内蒙地区鄂温克族及北方回族的红细胞补体受体1（CR1）基因多态性分布

      内蒙地区鄂温克族及北方回族的红细胞补体受体1（CR1）基因多态性分布(pdf)

   【摘要】  目的  探讨E-CR1基因在鄂温克族及北方回族正常人群中基因多态性分布特点。方法  采用多聚酶链式反式—限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法。结果  56例鄂温克族正常个体E- CR1基因多态性为：HH型（高表达）占69.64%，HL型（中表达）占30.36%，未检测到LL型（低表达）；57例回族个体E- CR1基因多态性为HH型占73.68%，HL型占24.56%，LL型占1.76%。结论  鄂温克族与回族的E- CR1基因多态性分布与汉族、蒙古族差异无显著性。本研究为北方地区少数民族的遗传免疫学研究提供了理论依据，也为人类学基因库积累了科学资料，同时也为临床许多疾病的发病机理研究提供重要的参考数据。

    【关键词】  红细胞免疫; 遗传多态性; PCR-RFLP; CR1; 基因

       The distribtion of polymorphsim in Ewenki nation in inner monglia and Hui nation in north population

    JIANG  Li-ping,   LIU De-bin,  CUI Ming-yu,et al.Histology Embrology Teaching and Research Section，Inner Mongolia  Medical College，Hohhot  010059,  China

    【Abstract】  Objective  To investigate the distribution of the erythrocyte complenent  receptor 1（ECR1） gene  polymorphism.Methods  By the polymerase chain reaction（PCR）-restriction fragment length polymorhism（RFLP）.Results  The results detected to Ewenke healthy individuals were as follows：the HH（homozygous  for high quantity  CR1）gene type was 69.64 percent；the HL（homozygous for medium quantity  CR1）type was 30.36 percent；and no LL（homozygous for low quantity CR1）type。The results datecfed to Hui nation healthy individuals were as follows：the HH type was 73.68 percent；The type HL was 24.56 percent；LL was 1.76 percent。Conclusion  There was no obvious different between the distribution of the ECR1 gene types of Ewenki and those of Han and Mongolia；This research provided some theoretical basis for the researches on immunogenetics of the northern national minority and presented scientific data for human gene  pool and provided important reference data for methmetics  of some clinical disease.

    【Key words】  erythrocyte immunie; genetic  polymorphism; polymerase chain reaction（PCR）-restriction fragment length polymorhism（RFLP）;  complement receptor I （CR1）；gene

    红细胞具有免疫黏附活性的C3b受体，从而介导免疫黏附作用，携带和清除循环免疫复合物，促进吞噬细胞的吞噬、识别及储存等多种功能。红细胞CR1基因位于第1号染色体上的q32区带［1］,在此区域上CR1分子结构决定由两个等位基因共同编码，为常染色体显性遗传。该基因调控的结果是，在正常人群中出现E-CR1数目表达的多态性为HH（高）、HL（中）、LL（低）三种表达：鄂温克族主要聚居于我国东北地区，少数居住于黑龙江省，回族是人口数量仅次于汉族的少数民族，分布在全国许多省市。我们采用PCR-RFLP法研究了内蒙古地区鄂温克族、回族的红细胞CR1（CD35）基因多态性，并与已经报道的汉族、蒙古族人群做比较进行分析。

    1  材料与方法

    1.1  样本  56例鄂温克族健康人样本来源于内蒙古自治区呼伦贝尔盟，男28例，女28例，平均年龄24.43岁，57例回族健康人样本来源于内蒙古西部地区无血缘关系个体，男48例， 女9例，平均年龄38.62岁。取静脉血2～3ml，-20℃保存。

    1.2  样本DMA制备  用经典饱和酚-氯仿抽提法［2,3］。试剂购于上海Promage公司，配制在我院实验室完成。

    1.3  引物合成    由华美生物工程公司提供，其序列如下：P1：5′-CCTTCAATGGAATGGTCGAT-3′；P2: 5′-CCCTTGTAAGGCAAGTCTGG-3′。将P1P2分装于2个0.5EP管中，使用时各取1ml，再用倍比稀释法配制所需浓度的使用液，本实验使用浓度为7.5pmol/L。

    1.4  PCR反应  PCR扩增体系为25μl，其中含2μl(160ng)模板DNA;2.5μl(7.5pmol)引物;4×dNTP 2.5μl(2.5mm); 10×Buffer 2.5μl; Taq-polymerase 0.75v,加去离子四蒸水至25μl，最后滴加无菌石蜡油。 PCR反应条件为：预变性92℃  2s;变性92℃ 60s;退火56℃ 90s;延伸72℃ 100s,32个循环后，最后72℃延伸1min。

