HDL-C试剂对GLU测定结果的干扰

【摘要】  目的 探讨在使用KEYSYS全自动生化分析仪时，不同厂家生产的高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂对葡萄糖（氧化酶终点法）测定的干扰及解决办法。方法 用GLU作为观察项目，HDL-C作为干扰项目，然后与观察项目组合测定方式，观察干扰项目对GLU 测定结果的影响。 结果 利德曼HDL-C试剂对氧化酶终点法测定GLU无明显影响，但首医HDL-C试剂对GLU测定结果有明显的正干扰。结论 KEYSYS全自动生化分析仪在测定过程中应注意分析顺序对实验结果的影响，必要时可以增加冲洗程序。项目的设置，应根据其反应原理、试剂组成等，正确地设置项目的先后检测顺序。

【关键词】  高密度脂蛋白胆固醇 葡萄糖 试剂 干扰

   全自动生化分析仪在使用过程中，试剂针要接触各种试剂，容易造成项目间的交叉污染［1］。笔者在临床检测过程中发现，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂对葡萄糖（GLU）的自动分析可产生干扰。为此，用KEYSYS全自动生化分析仪进行相关实验，探讨不同厂家生产的HDL-C试剂对葡萄糖氧化酶终点法测定结果的影响程度、原因及避免交叉污染的方法，现报道如下。

    1  仪器与材料

    1.1  仪器   KEYSYS全自动生化分析仪。

    1.2  试剂  HDL-C试剂（胆固醇氧化酶直接测定法），分别购自首都医科大学首医临床医学科技中心（简称首医），批号京药监械（准）字2006第2400507号；北京利德曼生化技术有限公司，批号京药监械（准）字2005第2400533号。GLU试剂（葡萄糖氧化酶终点法）购自首医，批号京药监械（准）字2006第2400510号。

    1.3  质控血清  RANDOX公司质控血清，批号479UN，GLU均值6.23mmol/L。

    2  实验与结果 

    2.1  试剂交叉污染实验  将质控血清479UN单独测20次，所得均值作为对照组结果。然后，让仪器先测质控血清HDL-C（首医试剂）紧跟着测GLU，按此检测顺序反复测20次，所得GLU均值为测定组结果1；再将HDL-C测定改用利德曼试剂，测定方法同上，所得GLU均值为测定组结果2，见表1。测定组分别与对照组做配对t检验，与测定组1比较差异有显著性（P＜0.01），与测定组2比较差异无显著性（P＞0.05），说明首医HDL-C试剂对GLU测定存在严重的交叉污染。表1  直接测GLU与先测HDL-C后测GLU结果比较

    2.2  避免交叉污染功能的程序  调出仪器清洗功能的程序,对测定组1的试剂针进行特殊清洗,程序改变后用同种测试方式反复测质控血清20次，GLU结果为6.52±0.11mmol/L，与对照组做配对t检验， 差异有显著性（P＜0.05）。干扰率为6.2%说明仅靠仪器内部清洗一次，不能完全解决前次检测试剂残余对下次检测的污染。

    2.3  观察携带污染清除情况  先测质控血清479UN中HDL-C 1次，再连续测GLU，结果依次为7.13、6.62、6.21、6.23mmol/L。由此可以发现试剂针被污染后需清洗2次才能清除干扰。

    2.4  设置项目分析顺序  把GLU的通道号调到干扰项目的通道号前面，观察室内质控图3个月，GLU均在控。说明正确地设置项目的先后检测顺序，可以避免检测项目之试剂的干扰。

    3  讨论

    KEYSYS全自动生化分析仪，由双试剂针分别吸取R1及R2。在吸取不同项目试剂的间隔中，具有自动清洗过程，比色杯只使用一次。但某些情况下不同项目间的检测相互干扰可能存在：一是试剂中含有下一个测试所要测定的成分，或是含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的物质有作用，在此情况下若清洗不够充分，造成一定的残留，即可能在测定中相互干扰。

    葡萄糖氧化酶终点法是我国推荐方法，与国际上推荐的参考方法己糖激酶法相关系数为0.9986［2］，目前大部分临床实验室均采用此法。本文干扰实验结果表明：利德曼HDL-C试剂对氧化酶终点法测定GLU无明显影响，但首医HDL-C试剂对GLU测定结果有明显的正干扰。两种HDL-C试剂盒原理相同，参与反应的主要试剂相同，且均为液体双试剂。从试剂配方中可知，两种试剂中均含有4－氨基安替比林与过氧化物酶，只是浓度不同，但均比葡萄糖氧化酶终点法试剂中的含量高。并且，HDL-C和GLU在检测过程中均生成中间产物H2O2。两者含有相同的待测成分,从而使下一试验GLU的待测成分增加,对实验产生了正干扰。然而, 利德曼HDL-C试剂对氧化酶终点法测定GLU却无明显影响，从配方中推断,可能是试剂中的MgCl2或HDAOS成分具有抗干扰作用。当然,究竟利德曼HDL-C试剂中何种成分具有抗干扰作用,尚待进一步研究。首医HDL-C试剂中所含的聚阴离子、表面活性剂、稳定剂与添加剂等成分的种类和浓度都未具体说明，对GLU测定是否有干扰，也需要进一步研究探讨。

    本实验表明：仅凭仪器内部清洗一遍，一般难以彻底清除污染，容易造成废液残留而引起分析间的交叉污染。从观察携带污染清除情况的实验可以发现，测HDL-C后一直测GLU在第三次恢复到原来水平，表明试剂针被污染后清洗2次（或间隔2个非干扰项目测定）基本消除携带污染。

    KEYSYS全自动生化分析仪的工作方式是先测试一个标本的所有试验项目，再测下一个标本。在同一个标本内项目分析顺序可自行安排，因此，对试剂针的交叉污染可通过设置合理的通道来避免。所以，为避免交叉污染，我们应仔细观察相邻项目是否存在干扰或被干扰的可能，以此确定生化分析仪各项目的分析顺序。每天检测病人标本时，应注意将化验单合理排号，避免干扰或被干扰项目相邻。此外，样品针、试剂针和搅拌针应每天用无水乙醇擦洗，防止交叉污染，以便得到准确结果。另外，笔者认为，试剂厂家应在说明书中标明酶保护剂、表面活性剂、稳定剂与添加剂等成分的种类和浓度，特别是浓度较高时，应进行相关的干扰试验，为用户提供相关的资料，以避免由此类干扰造成的实验误差。

【参考文献】
  1 王玉洁.CK、CKMB试剂对肌酐测定结果的影响.国际检验医学杂志，2007，28（3）：263.

2 钱军.临界床生物化学和生物化学检验实验指导,第2版.北京：人民卫生出版社，2005，92－94.

作者单位：730000 甘肃兰州，甘肃中医学院附属医院检验科