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【摘要】 目的 探讨刺五加胶囊对免疫系统的影响。 方法 选择288只雄性小白鼠，进行六项免疫功能指标的测定。 结果 分别以225、450、900mg/kg BW剂量的刺五加胶囊给予小鼠连续灌胃30天，能促进小鼠的脾脏淋巴细胞增殖、转化作用，提高小鼠的抗体生成细胞数、血清溶血素水平，促进小鼠的单核-巨噬细胞的碳廓清和单核-腹腔巨噬细胞的吞噬能力，促进小鼠的迟发型变态反应。 结论 刺五加具有增强小鼠免疫功能作用。
【关键词】 刺五加;小白鼠;免疫功能
Study of ciwujia capsule on enhancing mice immune function
LIU Rong-zhen，ZHAO Peng，LI Feng-wen，et al.
Guangxi Zhuang Autonomous Region Center for Disease Preven-tion and Control，Nanning530021，China
【Abstract】 Objective The aim of this studywas to investigate the influence of ciwujia capsule on the immune sys-tem.Methods 288male mice were picked to take the measurement of6immune function indexes.The mice stomach were fill with the ciwujia capsule at the doses of225、450and900mg/kg bw，respectively，once a day for30days.Re-sults The ability on transformation and proliferation of splenic lymphocyte were raised;the quantity of the mice anti-body-producing cell and the sheep erythrocyte antibody levels in serum increased;the ability of mononuclear macrophage eliminating carbon and mononuclear celiac macrophage phagocytic activity were raised，and the delayed allergy was accelerated.Conclusion It is suggested that ciwujia capsule could enhance immune function.
【Key words】 ciwujia;mice;immune function
刺五加属五加科植物，是我国东北和华北地区特产的名贵药材。因为它周身密生针刺，五叶交故称刺五加，由于它的药效和人参十分相似，故又称“五加参”之别名。本试验主要研究刺五加胶囊对小鼠免疫功能的影响。
1 材料与方法
1.1 实验材料 受试物由辽宁世纪生肽科技有限公司提供的刺五加胶囊，规格为300mg/粒，人体推荐用量为每人（成人）每日3次，每次3粒，本试验组剂量为225、450、900mg/kg BW。
1.2 实验动物及环境 选用广西医科大学医学实验动物中心【批准号为:桂动许字（2000）第001号】繁殖的清洁级健康成年昆明种雄性小鼠288只，体重为18～22g，分为6批，每批48只。本中心实验动物房合格证号:桂医动字第23003号。动物室温度:22℃～25℃，相对湿度:55%～70%。
1.3 主要仪器与试剂
1.3.1 仪器 全自动酶标仪、冷冻离心机、二氧化碳培养箱、微量血凝试验板、电子分析天平、显微镜、打孔器、恒温培养箱、微量注射器等。
1.3.2 试剂 NaCl、ConA、MTT、2-ME、异丙醇、青霉素、链霉素、盐酸、SRBC、补体、Hank's液、PBS缓冲液、SA缓冲液、琼脂糖、Na 2 CO 3 、RPMI1640细胞培养粉、丙酮、甲醇、DNFB、硫化钡、印度墨汁等。
1.4 试验方法 依据卫生部《保健食品检验与评价技术规范-2003》中增强免疫力功能检验方法。实验设4个组，即3个试验组和1个阴性对照组，每组12只小鼠。采用灌胃法，每天以0.2ml/10g BW的容量给小鼠灌胃，不同剂量的受试物，阴性对照组给予等量蒸馏水。每天1次，连续30～35天。末次给样1h以后进行各项免疫指标的测定。
1.4.1 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验 末次给受试物1h后处死动物、无菌取脾，制成脾细胞悬液，将每一份悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75μl ConA液（相当于7.5μg/ml），另一孔作为对照，置5%CO 2 ，37℃二氧化碳孵箱中培养72h。培养至68h时，每孔吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT（5mg/ml）50μl/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后将溶解液移入微量培养板中，用全自动酶标仪波长600nm处测定OD值。用加ConA孔的OD值减去不加ConA孔的OD值表示淋巴细胞的增殖能力，试验组的OD差值高于阴性对照组且差异有显著性的，可判断该项实验结果阳性。
1.4.2 二硝基氟苯诱导小鼠DTH（耳肿胀法） 给受试物至25天将小鼠腹部皮肤脱毛后用DNFB溶液涂抹致敏，5天后将DNFB涂抹于小鼠右耳攻击，24h后处死小鼠，取8mm直径的耳片称重，左右耳重量之差表示DTH的程度。试验组的左右耳重量之差值高于阴性对照组且差异有显著性的可判定该项实验结果阳性。
