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【摘要】 目的 观察桑黄对肿瘤的抑制作用及对机体免疫功能的影响。 方法 以小鼠艾氏腹水癌的生命延长率评价桑黄的抗肿瘤作用，以炭末廓清实验观察荷瘤小鼠非特异性免疫功能，以ELISA法测定荷瘤小鼠血清IL-2浓度。结果 桑黄对EAC荷瘤小鼠的生存时间有延长作用，对荷瘤小鼠血清IL-2浓度有提高作用，对荷瘤小鼠非特异性免疫功能无明显影响。结论 中药桑黄对荷瘤小鼠具有一定的抗肿瘤能力，作用的强度和作用机制的深度还有待进一步研究。
【关键词】 桑黄；抗肿瘤；免疫
Study of Phellinus linteus about anti-tumor activity and enhancing immune effect
ZHANG Jin, LI Bao-hua, WANG Yong-quan, et al. Pharmacologic Center, Cancer Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100021,China
【Abstract】 Objective To study the anti-tumor activity and enhancing immune effect of Phellinus linteus.Methods The anti-tumor activity of Phellinus linteus was estimated by the longevity of EAC mice,the immune effect of tumorous mice was tested by the experiment of carbon particle expurgation and the IL-2 concentration in serum of tumorous mice was determined by ELISA.Results Phellinus linteus can prolong EAC mouse’s life and can increase the IL-2 concentration in serum of tumorous mouse but can’t affect the immune effect of tumorous mouse.Conclusion Chinese hurb Phellinus linteus possess some antitumor power for tumor-loaded mice,but further research is needed.
【Key words】 phellinus linteus；anti-tumor；immunity
桑黄（Phellinus linteus）是传统中草药之一，与灵芝同为多孔菌属植物，生长于杨、柳、桦、栎树上，分布于东北、西北、四川和云南，含落叶松蕈酸、脂肪酸及多糖等有效成分，据记载临床可用于治疗妇科血崩、血淋及脱肛泻血等疾病。近年来对其抗菌、抗癌、抗肝脏纤维化的研究也曾有过报道［1，2］，在此我们对桑黄抗肿瘤及对机体免疫功能的影响进行了进一步的研究。
1 材料与方法
1.1 动物 KM小鼠,20～22g，雄性，军事医学科学院实验动物中心提供， SCXK－（军）－2002 － 0001。
1.2 瘤株 小鼠艾氏腹水癌EAC，小鼠肉瘤S-180，中国医学科学院肿瘤研究所提供。
1.3 药物 桑黄子实体精粉，桑黄多糖，长春日惠食用菌研究所提供。优福定 （口服5FU）济南制药厂20040302 。贞芪扶正冲剂甘肃定西制药厂040621 。
1.4 方法
1.4.1 抗肿瘤实验 昆明小鼠常规腹腔接种小鼠EAC后随机分组，10只/组。受试物分别以蒸馏水研磨成混悬液选用0.5、1.0g/kg两个剂量，口服给药，同时设阳性药对照组（优福定60mg/kg ）及单纯对照组（蒸馏水0.2ml/只）。接种次日开始给药，1次/d，共10次，末次给药次日称量动物体重后继续观察并逐日记录死亡时间，按公式：［（实验组平均生存时间-对照组平均生存时间）/对照组平均生存时间］×100%，计算动物生命延长率，并以t检验对生存天数进行统计学处理。
