组织蛋白酶D在胆系恶性肿瘤的表达及意义

    【摘要】 目的  探讨组织蛋白酶D（cath D）在胆囊癌和肝外胆管癌中的表达及意义。 方法  免疫组化ABC法检测40例胆囊癌和42例肝外胆管癌组织蛋白酶D（cath D）的表达。 结果  组织蛋白酶D（cath D）在胆囊癌的阳性表达率为60%，在肝外胆管癌的阳性表达率为50%。高分化腺癌和淋巴结及远处未转移组的胆囊癌cath D阳性率明显低于低分化腺癌和淋巴结及远处转移组（P<0.05，P<0.05），生存期≥1年的胆囊癌cath D阳性率明显低于生存期<1年者（P<0.05）;高分化腺癌和淋巴结及远处未转移组的肝外胆管癌cath D阳性率明显低于低分化腺癌和淋巴结及远处转移组（P<0.05）;生存期≥1年的肝外胆管癌cath D阳性率明显低于生存期<1年者（P<0.05）。 结论  组织蛋白酶D的表达与胆系癌分化程度和预后存在密切关系，可作为反映胆系癌生物学行为和预后的重要标记物。
      
　　【关键词】  胆囊癌 肝外胆管癌 组织蛋白酶D 免疫组化
     
　　The expression of cathepsin D（cath D）and its significance in gallbladder carcinoma and extrahepatic cholangiocarcinoma
     
　　Luo Xin，Liang Qingchun
    
　　The Department of Pathology，The Second Xiangya Hospital，Central South University，Changsha410011.
   
　　【Abstract】 Objective To study the expression of cath D and its significances in40cases with gallbladder carcinoma and42cases with extrahepatic cholangiocarcinoma.Methods Immunohistochemical method of avidin-biotin complex was used in the paraffin-embedded section.Results The positive rate of cath D in gallbladder car-cinoma and extrahepatic cholangiocarcinoma was60%and50%，respectively.The positive rate of cath D was signifi-cantly lower in the cases of well-differentiated carcinoma and metastasis（P<0.05）.The positive rate of cath D was significantly lower in the cases of the survival≥1year than that in the ones of the survival<1year（P<0.05）.Conclusion The expression of cath D may be related to the differentiated degrees and prognosis of gallbladder carci-noma and extrahepatic cholangiocarcinoma，it may be an important biological marker.
   
　　【Key words】 gallbladder carcinoma extrahepatic cholangiocarcinama cathepsin D immunohistochemistry
      
　　组织蛋白酶D（cathepsin D，cath D）是一种溶酶体性蛋白酶，具有刺激细胞生长，溶解基底膜、细胞外基质和结缔组织能力 ［1］ 。许多研究发现cath D是评价肿瘤预后和生物学行为的重要指标。本研究应用免疫组化ABC法检测胆囊癌和肝外胆管癌组织中cath D表达，旨在探讨其与胆系癌临床病理特征的关系及意义。

　　1 材料与方法
    
　　1.1 材料 40例胆囊癌和42例肝外胆管癌标本选自本院及湘雅医院、常德市中心医院病理科1995～2003年存档的手术标本。40例胆囊癌中，男7例，女33例;年龄28～59（平均44）岁;病理组织学类型包括高分化腺癌23例，低分化腺癌17例;淋巴结及远处转移者18例，无转移者22例;存活期≥1年25例，存活期<1年15例。42例肝外胆管癌中，男20例，女22例;年龄41～56（平均48）岁;病理组织学类型包括高分化腺癌17例，低分化腺癌25例;淋巴结及远处转移者17例，无转移者25例;存活期≥1年21例，存活期<1年21例。
   
　　1.2 主要试剂 兔抗人cath D抗体（1/100）、生物素标记羊抗兔IgG（1/300）和ABC试剂（1/500）均购自Sigma公司，DAB瑞士进口分装。
    
　　1.3 方法 Cath D染色采用免疫组化ABC法，用已知阳性切片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。
   
