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【Key words】 HBeAg ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)
检测HBV的血清学方法很多,目前,ELISA应用较广泛。几年来,在二对半检测中遇到单HBeAg阳性或HBeAg、抗-HBe同时阳性的特模式,我们将标本做如下处理:重新离心、冰箱保存,复查,发现结果均为阴性。发现同行也有报道如此情况 [1] ,以及溶血及脂浊样品对ELISA检测的影响 [2] 。基于上述这些现象,我们进行如下探讨。
1 材料与方法
1.1 实验仪器 Labsysten Dragon MK2酶标仪,well wash4mk2洗板机,上海手术器械厂产800-2型离心机,美国PE公司PE480DNA扩增仪。
1.2 标本 350份枸橼酸抗凝血标本,均来源于我院2004年1月~12月门诊及住院病人。
1.3 试剂 科华公司和华美公司HBeAg试剂盒,新创HDV-IgM试剂盒,HBV-DNA试剂盒。
1.4 方法 严格按照试剂盒说明书操作。(1)枸橼酸抗凝标本350份混匀不离心和3000r/min离心5min,10min,分别用科华和华美试剂同时进行检测。(2)结果判断:样品OD值/阴性对照,OD值>2.1为阳性,否则为阴性。(3)对350例标本作HDV-IgM检测,同时作HBV-DNA检测。
2 结果
对350例标本作HDV-IgM检测,结果为阴性。对350例标本作HBV-DNA检测,结果也为阴性。350份枸橼酸抗凝血标本两种试剂离心与不离心检测结果对比见表1。
表1 350份枸橼酸抗凝血标本两种试剂离心与不离心检测结果对比(略)
3 讨论
(1)HDV是缺陷病毒,当HDV和HBV重叠感染,HBV为HDV复制提供HBsAg [3] ,故能表现HBsAg阴性而HBeAg阳性的情况。通过对HDV-IgM测定结果表明,单HBeAg阳性与HDV重叠感染无关。(2)HBeAg存在于乙肝病毒Dane颗粒的核心部分,HBeAg存在表明HBV处于增殖和复制状态,具有强烈的传染性。通过对HBV-DNA的检测结果为阴性,表明体内并无HBV-DNA,故我们认为出现的HBeAg为假阳性。(3)HBeAg是前C区基因区表达,同时HBcAg在C区基因区表达 [4] ,HBeAg的纯化是产生纯抗-HBe的前提,故在包被过程所用抗-HBe不纯可能是造成假阳性的原因之一。(4)全血中有许多HBeAg的共同抗原类的颗粒物质,在不离心的情况下悬浮在血浆中,故在酶免过程中出现非特异性结合,而造成假阳性 [5] ;另外可能血中存在许多SOD酶,在洗涤过程中不清而在显色过程中出现非特异性反应,而造成假阳性,同时也有类似报道 [6] 。(5)HBeAg阳性是反应HBV增殖、有传染性的一种有意义的指标之一,在排除HBsAg勾带反应,HDV-IgM阳性,HBV-DNA阳性的情况下,单独出现这样的结果需慎重报告。(6)血清中的细胞成分中含有过氧化物酶成分,产生辣根过氧化物酶样作用,当离心不充分的血清、血浆标本加样于反应板孔时,细胞成分粘附于酶标板而不能洗去,会产生酶促反应而呈现阳性显色,导致出现一些假阳性 [7] 。
参考文献
1 王火生,韩星,徐六妹,等.HBVe系统双阳模式复核结果的分析.临床检验杂志,2001,19(6):381.
2 单桂秋,苏建婷.溶血及脂浊样品对ELISA检测HBsAg的影响.临床检验杂志,1999,17(2):102.
3 李梦东.实用传染病学.北京:人民卫生出版社,1998,136-137.
4 俞树荣.微生物和微生物学检验.北京:人民卫生出版社,1997,380.
5 许斌,韩光宇,程梅,等.血液HBsAg、抗-HCV复检中应采用不同试剂和设置低限灰区.临床检验杂志,1998,16(6):341.
6 杨志成.16例抗-HIV国产试剂检测假阳性报告.中国输血杂志,2000,13(3):206.
7 常立俊.HBeAg酶试剂假阳性原因探讨.华美通讯,1999,1-2:21.
作者单位:473058河南南阳南阳医学高等专科学校