应用氯化三苯四氮唑半固体培养基进行细菌动力试验的探讨

    【摘要】 目的 寻求一种对细菌动力试验结果更容易判定的半固体培养基。方法 在传统半固体培养基中加入氯化三苯四氮唑（TTC）进行动力试验，并与传统半固体培养基比较。结果 用TTC半固体培养基进行细菌动力实验与传统培养基有较好的相关性，且比传统半固体培养基结果更容易判断。结论 TTC半固体培养基可用于常规细菌动力鉴定。

　　Tang Xuefu，Deng Chaogan，He Qin
    
　　Department of Clinical Laboratory，Shenzhen Luohu Public Hospital，Shenzhen518000.
   
　　【Abstract】 Objective To find a new semi-solid agar for bacterial motility test which is easy to judge.Methods Add TTC to traditional semi-solid agar for bacterial motility test，and compared with traditional one.Reˉsults Motility test with TTC semi-solid agar was easy to judge，and had good correlation with traditional one.Conˉclusion TTC semi-solid agar can be used for bacterial motility test.
   
　　Key words semi-solid agar bacterial motility test triphenyl tetrazolium chloride（TTC）  

　　动力试验是许多细菌鉴定的关键试验，特别是对克雷伯菌属与肠杆菌属、不产色素沙雷菌，李斯特菌属与其它革兰阳性棒状杆菌，志贺氏菌属与耶尔森菌属以及非发酵菌属间的鉴别有重要价值。动力试验错误是细菌鉴定错误的主要原因之一 ［1］  ，多由于培养基不合要求，结果判定错误所致。为此，我们在传统半固体培养基中加入0.005%的氯化三苯四氮唑（TTC），以利于结果的判定，收到良好效果，现将结果报告于下。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

    1.1.1 传统半固体培养基 购自浙江军区后勤部卫生防疫检验所，按说明配制。

    1.1.2 TTC半固体培养基 每1000ml传统半固体培养基中加入1%TTC水溶液5ml。

    1.1.3 菌种来源 198株试验菌中，182株来源于临床标本，16株为部、省考核菌种。标准菌株ATCC25922、ATCC27853，购自卫生部临床检验中心。

　　1.2 方法

    1.2.1 细菌鉴定 所有细菌均经VITEK-AMS系统或API鉴定系列鉴定，鉴定值≥90%。

    1.2.2 动力试验 取18～24h培养物，同步接种2种半固体培养基，从中央穿刺试管琼脂的3/4，35℃培养24h观察结果。同时对李斯特菌属和耶尔森菌属细菌做25℃培养。

　　1.2.3 结果判定 传统半固体培养基，以细菌离开穿刺线生长，扩散到培养基中使培养基变混浊为动力阳性，细菌沿穿刺线生长，周围培养基仍保持澄清为动力阴性;TTC半固体培养基，以细菌呈粉红色混浊云雾状生长并扩散到整个培养基中为动力阳性，细菌沿穿刺线生长成一条明显红色线，周围培养基仍保持澄清为动力阴性。

　　2 结果

    2.1 试验结果 见表1。

    2.2 结果的准确性 198株试验菌以两种培养基同时显示动力阳性，结合细菌鉴定结果判定为动力阳性;以两种培养基同时显示动力阴性，结合细菌鉴定结果判定为动力阴性;凡不符合这两种情况的以鞭毛染色为确切结果。198株试验菌中，动力阳性株143株，动力阴性株55株。两种培养基结果比较见表2。结果发现:传统半固体培养基对动力阳性菌符合率为90.9%，对动力阴性菌符合率为100%;TTC半固体培养基对动力阳性菌符合率为98.6%，对动力阴性菌符合率为96.3%。统计分析两种半固体培养养基的结果准确性，P<0.01，表明两种方法结果存在差别，TTC半固体培养基的总体准确性较高。

    2.3 两种培养基结果的相关性 检验两种培养基测定细菌动力的试验相关性，统计分析，P<0.005，Φ=0.8556，表明两种培养基的结果存在正相关关系。
   
　　表1 198株菌动力试验结果（略）

　　注:ˇ培养温度25℃。
   
　　表2 两种半固体培养基结果比较（略）
   
    2.4 结果误判率 198株细菌，相同条件下用两种培养基做动力试验，培养24h后，由5名具一定基础的微生物进修人员以双盲法判定结果，传统半固体培养基中，阳性误判为阴性的11.2%，阴性误判为阳性的3.6%;TTC半固体培养基中阳性误判为阴性的4.2%，阴性误判为阳性的3.6%。3 讨论TTC是一种四唑盐，在沙保弱琼脂中加入TTC，观察念珠菌还原TTC能力，是念珠菌初步鉴定的最好方法。四唑盐TTC是无色可溶性化学物，当细菌生长时，进入菌体细胞内，在酶催化的部位被还原，释放出不溶解的红色色素甲，故红色仅在细菌生长的培养基区域内形成 ［2］  。
   
　　试验表明，在半固体培养基中加入TTC有利结果的观察和判定，尤其是当结果判定困难时，也不需要与未接种空白管作对照。同时发现，TTC半固体培养基在非发酵菌动力观察方面明显优于传统半固体培养基，对于经验不足者，可大大降低误判率。此外，传统半固体培养基的动力试验结果的观察受培养时间和放置时间的影响，而TTC半固体培养基的动力试验结果在较长的时间内保持稳定，不影响结果的判定;对生长慢一些的细菌，适当延长培育时间，TTC半固体培养基的结果更明确。从198株试验菌发现，有两株苯丙酮酸莫拉菌弱受TTC抑制，并不利用TTC。对少数受TTC抑制菌株应用传统培养基做动力试验。TTC半固体培养基也不宜用作保存菌种。

　　参考文献
    
　　1 顾可梁.全国临床检验操作规程，第2版.福建:东南出版社，1997，473.

    2 Kelly AT，Fulton M.Use of triphenyl tetrazolium in motility test mediˉum.Am J Clin Patho，1953，23（5）:512.
    

　　作者单位:518000广东省深圳市罗湖区人民医院（ ˇ 检验科; △ 中心实验室）