1.4.3 抗体生成细胞检测（Jerne改良玻片法） 末次给受试物前5天给受试小鼠每只腹腔注射0.2ml2%（v/v）SRBC细胞悬液进行免疫，5天后处死，无菌取脾制成脾细胞悬液。将表层培养基（1g琼脂糖加双蒸水至100ml）加热溶解后，放45℃～50℃水浴保温，与等量pH7.2～7.42倍浓度的Hank's液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加50μl10%SRBC（v/v，用SA缓冲液配置），25μl脾细胞悬液，迅速混匀，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，待凝固后，将其水平倒扣于片架上，放入二氧化碳培养箱中孵育1.5h，然后用SA缓冲液稀释的补体（1:8）加入玻片架凹槽内，继续孵育1.5h，计数溶血空斑数。用空斑数/全脾细胞表示抗体生成细胞数。试验组的空斑数高于阴性对照组且差异有显著性的可判定该项实验结果阳性。
1.4.4 血清溶血素的测定（凝集法） 末次给受试物后1h给小鼠腹腔注射SRBC悬液进行免疫，然后取其血清用生理盐水倍比稀释，分别置于微量血凝板内，37℃孵育3h，观察血细胞凝集程度（0～Ⅳ级）。试验组的抗体积数高于阴性对照组且差异有显著性的可判定该项实验结果阳性。
1.4.5 小鼠碳廓清试验 末次给受试物后1h经尾静脉给小鼠注射稀释的印度墨汁（用生理盐水稀释4倍）（10mg/kg），墨汁注入后立即计时，2min和10min分别从眼内眦取血20μl加到2ml0.1%Na 2 CO 3 溶液中，用754紫外可见光分光光度计在600nm波长处测光密度值（OD）。处死小鼠，取肝脏和脾脏称重。按下式计算吞噬指数a。
a=K 1/3 ×体重/（肝重+脾重） 式中K=（lgOD 1 -lgOD 2 ）/（t 2 -t 1 ）
试验组的吞噬指数高于阴性对照组且差异有显著性的可判定该项实验结果阳性。
1.4.6 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验（半体内法） 末次给受试物后1h，给小鼠腹腔注射鸡红细胞悬液，每间隔30min处死小鼠，腹腔注入2ml生理盐水，取腹腔洗液制片，放37℃培养箱内孵育30min;于生理盐水中漂洗后晾干，用1:1丙酮甲醛溶液固定，4%（v/v）Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水晾干。油镜下计数巨噬细胞，每张片计数100个，观察记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数，并同时观察记录鸡红细胞被消化的程度（分Ⅰ～Ⅳ级）。
试验组的吞噬率或吞噬指数高于阴性对照组且差异有显著性的可判定该项实验结果阳性。
1.5 试验数据统计 应用SPSS统计软件进行方差分析统计处理。
2 试验结果
2.1 受试物对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力的影响 见表1。
表1 ConA诱导的脾淋巴细胞转化实验结果 （略）
从表1可见，各试验组的OD差值均值均大于阴性对照组，高剂量组与阴性对照组的差异有显著性（P<0.05），表明该受试物具有刺激脾淋巴细胞增殖、转化的作用。
2.2 受试物对小鼠的细胞免疫功能的影响 见表2。
表2 迟发型变态反应（DTH）实验结果 （略）
由表2可见，各试验组小鼠的左右耳重量差值均大于阴性对照组，与对照组的差异具有显著性（P<0.01），表明该受试物能提高DNFB诱导的小鼠耳肿胀程度，即具有促进迟发型变态反应的作用。
2.3 受试物对小鼠的抗体生成细胞数的影响 见表3。
表3 抗体生成细胞检测实验结果 （略）
从表3可见，各试验组小鼠的抗体生成细胞数均值均高于阴性对照组，高、中剂量与对照组的差异均有显著性（P<0.05，P<0.01），表明该受试物具有促进抗体生成细胞增殖的作用。
2.4 受试物对小鼠的体液免疫的影响 见表4。
表4 小鼠血清溶血素的测定结果 （略）
从表4可见，各试验组小鼠的抗体积数均值均高于阴性对照组，高、中剂量组与对照组的差异具有显著性（P<0.01），表明该受试物具有增强小鼠血清溶血素水平的作用。
2.5 受试物对小鼠的单核-巨噬细胞碳廓清功能的影响 见表5。
表5 小鼠碳廓清实验结果 （略）
从表5可见，各试验组的吞噬指数（a）与阴性对照组的差异均有显著性（P<0.01），表明该受试物具有促进小鼠的单核-巨噬细胞碳廓清功能。
2.6 受试物对小鼠的单核-巨噬细胞吞噬功能的影响 见表6。
表6 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验结果 （略）
从表6可见，各试验组小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率及吞噬指数均高于阴性对照组，各剂量组的吞噬率与阴性对照组的差异有显著性（P<0.01），高剂量的吞噬指数与阴性对照组的差异有显著性（P<0.05），表明该受试物具有促进小鼠的单核-巨噬细胞吞噬功能作用。
3 讨论
刺五加活性成分为刺五加苷A、B、B 1 、C、D、E、F和刺五加多糖等 ［4］ 。刺五加具有抗疲劳、增强大脑皮层的抑制作用 ［2］ 。也有研究报道刺五加的多种活性成分具有抗肿瘤、抗衰老等药理作用 ［3］ 。
本次试验结果表明刺五加胶囊在小鼠的免疫系统中起着非常重要的作用。在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能三方面都具有增强作用。这也许与本植物含有多种活性成分有关，至于哪种成分起主导作用有待进一步研究。
【参考文献】
1 杨春花，刘刚，张崇禧，等.刺五加的研究进展.人参研究，2004，1:17.
2 张玉鹏.刺五加注射液的临床应用与研究.蛇志，2004，16（2）:34.
3 王志睿，林敬明，张忠义.刺五加化学成分与药理研究进展.中药材，2003，26（8）:603.
4 范丽静，蒋晓红，姚国恩.刺五加注射液的研究进展.中成药，2003，25（6）:488.
5 卫生部.保健食品检验与评价技术规范，2003年版，22-30.
作者单位:530021广西南宁，广西壮族自治区疾病预防控制中心
（编辑:悦 铭）