　　1.4 结果判断 组织蛋白酶D阳性信号为癌细胞的胞浆和（或）胞核内出现棕红色颗粒。其表达采用半定量积分法，按阳性细胞数所占比例分为4个等级 ［2］ :阳性细胞数≤5%为（-）;6%～30%为（+）;阳性细胞数31%～60%为（++）;阳性细胞数≥61%为（+++）。
   
　　1.5 统计学处理 采用SPSS10.0软件包进行χ 2 检验。

　　2 结果
    
　　2.1 Cath D在胆囊癌中的表达与临床病理特征的关系 Cath D蛋白表达在癌细胞的胞浆，阳性信号呈棕红色。高分化腺癌组Cath D蛋白的阳性表达率为47.83%，低分化腺癌组的阳性表达率为76.47%，两组间差异有显著性（P<0.05）。淋巴结及远处未转移组的Cath D蛋白的阳性表达率为40.91%，淋巴结及远处未转移组的阳性表达率为83.33%，两组间差异有显著性（P<0.05）。生存期≥1年Cath D蛋白的阳性表达率为48.00%，生存期<1年的阳性表达率为80.00%，两组间差异有显著性（P<0.05）。结果见表1。
   
　　2.2 Cath D在肝外胆管癌中的表达与临床病理特征的关系 Cath D蛋白表达在癌细胞的胞浆，阳性信号呈棕红色。高分化腺癌组Cath D蛋白的阳性表达率为35.29%，低分化腺癌组的阳性表达率为60.00%，两组间差异有显著性（P<0.05）。淋巴结及远处未转移组的Cath D蛋白的阳性表达率为36.00%，淋巴结及远处未转移组的阳性表达率为70.59%，两组间差异有显著性（P<0.05）。生存期≥1年Cath D蛋白的阳性表达率为33.33%，生存期<1年的阳性表达率为66.67%，两组间差异有显著性（P<0.05）。结果见表2。
    
　　表1 胆囊癌中Cath D蛋白表达与病理参数的关系 （略）
    
　　表2 肝外胆管癌中Cath D蛋白表达与病理参数的关系 （略）
    
　　3 讨论
    
　　Cath D是一种分子量为52KD的溶酶体天门冬氨酶蛋白酶，受雌激素和一些生长因子的直接调节 ［1，3］。正常组织中即有低浓度的Cath D蛋白存在。Cath D合成后即被溶酶全靶受体从高尔基器中运输出来，一旦进入溶酶体，即被分解成两链形式（34和14D），稳定且积聚起来，当Cath D基因过度表达时可造成溶酶体靶通道的过度负荷，导致溶酶体酶的释放，从而促进有丝分裂、基底膜、细胞外基质的溶解，加速癌细胞的生长和转移。一些学者发现子宫内膜癌、胃癌等恶性肿瘤Cath D表达水平与肿瘤大小、分化程度、转移和预后有密切的关系，Cath D高表达的恶性肿瘤多生长快、分化程度差、易发生转移和预后差 ［3～7］ 。国内外尚未见胆囊癌和肝外胆管癌Cath D表达研究的文献报道。本文研究发现50%以上的胆囊癌和肝外胆管癌Cath D呈阳性表达，且高分化腺癌和未转移癌Cath D阳性表达率明显低于低分化腺癌和未分化癌及转移病例，且生存期≥1年胆系癌病例Cath D阳性率明显低于生存期<1年的病例。其结果与国外学者在其他恶性肿瘤中研究结果报道一致 ［8，9］。说明Cath D表达与胆系癌分化程度、发生转移和预后有密切关系，阳性表达者多分化差、易发生转移和预后较差，Cath D可能是反映胆系癌生物学行为、转移发生和评估预后的重要标记物。
    
　　参考文献
    
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　　作者单位:410011湖南长沙中南大学湘雅二医院病理科