胃癌组织中c-met的表达及临床意义

　　【摘要】 目的  研究肝细胞生长因子（HGF）受体即c-met蛋白在胃癌组织标本中的表达及临床意义。 方法  应用免疫组织化学的方法检测53例临床手术切除的胃癌标本及相应的胃黏膜标本c-met的表达。 结果  c-met蛋白不同程度的表达于正常胃黏膜、胃癌组织中，正常胃黏膜阳性表达率为22.64%（12/53），胃癌组织阳性表达率为75.47%（40/53）。胃癌组织中c-met蛋白的表达水平与形态学分类、临床分期、肝转移无关、与组织学分类、淋巴转移、浸润深度有关。 结论  c-met蛋白在胃癌组织中及其配对的正常胃黏膜中存在不同程度的表达，在肿瘤中的表达水平明显高于正常黏膜。过度表达c-met是胃癌的一种特有的现象，证实c-met是一种高表达的原癌基因。
    
　　【关键词】  c-met;肝细胞生长因子;胃癌;免疫组织化学
    
　　The clinical significance of the expression of c-met in gastric cancer
     
　　ZHU Chang-hong，ZHANG Rui-kui，WEI Ya，et al.

　　Medical College of Chinese People's Armed Police Forces，Tianjin300162，China

    【Abstract】 Objective To investigate the expression of c-met protein levels in specimen of gastric cancer and its roles in the pathogenesis of gastric cancer.Methods The immunohistochemistry technique was applied to examine the expression of c-met protein in53specimen of gastric cancer.Results C-met protein expression of variable intensi-ty and extend was detected in the normal gastric mucosa and adenocarcinomas in gastric cancer.The positive expres-sion scores in normal mucosa was22.64%（12/53）.75.47%（40/53）of gastric cancer expressed c-met more in-tensely and extensively than matched normal gastric mucosa，which was statistically significant（P<0.01），the extent of c-met expression in tumors was independent of pathomorphology，tumor stage，hepatic metastasis and dependent of degree of differentiation（P<0.05），lymph metastasis（P<0.05）in gastric carcinoma.Conclusion The expression level of c-met in adenocarcinomas was much higher than that in paired normal mucosa.Over-expression of c-met was a tumor-specific phenomenon，which can provide that c-met was a new oncogenesis with high expression in gastric cancer.

    【Key words】 c-met;hepatocyte growth factor;stomach cancer;immunohistochemistry
      
　　目前认识到，胃黏膜病变极其复杂，涉及多种原癌基因的激活和抑癌基因的失活。最近国外学者Soman等应用反转录-多聚酶链反应（RT-PCR），在胃癌活检的不同病变组织中，检测到TPR-met mRNA的过量表达，揭示了c-met是与胃癌相关的新的原癌基因 ［1］ 。

    本研究主要从形态学角度，采用免疫酶组织化学的方法，研究c-met在胃癌组织标本中的表达定位及强弱情况，并对肿瘤组织与正常黏膜的表达差异进行分析。

　　1 材料
    
　　1.1 标本的采集 1998年1月～2005年5月武警医学院附属医院胃癌及邻近正常胃黏膜组织标本53例，男36例，女17例，平均59.57岁，术后病理均证实为胃癌同前。

    1.2 临床和病理资料统计分类 本文从以下几种临床病理因素角度探讨c-met表达特征。53例胃癌标本其形态学分类分为隆起型、浸润型、溃疡型分别为12、15、26例，组织学分类分为管状腺癌及乳头状腺癌，黏液癌与低、未分化癌分别为37、16例，临床分期Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ分别为25、28例，有无淋巴结转移分别为30例、23例，浸润深度浆膜下、全层分别为21例、32例，有无肝转移分别为12例、41例。病理诊断与分级参照全国胃癌研究协作组织制定的标准 ［2］ 。

    1.3 主要试剂 兔抗人c-met单克隆抗体，SANTA CRUZ公司产品。Envision试剂:多聚物酶标（HRP）抗兔IgG（即用型），美国DAKO公司。0.01mol/L柠檬酸缓冲液（pH=7.6）。

