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1 材料与方法
1.1 临床标本 30份宫颈分泌物,取自烟台市北海医院门诊妇产科就诊的非特异性阴道炎患者,经常规消毒,用无菌棉签自宫颈口取分泌物于无菌生理盐水管中。
1.2 革兰染色法 取无菌生理盐水中的宫颈分泌物或阴道分泌物直接涂片,常规革兰染色,找到线索细胞者为阳性。
1.3 丫啶橙染色法 [1] 取无菌宫颈分泌物或阴道分泌物直接涂片,自然干燥,火焰固定,丫啶橙染色30min,用PBS冲洗2次,氯化钙分色1min,用PBS缓冲液冲洗1次,甘油封片,荧光显微镜观察结果。在上皮细胞中发现成堆桔黄色小杆菌即为阳性。
1.4 分离培养鉴定法 将无菌生理盐水中的阴道或宫颈分泌物,以无菌接种于阴道加特纳菌专用分离培养基上,置5%二氧化碳培养箱37℃孵育48h,挑取灰色、半透明、光滑、露滴状样菌落,若为革兰染色阴性小杆菌者,进行生化鉴定,生化鉴定用文献方法来进行鉴定。
2 结果
将30份宫颈分泌物标本,用革兰染色、丫啶橙染色、分离培养同时对加特纳杆菌进行检测,其中,革兰染色5份为阳性,阳性检出率为17%;丫啶橙染色为6份为阳性,阳性检出率为20%;分离培养有4份,阳性检出率为15%。
3 讨论
目前革兰染色找线索细胞仍旧是诊断细菌性阴道炎病的常规方法。丫啶橙染色免疫荧光检测法是近年来一种新的较为理想的检测手段,由于丫啶橙是一种具有异染性染料,当其染色后在荧光照射下,发射出橘红色荧光,能清晰的检测出加特纳菌在上皮细胞上的聚集现象,做出精确的诊断。分离培养鉴定法是国际确认的金指标,临床上由于不正规的用抗生素,导致许多病原体在一定程度上受到抑制,给分离造成困难,使分离培养结果阴性,建议取材应用治疗前的标本,用专用的高营养培养基,以提高分离培养的阳性检出率 [2] 。
参考文献
1 丁振若,苏名权.荧光法检测肿瘤细胞.中华医学检验杂志,1989,12:167-169.
2 罗海波,张福森.现代医学细菌学,北京:人民卫生出版社,1995,14:107-108.
作者单位:265701山东省龙口市防疫站
山东省烟台市北海医院检验科