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关键词 严重急性呼吸综合征 细胞免疫 免疫组织化学
The change of NK cell，B and T lymphocyte subsets in SARS case
Feng Xiaodong，Wang Zhuocai，Lai Riquan，et al.
KingMed Center for Clinical Laboratory，Guangzhou510182.
【Abstract】 Objective To investigate the change of immunity in SARS patient，and guide clinic diagnose and treatment.Methods NK cell，B and T lymphocyte subsets in SARS case were detected by immunohistochemistry and light microscope，as well as compared with the control group.Results Compared with the control group，the average of B and T lymphocyte subsets decreased significantly，ratio CD4/CD8decreased too，but the average of NK cell inˉcreased significantly.Conclusion NK cell，B and T lymphocyte subsets in SARS case were in diturbance.
Key words severe acute respiratory syndrome cellular immune immunohistochemistry
肿瘤和免疫疾病研究表明，患者免疫功能尤其细胞免疫功能障碍是随病情发展而加重。严重性急性呼吸综合征（Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS）一般认为由新型冠状病毒引起，本文通过检测SARS患者尸检病例脾脏、淋巴结、结肠、小肠、阑尾和意外伤害死亡成人相应组织NK细胞和T淋巴细胞亚群，了解SARS患者细胞免疫功能变化，为临床诊治SARS患者提供依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料 SARS脾脏、淋巴组织取自笔者已研究病例 ［1，2］ 。
1.2 检测方法 将上述SARS病例脾脏、肺门和肠系膜淋巴结以及大、小肠和阑尾组织与意外伤害死亡成人相应组织，进行5μm连续切片，常规HE染色，分别用S-P法做 CD3、CD4、CD8、CD20、CD57染色，抗体购自DaKo公司，S-P 试剂盒购自Vector公司。每批试验采用已知上述抗体阳性淋巴结组织作阳性对照，用BPS取代第一抗体作阴性对照。
1.3 结果观察和统计方法 染色阳性信号呈棕黄色-棕褐色，定位于细胞膜或细胞质中。每张切片每一种抗体在普通光镜高倍视野（×400）任选10个视野计数阳性细胞，取平均值，计算其均数比较。
2 结果
2.1 T淋巴细胞亚群和B淋巴细胞的阳性均数较对照组均有明显减少，CD4/CD8比值亦明显降低。
2.2 NK细胞阳性均数实验组比对照组明显增多;两组间NK细胞分布明显不同，SARS的NK细胞散在分布于淋巴组织滤泡间及萎缩的脾小体之间，对照组的NK细胞集中分布于淋巴组织的滤泡中以及脾小体旁，而且数量明显减少。见表1。表1 脾脏、淋巴组织NK细胞、B淋巴细胞和T淋巴细胞亚群阳性数 （略）
3 讨论
机体免疫应答依赖各种免疫细胞，特别是NK细胞、B细胞和各T细胞亚群之间相互协作和制约，在正常人群中，免疫细胞绝大部分存在于淋巴组织中，仅有2%在周围血中。上述细胞哪一种的功能和数量改变，都有可能造成机体免疫功能的紊乱。
NK细胞不需要抗原刺激，不需要识别组织相容性复合物，可直接介导抗肿瘤和抗病毒效应，发挥免疫监视和调节免疫应答以及造血功能。本实验显示，NK细胞在SARS病例脾脏及淋巴组织中较意外伤害死亡相应组织均数明显增多，此与王飞 ［3］ 银屑病皮损研究结果相似。提示SARS病理变化过程中，NK细胞可能参与攻击靶器官之一的淋巴组织。NK细胞数量增多，一方面提示SARS病毒在淋巴组织繁殖增强及其对新的CD4细胞感染加重，另一方面说明由SARS引起NK细胞抗病毒效应功能加大，加速对感染CD4细胞免疫破坏，同时NK细胞分泌炎症介质抑制T细胞分化，T细胞增殖下降，细胞数量减少，与HIV感染患者免疫病理变化是一致的 ［4］ 。
CD4细胞是免疫系统的中枢细胞，在抗病毒中起重要作用。其通过产生白细胞介素2、肿瘤坏死因子等淋巴因子，或分化杀伤T细胞CD8细胞，或产生B细胞辅助效应，促进体液免疫，发挥强大的抗病毒效应。CD8细胞是特异细胞免疫效应细胞，通过分泌各种细胞因子不仅杀伤被感染的靶细胞，亦可使外周血中的CD4细胞向淋巴组织转移。健康成人，体内98%CD4细胞存在于淋巴组织上内，而且在病毒感染时，淋巴组织还扣留外周血的CD4细胞。因此检测SARS病例外周血，特别是脾脏及淋巴组织中CD4细胞数量和功能更能衡量病人的免疫功能。陈文莉 ［5］ 、陈瑞 ［6］ 外周血CD4变化，可能与:（1）患者年龄、抽血时机、有无基础疾病以及是否使用糖皮质激素和其他免疫调节剂有关;（2）SARS病毒株不同引起CD4细胞中T辅助1（Th1）细胞被T辅助细胞2（Th2）细胞取代;（3）外周血CD4细胞扣留于淋巴组织中;因此CD4细胞绝对数可在正常或接近正常、甚至减少，但功能明显下降。本例患者脾脏、淋巴组织中CD3、CD4、CD8和CD20阳性细胞数以及CD4/CD8比值 较对照组均数明显下降。CD4细胞减少可能是由于SARS 病毒感染后凋亡而消失，或由于细胞免疫反应直接杀伤，或抗体介导的细胞毒作用以及NK细胞对感染SARS病毒的CD4细胞直接杀伤所致。CD4细胞特别是Th1细胞减少，其产生细胞因子亦减少，抑制CD8细胞分化，阻断了CD8细胞对CD4细胞抑制作用;CD4细胞减少以及其抑制诱导功能下降，不能诱导CD8细胞对B细胞抑制，这就解释了SARS患者淋巴细胞均减少时，B细胞仍然产生大量自身抗体。此与活动期红斑狼疮 ［7］ 和脑肿瘤手术前后 ［8］ 淋巴组织改变基本相似。
SARS发病机制除了病毒直接对靶器官损伤外，免疫病理的作用不容忽视。本实验由于病例少，SARS复杂确切的免疫病理改变有待于更多病例研究和动物实验的证实。
参考文献
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作者单位:1510182广州金域医学检验中心病理部 2510010广州军区广州总医院病理科