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高血压病人常有脂代谢的异常，为研究载脂蛋白B(APOB)基因XbaI酶切位点的变化对血压及血脂代谢的影响，为探讨土家族人群APOB基因多态性与高血压病人的相关性，我们采用聚合酶链反应—基因多态性酶切法(PCR／RFLP)研究了高血压病人的APOB基因的多态性。
1 资料与方法
1.1 研究对象 高血压(107例)及非高血压患者(103例)均为土家族，婚姻史为世代族内通婚。来源于湖南西部湘西自治州龙山、永顺、保靖县境内(简称湘)、重庆市秀山、酉阳县境内(简称渝)及与湖北省毗邻地区的土家族人群聚居区(简称鄂)。两组平均年龄分别为(56.3±12.6)岁及(55.1±13.4)岁(P＞0.05)。高血压病的诊断根据1978年WHO的标准。
1.2 方法 基因组DNA的提取方法参考《分子克隆实验指南》［1］。含有XbaI酶切位点的PCR引物序列为：XbaI5＇：GGA GAC TAT TCA GAA GCT AA：XbaI3＇：GAA GAG CCT GAA GAC TGA CT。以上引物及其他试剂(基因组除外)均购自华美公司，具体操作如下：预变性(94℃)4min后，开始30个循环，变性(94℃)1min，退火(52℃)2min，延伸(70℃)40s，最后70℃，5min，结束PCR。其PCR产物经限制性内切酶XbaI酶切后，在电泳图谱上出现433bp及277bp两个片段者为存在XbaI酶切位点(X+)的等位基因，如电泳后仅产生l条710bp区带者，为存在XbaI酶切位点(Ｘ-)的等位基因。
血脂测定：禁食、禁酒12h以后，抽血测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、载脂蛋白A(APOA)和载脂蛋白B(APOB)。试剂使用日本第一化学试剂盒，仪器使用日本产日立7600型全自动生化分析仪。
2 结果
见表1。由表1可知，高血压组APOBX+等位基因频率与非高血压组相比较有明显统计学意义(P＜0.05)，其血清LDL［(3.83±1.64)mmol／L］明显高于非高血压组［(2.36±1.17)mmol／L］，而HDL［(1.24±0.73)mmol／L］明显低于非高血压组［(1.75±0.51)mmol／L］，两者差异均有明显的统计学意义(P＜0.05)。两组TC［(6.01±1.63)mmol／L］与［(5.26±1.38)mmol／L］、TG［(1.79±0.93)mmol／L］与［(1.66±0.70)mmol／L］及APOB［(1.10±0.39)g／L］与［(0.98±0.33) g／L］水平未发现明显差异(P均＞0.05)。表1 APOB XbaI酶多态性基因型分布注：高血压组APOBX+：非高血压组APOBX+；P＜0.05
3 讨论
APOB是乳糜颗粒及LDL的主要载脂蛋白。以往对该基因多态性的研究多采用分子杂交的方法，操作复杂费时，采用PCR/RFLP方法无需同位素及探针，方法简便、省时、灵敏度高。Hegele等［2］发现高血压病人血压水平受APOB及其他数个与血脂、血凝相关基因的影响。我们发现高血压组APOBX+等位基因频率(0.1495)与非高血压组(0.0534)相比较有明显的统计学意义(P＜0.05)，这说明APOB基因XbaI多态性对高血压有一定的影响。但陈红等［3］报道中国北方汉族人群无明显差异，与我们研究的结果有差异，推测可能与种族、环境等因素有关。1993年UKKOLa等观察到非胰岛素依赖性糖尿病病人APOBX+等位基因频率增高，并发现X-等位基因与糖尿病微血管病变有关。祝有国等［4］报道中国苗族人群APOBX+等位基因多态性与心肌梗死相关。但有些学者认为APOB基因的这种突变与心血管及高血脂症的发病无明确的关系［5］。我们发现高血压组HDL降低，而LDL升高，高血压组APOBX+等位基因的频率有明显的统计学意义，说明中国土家族人群高血压病人APOB基因的XbaI多态性与高血压存在明显的相关性。但现有资料尚难说明高血压病人的血脂异常与X+等位基因的存在密切相关，其对血脂的影响还有待进一步研究。
【参考文献】
1 Sambrook J，Fritsch EF，Maniutis T，著.分子克隆实验指南.金冬雁，黎孟枫，译.第二版．北京：科学出版社，1996，456-490．
2 Hegele RA，Brant JH，Connelly PW.Genetic and hiochemical factors astoclated with in blood pressure in agenetic isolate.Hpertension，1996，27:308-312．
3 陈红，罗宇，祁瑞环，等.高血压病人载脂蛋白B基因多态性研究．北京医科大学学报，1998，30(2)：186．
4 祝有国，符自清，周明黎，等.脂蛋白(a)、载脂蛋白(B)基因多态性与心肌梗死的相关性研究．上海医学检验杂志，2001，16(2)：109-110．
5 Pan JP,Chiang AN，Tai JJ，et al.Restriction fragment lengthypolymorphisms of apolipoprotein B gene in Chinese population. Clin Chem，1995，41:424-429．
作者单位：427000 湖南张家界，张家界市人民医院检验科
(编辑：悦 铭)