神经轴索固定及染色技术的改良 ˇ

    当中枢神经系统受到损伤后，轴索会发生形态学的改变，而轴索病理形态的改变，用HE染色是不能反应出来的，须借助于特殊染色方法才能显示出来。目前，神经轴索的染色方法虽然很多，但由于许多方法都要求特殊固定或用冰冻切片或对切片的厚度要求较高，给病理工作者带来不便，给病理诊断及研究工作的顺利进行造成困难。为解决该问题，笔者在实施脑震荡鼠的病理学研究制片过程中反复摸索实践，从固定与染色方法两个方面进行了改良，取得了较好的效果。现将具体方法介绍如下。

1 固定方法的改良由于脑组织较软，常需要较长时间的固定才能进行取材 ［1］ ，否则会导致人为的损伤改变，而我们研究的内容是脑 ˇ 基金项目:国家自然科学基金资助项目，编码:39160076，30160027;云南省自然科学基金资助项目，编码:2001C0048M损伤后相关部位脑组织的形态学改变，因此固定方法的选择十分重要。我们采用点滴注入固定液的方法进行固定，即将10%的福尔马林通过插入升主动脉的输液针头灌注处杀实验动物，固定液沿主动脉循环至脑组织，经3～4h后可进行开颅取材。该固定法的优点是:（1）经过动脉点滴原位固定的脑组织，使取材操作更容易，尤其重要的是可避免取脑过程中人为损伤导致形态改变的干扰。（2）组织固定均匀一致，为保证染色效果打下了良好的基础。（3）用本方法固定的脑组织为进一步的电镜观察或免疫组化检
验创造了条件。（4）缩短了固定时间。

2 染色方法的改良显示神经纤维、轴索的特殊染色方法较多 ［2，3］ ，按照现有的银染方法进行染色，由于操作步骤较多，对于批量染色，很难控制在完全相同的条件下进行，给定量组织学的研究带来困难（没有可比性），且需要多种试剂。为克服上述的困难，我们综合了几种银染方法，并进行改良，改良法的效果较好，方便可行，重现性较好，每批染色可以在完全相同的条件下进行。具体操作步骤如下:（1）将上述方法固定的组织制作常规石蜡切片，切片厚4～6μm。（2）将切片脱蜡至水。（3）将切片投入2%的氨酒精溶液（2ml浓氨水溶于100ml95%乙醇溶液）过夜，12h。（4）浸入80%乙醇内速洗。（5）经蒸馏水速选。（6）入20%硝酸银水溶液内并置入56℃温箱内30min。（7）经蒸馏水洗后，入10%的福尔马林液内还原3min。（8）将切片用滤纸吸干，用重氨银溶液滴染在切片上1min。（9）重氨银染色后，再用滤纸将切片吸干，放入20%的福尔马林液中5min，或视切片呈铁锈色为度。（10）经蒸馏水洗后，常规脱水透明，中性树胶封固。（重氨银溶液的配制:在20ml20%的硝酸银水溶液中逐滴加入氨水，待其所产生的沉淀完全被溶解为止，再滴加10滴氨水和25ml蒸馏水。用前过滤。）

3 说明将本法应用于我们的研究中，脑损伤后的神经轴索，因损伤程度不同而呈现棕色至棕黑色。该方法能充分反映出神经轴索的肿胀、崩解和断裂等病理形态的改变，稳定可 靠、操作简便，不需特殊试剂，很少发生脱片现象。染色后背景清洁，镜下结构染色层次清晰，突出病变。所制出的切片长期保存不会褪色，也不变色。

4 注意事项

（1）本法所用的玻片要认真清洁，以减少非特异性的沉淀物或银液污染。（2）每10ml20%硝酸银水溶液只能放置3～5张切片。（3）20%硝酸银水溶液和重氨银溶液须保存于4℃冰箱。（4）各种溶液最好只使用1次。

参考文献

1 杜卓民.实用组织学技术，第2版.北京:人民卫生出版社，1998，21.

2 凌启波.实用病理特殊染色和组化技术，广州:广东高等教育出版社，1989，70.

3 易家农.组织学与组织化学技术，长沙:湖南医学院出版，1986，174.

作者单位:1650031昆明医学院法医学院

2昆明医学院组胚教研室 3昆明医学院第一附属医院精神科