　　2 方法
    
　　2.1 操作流程 石蜡切片4μm，贴片后58℃烤18h。石蜡切片常规脱蜡至水，PBS洗3×3min，0.03%H 2 O 2 每张切片50μm，作用20min，室温，石蜡切片抗原修复98℃10min×2。一抗1∶500稀释，4℃孵育过夜，PBS洗3×3min，Envision试剂，37℃，30min，PBS洗3×3min，0.04%DAB+0.03%H 2 O 2 显色8min，水洗，苏木素衬染2min，水洗，盐酸乙醇分化3s，水洗。微波蓝化。常规树脂封片，结果:阳性呈棕色。

    2.2 实验对照的设置 用PBS缓冲液代替c-met-抗作空白对照。用正常的非免疫血清代替c-met-抗作替代对照。

    2.3 结果判断 （1）显微镜下以胃黏膜表面黏液上皮和胃腺小凹上皮的胞膜，特别是腺上皮细胞的腔面膜上出现的棕黄色颗粒或团块者为c-met蛋白基因表达阳性，可伴胞浆着色。（2）阳性细胞记数400倍视野下计数染色细胞数。同一切片阳性细胞>30%为阳性病例，阳性细胞30%为（+），50%～80%（++），>80%（+++）。

    2.4 统计学处理 计数资料采用χ 2 检验，P<0.05为差异有显著性。
    
　　3 结果
    
　　c-met蛋白不同程度的表达于正常胃黏膜和胃癌组织中，阳性染色部位在胃黏膜表面黏液上皮和胃腺小凹上皮的胞膜，特别是腺细胞的腔面膜上。正常黏膜的阳性表达率为22.64%（12/53）。

    c-met蛋白在胃癌组织中的表达为75.47%（40/53）。阳性表达分别为（+）28.30%（15/53），（++）30.19%（16/53），（+++）16.98%（9/53）。

    胃癌组织中的c-met蛋白的表达水平与形态学分类、临床分期、肝转移与否无关，与组织学分类、淋巴结转移、浸润深度有关，见表1。
    
　　表1 c-met蛋白的表达与胃癌临床特征的关系　略
         
　　4 讨论
    
　　c-met蛋白是一种由c-met原癌基因编码的蛋白产物，为肝细胞生长因子受体，具有酪氨酸激酶活性，与多种癌基因产物和调节蛋白相关，参与细胞信息传导、细胞骨架重排的调控，是细胞增殖、分化和运动的重要因素。目前认为，c-met与多种癌的发生和转移有密切相关，许多肿瘤病人在其肿瘤的发生和c-met转移过程中均有c-met过度 表达和基因扩增。最近研究表明，在胃癌的不同病变组织中均可检测c-met的过量表达，揭示了c-met是与胃癌相关的新的原癌基因。本组病例c-met原癌基因蛋白在胃癌标本中的阳性表达率结果与国外相关文献报道类似 ［3］ 。Kauma等 ［4］ 用盐酸造成鼠胃黏膜炎症、溃疡等损伤后，发现伴随胃黏膜的修复过程有c-met蛋白表达升高。Soman等 ［5］ 利用RT-PCR技术检测胃癌癌前病变各期胃黏膜细胞，不但在人类4个胃癌细胞系检测到tpr-met mRNA高表达（tpr-met重排基因是c-met原癌基因活化的一种形式），而且在胃黏膜活检中发现浅表性胃炎（2/4）、萎缩性胃炎（5/7）、肠化生（2/5）到胃癌（1/2）各期病变中也有tpr-met mRNA高表达。提示c-met原癌基因重排和高表达出现于胃癌形成早期。由于胃癌的发生涉及多个癌基因的激活和抑癌基因的失活，单一的c-met原癌基因的活化可能并不一定导致细胞的恶变，但它反映细胞损伤与增殖的情况，是胃癌发生早期的改变。