1.4.2 炭末廓清实验 昆明小鼠常规接种小鼠肉瘤S-180后分组、给药同前，于末次给药次日以0.1ml/10g剂量对小鼠逐只静脉注射印度墨水（北京市西中化工厂，批号：040301，注射前以12000转/min离心1min，以生理盐水1：2稀释），静注后第1min、10min分别从眼眶静脉丛取血2次，每次定量吸取0.02ml加入含2ml 0.1%无水碳酸钠溶液的试管中，72分光光度计在波长680nm下比色，1min和10min血样的光密度分别以OD1和OD10表示，时间以T表示，按公式：廓清指数（K）= （logOD1- logOD10）/（T10-T1）计算廓清指数。末次取血后处死动物，称量体重，取肝脾称重，按公式：吞噬指数 =（体重/肝脾重）×K-3计算吞噬指数，并对数据进行t检验。
1.4.3 血清IL-2浓度测定 昆明小鼠常规接种小鼠肉瘤S-180后分组、给药同前，末次给药后次日自小鼠眼眶取血，取血量>0.3ml/只，4℃过夜后离心（4000转/min，10min）取血清，参照试剂盒（Genex IL-2 M ELISA）给定方法测定IL-2，并以t检验进行统计学处理。
2 实验结果
桑黄对EAC荷瘤小鼠的生存时间有延长作用，对荷瘤小鼠血清IL-2浓度有提高作用，对荷瘤小鼠非特异性免疫功能无明显影响。详细数据见表1～3。表1 桑黄口服用药对小鼠EAC的实验治疗结果 (略)表2 桑黄口服用药对S-180荷瘤小鼠碳粒廓清能力的影响 (略)注：*廓清指数统计,** 吞噬指数统计 表3 桑黄口服用药对肉瘤S-180荷瘤小鼠血清IL-2浓度的影响 (略)注：P与荷瘤小鼠蒸馏水组比较，*与正常未荷瘤组比较
3 讨论
恶性肿瘤是当今死亡率较高的疾病之一，伴随着环境污染、不良生活方式、高科技产物的弊病及很多至今不可知的因素，恶性肿瘤的发病率也呈上升的趋势，因此世界各国对恶性肿瘤的治疗研究都十分重视与投入。除去手术，放、化疗等传统治疗手段外，通过提高机体的免疫功能预防、治疗肿瘤及借以改善肿瘤患者的生存质量已逐渐得到大家的共识。菌类（如灵芝）的抗癌作用已屡见报道［3，4］，同时也有人就桑黄提取物对肿瘤生长和细胞免疫功能的影响进行了观察［5］。我们选择了荷瘤小鼠生存时间、非特异性免疫功能和细胞因子IL-2的血清浓度三个指标，对桑黄的抗肿瘤及免疫增强作用做出进一步的研究。
从实验结果可以看出，桑黄子实体精粉和桑黄多糖对EAC腹水型荷瘤小鼠的生存时间均有延长作用，其中桑黄多糖略强，但0.5～1.0g/kg的给药剂量并未表现出明显的量效关系，这表明桑黄的抗肿瘤作用似乎不是来自于细胞毒而更可能是机体免疫功能的改善所致。
炭末廓清法是检测动物非特异性免疫功能的常规实验方法，本实验采用接种小鼠肉瘤S-180来建立荷瘤小鼠模型，以桑黄精粉和桑黄多糖不同剂量连续给药后动物网状内皮细胞对血中外源性炭末颗粒的吞噬能力来观察其对荷瘤动物非特异性免疫功能的影响。实验结果显示桑黄对荷瘤小鼠的非特异性免疫功能无调节作用。
白细胞介素-2（inter-leukin-2，IL-2）又称T细胞生长因子，主要由CD4+T细胞产生， 主要作用为促进T细胞增殖，诱导并增强细胞毒性细胞如NK、LAK等的杀伤活性，并刺激活化T细胞产生IFN、IL-4～6和CSF，目前细胞因子作为恶性肿瘤的辅助治疗手段在临床已占有一席之地［6］。从实验结果可以发现，荷瘤小鼠蒸馏水对照组动物血清IL-2浓度低于未荷瘤正常对照组（P<0.05），说明肿瘤对机体血清IL-2浓度有降低作用，桑黄精粉及多糖试验组的动物血清IL-2浓度高于荷瘤小鼠蒸馏水对照组（P<0.05）而接近未荷瘤正常对照组（P＞0.05），显示出桑黄对荷瘤小鼠IL-2的水平下降有一定的对抗作用，而桑黄对荷瘤小鼠免疫细胞因子的调节也会在抗肿瘤作用中体现出来。
综上所述，桑黄通过延长荷瘤小鼠的生存时间表现出一定的抗肿瘤能力，而这种能力有可能是通过对体内免疫细胞因子的干预来完成。鉴于实验规模有限，桑黄的抗肿瘤作用的强度和作用机制的深度还有待于进一步研究。
【参考文献】
1 周存山,马海乐. 桑黄及其药理作用研究进展.食用菌, 2005，27（2）:51－54.
2 张万国, 胡晋红, 蔡溱. 桑黄对肝纤维化大鼠血液流变性影响作用的实验研究. 第五届青年药学科技工作者最新科研成果学术交流会论文集, 2000, 243-245.
3 江艳, 王浩, 吕龙,等. 灵芝孢子粉多糖Lzps-1的化学研究及其总多糖的抗肿瘤活性. 药学学报, 2005,40（4）: 347-350.
4 张熳, 张兰. 灵芝多糖的分离纯化和药理活性及在功能食品中的应用食品研究与开发, 2005,26（1）: 118-120.
5 车会莲, 孟繁岳, 杜杰,等.桑黄提取物对肿瘤生长和细胞免疫功能的影响.中国公共卫生,2005,21（1）:79-81.
6 Rosenberg SA. Immunol Today,1998,9:58-62.
作者单位：100021 北京，中国医学科学院肿瘤医院药理中心
(编辑：李 木)