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【摘要】 目的 检测并比较心肌梗死急性期不同时间点，β 2 自身抗体阳性组与阴性组，患者血清中Fas/APO-1水平差异，了解β 2 自身抗体对Fas/APO-1的影响。 方法 41例急性心肌梗死患者，分别于发病24h、7天、2～4周时取血，采用ELISA的方法，检测血清中β 2 自身抗体的阳性率以及Fas/APO-1的水平;另外取34位性别、年龄匹配的健康人的血同法检测Fas/APO-1作为对照。 结果 心肌梗死急性期Fas/APO-1的水平均高于对照组（P<0.05），以梗死后24hFas/APO-1的水平为最高;心肌梗死急性期不同时间点，β 2 自身抗体阳性组Fas/APO-1的水平均高于阴性组，但两组的结果差异无显著性（P>0.05）。 结论 血清Fas/APO-1水平可以在一定程度上反映心肌细胞凋亡的变化趋势，β 2 自身抗体对Fas/APO-1的确切影响，有待更大规模的实验来证实。
【关键词】 心肌梗死;细胞凋亡;Fas/APO-1;自身抗体;β 2 受体
The relationship of Fas/APO-1and autoantibody against theβ2 -adrenergic re-ceptor
CHEN Mu-lei，YANG Xinchun，LIU Rui-hong，et al.
Institute of Cardialvascular Disease，Heart Center of Beijing Chaoyang Hospital，Affiliated to Capital University of Medical Science，Beijing100020，China
【Abstract】 Objective To find the influence of autoantibody against theβ 2 -adrenergic receptor（β 2 autoantibody）on Fas/APO-1，by comparing the difference of serum levels of Fas/APO-1betweenβ 2 autoantibody positive and negative groups on different time point at acute stage of myocardial infarction.Methods By ELISA method，the posi-tive ratio ofβ 2 autoantibody and the serum level of Fas/APO-1were tested in41acute myocardial infarction（AMI）patients on24hours，7days and2～4weeks of symptoms onset，and the same method was used to test the serum level of Fas/APO-1in34sex and age matched healthy donors.Results The serum level of Fas/APO-1in patients at the acute stage of myocardial infarction was higher in theβ 2 autoantibody positive group than that of the negative group，but the difference was not significant statistically（P>0.05）.Conclusion The serum level of Fas/APO-1may to certain extent reflective the cardiomyocyte apoptosis.The large scale of trails should be done to confirm the ac-curate influence ofβ 2 autoantibody on Fas/APO-1.
【Key words】 myocardial infarction;apoptosis;Fas/APO-1;autoantibody;β 2 -receptor
目前有研究认为，多种心血管疾病中存在心肌细胞凋亡，而β 2 -肾上腺素能受体表达的轻度升高，有对抗心肌细胞凋亡的作用。抗β 2 -肾上腺素能受体自身抗体（β 2 -受体自身抗体）因具有β 2 受体激动剂样作用，可能也具有对抗细胞凋亡的作用。血清中细胞凋亡抑制因子（Fas/APO-1）的水平能间接反应机体细胞凋亡的情况，但尚无文献报道，在心肌梗死急性期β 2 -受体自身抗体与Fas/APO-1的关系。本实验希望通过检测心肌梗死急性期β 2 -自身抗体阳性与阴性组患者血清中Fas/APO-1的水平，明确两者之间的关系，为临床对抗心肌细胞凋亡提供一些参考。
1 资料与方法
1.1 研究对象
1.1.1 急性心肌梗死组（AMI组） 共41例，为2002年2月～2002年11月在朝阳医院心脏中心CCU病房住院治疗的患者，男28例，女13例，平均年龄60.4±12.8（36～80）岁。急性心肌梗死的诊断标准见文献 ［1］ 。所有病人均为症状发生12h以内来院的，并经冠状动脉造影证实为急性心肌梗死。
1.1.2 对照组（NC组） 34例性别、年龄与AMI组匹配的健康人，经胸片、肝、肾功能、尿常规检查未见异常，排除冠状动脉粥样硬化性心脏病、高血压病、心肌病、内分泌及自身免疫性疾病。
