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核酸主要存在于细胞核内，是生命和遗传的物质基础，是合成蛋白质组成细胞的重要生理活性物质。近年来的研究证明核酸是维持机体正常免疫的必需营养素，同时具有很强的抗氧化作用，在组织损伤的恢复，提高铁、蛋白质的利用，降低胆固醇等方面发挥作用 ［1］ 。近年来的研究还发现核酸有提高免疫力、记忆力、抗衰老等作用 ［2］ 。啤酒酵母泥除含有较多的蛋白质外，还有脂肪、维生素及核酸，我们主要探讨了从啤酒酵母泥中提取核酸的方法和操作条件，尽可能增大提取率，降低成本，且并不引进有毒害的物质。
1 啤酒酵母细胞壁的破碎方法
啤酒酵母泥中含有的核酸，存在于细胞质中 ［3］ ，因为细胞壁既厚且硬，细胞壁破碎比较困难，必须用适当的方法破碎后，才能使核酸溶出。细胞壁的破碎方法很多，如匀浆器破碎法、超声波破碎法、十二烷基磺酸钠法（表面活性剂法）、稀碱法和冷冻溶胀法等，我们着重摸索了冷冻溶胀法和稀碱法的破碎方法和操作条件。
1.1 冷冻溶胀法 通过冷冻和加热引起细胞壁破坏的物理方法。它既不产生污染，又适合工业化生产。具体操作步骤是取适量啤酒酵母泥，投入预先搅动的等量沸水中，保持温度84℃，迅速加入液氮或碎冰，降温至25℃以下，这样啤酒酵母的细胞壁不能经受剧烈的迅速热胀冷缩而破碎，使细胞内的核酸游离出来。当温度降至25℃以下，在高倍显微镜下观察，90%以上的酵母细胞已破坏完全，能适用下一步核酸的提取分离。
1.2 稀碱法 啤酒酵母的细胞壁主要由多糖组成，加入NaOH溶液溶解多糖以破坏细胞壁，增加通透性，使核酸从细胞内溶出。具体操作步骤是取啤酒酵母泥适量，加入8倍体积的1%NaOH溶液，于20℃以下反应1.5h，然后用6mol/L的HCL中和，核酸溶于水中。此方法中要注意碱的浓度和用量，8倍体积1%的氢氧化钠已足以使细胞壁大部分溶解，方便下一步的核酸提取，无需过浓和过量的碱，否则不仅为后面的中和、提取带来大的工作量，而且反应过强，会引起核蛋白严重水解变性，影响提取效果。
1.3 结果比较 冷冻溶胀法和稀碱法破碎结果比较，见下表1。
表1 两种破碎方法比较方法
2 啤酒酵母泥中核酸的提取细胞壁破碎后，利用浓NaCl溶液，使蛋白质沉淀，离心，得含核酸和多糖的水相，再加入95%乙醇，使核酸沉淀，干燥得核酸。注意此方法中，盐的浓度尽量增大，达到12%，盐折作用即非常安全。此时温度应提高到90℃，维持该温度3h离心去菌渣和杂质等。离心液要充分冷却至6℃，才能使用95%的乙醇进行沉淀，并放置4h，使沉淀安全。
3 核酸纯度测定
从啤酒酵母泥中提取的核酸，经紫外分光光度法测定，纯度达到95%以上。
4 讨论
过去用含水的苯酚沉淀蛋白质，经离心后得含有核酸和多糖的水相，这种方法容易带进有毒的苯酚，影响产品的应用。我们选用NaCl沉淀蛋白质，可以解决这一问题。另外，原料来源较充足，啤酒酵母泥是啤酒生产中的废弃物，每生产1万吨啤酒，大约可以得出湿酵母150吨 ［4］ ，以前多是不经过任何处理直接排入江河、湖泊，造成不同程度的污染，影响生态环境和人类生活的质量。目前我国大多数啤酒厂家已着手解决这一问题，但酵母泥中的核酸及其降解物，一直没有得到很好的提取利用，因此，应用该技术提取啤酒酵母泥中的核酸，可以达到废物利用，改善环境，增创效益的效果。
参考文献
1 佟晓永，赵鑫.核酸营养及其免疫.中华预防医学杂志，1999，33（3）:108.
2 杨秉渊，王中侃.正分子医学和核酸代谢疗法.北京:人民卫生出版社，1999，77-90.
3 J.N达维生.核酸的生物化学，北京:科学出版社，1992，57.
4 吴兰清，庚念祖.啤酒废酵母泥的综合利用.食品科学，1993，1:31-33.
作者单位:250062山东省医科院药物科