    本组研究发现c-met蛋白过度表达与胃癌组织类型、胃癌浸润浆膜和淋巴结转移有关;与临床分期、形态学分类无关，检测结果显示Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期差异无显著性，说明c-met参与早期变化，即胃癌早期呈现高表达。c-met蛋白表达与肝转换无关。庄小强等 ［6］ 应用链霉素、生物素免疫组化染色（S-P）法研究显示，从浅表胃炎、萎缩性胃炎、肠化生、异型增生、早期胃癌到进展期胃癌的胃黏膜增殖恶化演变中，c-met蛋白的阳性表达递增，分别为24%、37%、52%、61%、67%和74%，且肠化生、异型增生、胃癌均显著高于浅表性胃炎。结果显示c-met蛋白的阳性表达与浆膜浸润、淋巴结转移相关，BorrmaannⅣ型的表达明显高于早期胃癌和BorrmaannⅠ、Ⅱ型。亦有国外学者报道c-met的表达与淋巴结转移和肿瘤浸润深度密切相关 ［7］ 。癌旁正常组织黏膜亦有一定表达，本研究中癌旁胃黏膜阳性表达率为22.64%（12/53）。尽管其阳性率低，阳性强度弱，但也反应出该区可能有癌基因的激活，有人认为，正常黏膜和癌旁组织有癌基因蛋白的异常表达，可能预示着该黏膜区已经受到损害。本研在c-met基因蛋白表达阳性的胃癌组织腺颈部均可见明显的阳性染色，而且在12例正常胃黏膜也可见腺颈部均可见明显的阳性染色，而且在12例正常胃黏膜也可腺颈部弱阳性染色，表明c-met原癌基因表达在胃腺颈部是常见现象，反映胃上皮的代谢更新活跃和损伤修复活动。分子生物学和基因水平的研究使得临床上发现新的、可靠的分子生物学预后判断因子以及进一步了解胃癌的生物学特征成为可能。对提高胃癌诊断水平，评估恶性程度，预算复发转移及鉴别高危人群有重要的指导作用。目前，早期胃癌的治疗效果令人满意，几乎所有西方和日本的研究者报道其5年生存率超过90%。但中、晚期胃癌的预后仍然很差，因此，早期诊断、早期治疗的研究是改善胃癌患者5年生存率的关键。确定胃癌标志物，制定简易、有效的普查和诊断方法对早期临床发现胃癌有重要意义。

　　【参考文献】
    
　　1 Soman NR，Correa P，Ruiz BA，et al.The tpr-met oncogenic rearrange-ment is present and expressed in human gastric carcinoma and precursor lesions.Proc Naial Acad Sci USA，1991，88:4892-4896.

    2 全国胃癌防治研究协作组病理组.胃及十二指肠黏膜活检病理.沈阳:辽宁人民出版社，1991，134-135.

　　3 Cameito E，Sobfinbo S，Simose M.The prognostic significance of ampli-fication and overexpression of c-metand c-erbB-2in human gastric carcinomas.Cancer，2000，88（1）:238-240.

    4 Kauma SW.Cytokines in Implantation.J Reprod Fertil Suppl，2000，553:1-5542.

    5 Soman NR，Correa P，Ruiz BA，et al.The tpr-met oncogenic rear-rangement is present and expressed in human gastric and precursor.Proc Natl Acan Sci USA，1991，88:4892-4896.

    6 庄小强，郑杰，林三仁.胃癌及癌前黏膜病变与c-met原癌基因表达的关系及预后研究.中华普外科杂志，2002，17（2）:107-108.

    7 Nakajima M，Sawada H，Yamada Y，et al.The prognostic significance of amplification and overexpression of c-met and c-erbB-2in human gastric carcinomas.Cancer，1999，85（9）:1894-1902.
　　作者单位:1　300162天津，武警天津一支队卫生队
  
　　　　　　 2　300162天津，武警医学院附属医院

　　（编辑:秋 实）