1.2 取血 正常对照组取静脉血5ml，AMI组患者分别于发病24h、7天及2～4周内各取静脉血5ml，2000rpm室温下离心10min，收集上层血清，装入Eppendorf管，-20℃冰箱贮存待测。
1.3 细胞凋亡抑制因子Fas/APO-1测定
1.3.1 测定原理 采用上海森雄科技实业有限公司提供的试剂盒，用ELISA法定量检测Fas/APO-1的水平。操作时标准孔及待测样品均做双孔，两孔的平均值作为检测结果。1.3.2 结果计算与判断 （1）所有OD值都应减去空白值后再行计算。（2）以标准品100、50、25、12.5、6.25、3.2、1.6ng/ml之OD值在半对数纸上作图，画出标准曲线。（3）根据样品OD值在该曲线图上查出相应人血清Fas/APO-1的含量。
1.4 受体抗原肽段的合成及血清自身抗体的测定 由中国科学院生物分子研究所，合成相当于人β 2 -肾上腺素能受体细胞外第二环氨基酸序列的特异性抗原决定簇，合成肽段纯度为99%，β 2 -肾上腺素能受体肽段为172～197位的氨基酸序列:H-W-Y-R-A-T-H-G-E-A-I-N-C-Y-A-N-E-T-C-C-D-F-F-T-N-G-C。
用SA-ELISA法，以5ug/ml的β 2 抗原液包被酶标板，血清按1:20～1:160浓度进行倍比稀释，其它检测步骤见文献 ［2］ 。
1.5 判断标准 用比例法，以阳性血清与阴性血清的吸光度之比即P/N比值来判断，P/N≥2.1为阳性［P/N=（标本OD值-空白对照OD值）/（阴性对照OD值-空白对照OD 值）］。
1.6 统计学处理 使用SPSS统计软件包进行数据分析。计量资料以均数±标准差表示，组间数据比较采用t检验，多组样品的比较采用方差分析;计数资料用χ 2 检验，均以P<0.05为差异有显著性，以P<0.01为差异有非常显著性。
2 结果
2.1 将标准品倍比稀释后的浓度及所测得的对应的OD值输入计算机进行数据处理，二者在半对数条件下呈正相关关系，计算出相关方程Y=2.0372e 1.7677x ，R 2 =0.9634［X为OD值，Y为Fas/APO-1的浓度（ng/ml），R为相关系数］。
2.2 AMI后24h、7天及2～4周时，Fas/APO-1的水平均高于对照组，且这种差异都有显著性（P<0.05）。AMI后24h Fas/APO-1的水平，明显高于7天及2～4周时的检测结果，这种差异也有显著性（P<0.05）。具体数值见表1。
表1 AMI组与对照组血清中Fas/APO-1比较表 略
具体结果见表2。
表2 心肌梗死急性期β 2 受体自身抗体阳性组与阴性组Fas/APO-1比较 略
3 讨论
在急性心肌梗死动物模型中，心肌细胞凋亡在梗死后4～12h达高峰，并可持续至梗死后10天左右 ［3］ ，这与本实验所得出的，心肌梗死急性期患者血清中Fas/APO-1的水平，均显著高于对照组，且以发病24h时血清中的Fas/APO-1的水平为最高，以后逐渐减低，至2～4周时显著降低的结果相吻合。促进心肌细胞凋亡的因素很多，如低氧血症、缺血再灌注、持续过度的机械牵拉以及β 1 受体的过度表达或持续刺激等 ［4，5］ 。在细胞凋亡活跃时，血清中的Fas/APO-1可以显著升高，抑制细胞凋亡的进一步发生 ［6，7］ 。近来的研究表明，β 2 受体在心肌细胞凋亡的调节中也有重要的作用，β 2 受体表达的轻度升高，具有抗心肌细胞凋亡的作用 ［5，8］ 。β 2 受体的作用与β 1 受体不同，它除了与刺激性G蛋白（Gs）结合外，还能与抑制性G蛋白（Gi）结合，起到减弱β肾上腺素能受体信号系统的作用;此外β 2 受体还能调节非G蛋白依赖性信号系统的作用，起到保护心脏对抗心肌细胞凋亡的作用 ［5，8］ 。当然β 2 受体对心脏的保护作用，是有一定限度的，如果β 2 受体表达轻度升高，可以改善心功能减少心肌细胞凋亡;如果β 2 受体表达过度升高，反而可以诱发心肌细胞凋亡以及纤维化，甚至造成实验动物早死。
β 2 受体自身抗体对β 2 受体有激动剂样作用，所以可能在一定范围内具有对抗细胞凋亡的作用。但是在本实验中，心肌梗死后24h、7天、2～4周时，β 2 受体自身抗体阳性组Fas/APO-1的水平虽轻度高于阴性组（两组均数的差值分别为0.4971，0.1860，0.4786），可是差异无显著性。产生这一结果的原因可能与下列因素有关:（1）β 2 受体自身抗体的测定不是定量的，阳性组中部分病因自身抗体的浓度过高，对细胞凋亡的作用会变成促进性的，所以影响了两组的比较结果。如能定量检测β 2 受体自身抗体的水平，有望更好地反映它与Fas/APO-1的相关关系。（2）实验例数较少。Fas/APO-1的血清浓度较低，在心肌梗死急性期与对照组的比较中，两组均数的最小差值仅为0.851，但因两组例数均在30例以上，故仍体现出显著的统计学差异。而在β 2 受体自身抗体阳性组与阴性组的比较中，每组的例数仅在20例上下，所以很难体现出如此细微的差别。（3）β 2 受体自身抗体通过多条途径作用于心肌细胞凋亡，这些途径是否与Fas有关尚无定论，所以需要更为深入的基础研究提供有关的信息。
结论:血清Fas/APO-1水平可以在一定程度上反映心肌细胞凋亡的变化趋势，如能增加样本量，定量检测β 2 受体自身抗体的水平，有望明确Fas/APO-1与β 2 受体自身抗体的关系，进一步阐明β 2 受体自身抗体在对抗心肌细胞凋亡中的作用，为心肌细胞凋亡的临床治疗提供更多的参考。
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作者单位:1 100020北京，首都医科大学附属北京朝阳医院心脏中心
2 山西太原，山西医科大学（△ 研究生）
3 北京，北京市第六医院内科
（编辑:罗 彬）