    1.5  Hind-Ⅲ酶切及电泳   扩增出来的PCR产物取出20μl，加入8v Hin-Ⅲ内切酶，2.5μl 10×buffer用微量移液器混匀，在37 ℃恒温箱中温育1.5～2h，取出酶切产物5～8μl与2μl溴酚蓝-二甲苯酚载样液混匀，点样，电泳45min左右，在紫外分析仪下观察结果。

    1.6  数据统计分析  基因频率按直接计数法测定，用χ2检验比较不同民族红细胞CR1基因多态性差异性。

    2  结果

    2.1  正常人群中CR1数量多态性  HH型高表达为纯合子，无突点变，只出现1.8kb一条带；LL型低表达为纯合子，等位基因两个结构基因中都有点突变，酶切后2条带分别为1.3kb、0.5kb；HL型中表达为杂合子，由于一个结构基因发生点突变，酶切后出现1.8kb、1.3kb、0.5kb三条带［4］,电泳结果见图1。图1  CR1基因多态性电泳分析

    M:marker  P:Production of PCR amplified2.2  内蒙地区鄂温克族、回族样本红细胞CR1（CD35）基因型三种表达扩增片段结果  见表1。表1  鄂温克族、回族、汉族、蒙古族 RBC-CR1密度基因多态性分布比较

    3  讨论

    随着免疫学研究逐渐深入，直到1981年美国学者siegel［5］等提出“红细胞免疫系统”新概念，引起国内、外学者的极大关注，在人类“红细胞免疫系统中”研究中，CR1（CD35）是与免疫反应有关的众多物质中最为关键的一种补体受体［6］。体外实验证明红细胞CR1和血浆中I因子共同作用将黏附的免疫复合物中的 C3b降解为C3dg，C3d而失去致炎性［7］;红细胞表面CR1还可增强免疫黏附区域的过氧化物酶的活性;红细胞表面的过氧化物酶销毁黏附的抗原物质，从而引起效应细胞样作用［8］ 。有关正常人群CR1基因多态性报道很多，但关于鄂温克族、回族正常人群的CR1基因数量多态性未见报道。本文检测了56例鄂温克族及57例回族E-CR1数量基因型，结果显示：鄂温克族、回族与汉族、蒙古族对照差异均无显著性。鄂温克族正常人群的CR1数量基因型：HH型占69.64%，HL型占30.36%，未检测到LL型，这可能与样本采集的局限性有关，扩大样本含量可能检测到LL型。回族正常人群中，HH型占73.68%，HL型占24.56%，LL型只有1例，占1.76%，与报道的汉族及本实验室已经完成的蒙古族E-CR1基因差异均无显著性。

    E- CR1的数量及活性直接影响红细胞的免疫功能，是其发挥免疫功能的主要物质基础。如果E－CR1密度相关基因发生点突变，可使E- CR1数量减少。临床上，检测红细胞密度基因型及红细胞免疫功能，对深入研究许多疾病的发病机制［9］，判断患者的病情、转归、疗效、疾病的活动情况［10］具有重要参考价值。本研究检测了北方地区正常少数民族群体的 CR1基因密度多态性，为临床研究某些疾病的发生及病情变化提供重要的参考数据及基础对照资料。

    【参考文献】

    1  Weis JH,Morton CC,Bruns GAP,et al.Definition of a receptor locus:the genes encoding the C3b receptor and C3b/Epstein-Barr virus receptor map to human chromosome 1.J Immunol,1987，138:312-319.

    2  J萨姆布鲁克，EF弗里奇，J曼尼阿蒂斯.分子克隆实验指南，第二版.北京：北京科学出版社,1992，919-924.

    3  卢圣栋.PCR实验技术.成都：四川大学出版社,1995,13-15.

    4  郭峰，钱宝华,闵碧荷.血液免疫学研究.上海：第二军医大学出版社,1998，43.5  Siegel I.The red cell immune system. Lancet,1981,2:556.

    6  Dykman T R.Polymorphism of the C3b/C4b receptor(CR1):Characterization of a fourth allele.J Immunol,1985,134:1787.

    7  NMedof ME.Complement-dependent maintenance of immune complex solubility .The Complement ,New York  system:Sqringer-Verlag,1988，418.

    8  Hebert LA,CosioFG,BirminghamDJ,JD.et al.Biologic significance if the erythrocyte complement receptor,A primate perquisite.J Lab Clin Med,1991,118(4):301.

    9  刘小红,赵书平,王君松,等.银屑病患者红细胞CR1基因密度多态性的研究.中华麻风皮肤病杂志,2004,20(1):24-25.

    10  郭峰,张俊洁,许育,等.系统性红斑狼疮患者红细胞补体受体Ⅰ型密度相关基因组多态性研究. 中华皮肤科杂志,2003,36(7):391-393.

   作者单位： 1 010059  内蒙古呼和浩特，内蒙古医学院组胚教研室（△通讯作者）

    2 010010  内蒙古呼和浩特，内蒙古检察院技术处

　 (编辑：张  彦)