxide pathway in rats.Hyperten-sion，2000，35:1119. 

　　* 基金项目:广东省医学科学技术研究基金资助项目（NO.1999482）
   
　　作者单位:510315广东广州南方医科大学生理学教研室