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【摘要】 目的 强力霉素对钩端螺旋体抑杀效果研究表明强力霉素对钩端螺旋体有较好的抑杀作用，为了观察其实际作用效果，寻找一种钩端螺旋体病紧急疫情的应急控制措施，为口服强力霉素预防钩端螺旋体病提供科学依据。方法 开展强力霉素预防钩螺旋体病的动物实验研究 ［1］ 。结果 黄金地鼠是钩端螺旋体的敏感动物;钩端螺旋体标准菌株的15群15型中的波摩那型攻击金黄地鼠后均有抗体产生;但各组间金黄地鼠的钩端螺旋体病的临床表现、体温变化并不明显，在加大接种菌液剂量情况下，感染后给药组出现的血尿、尿黄症状与直接感染组间差异有显著性;心脏血培养、尿液培养、病理学改变等各组间差异均无显著性，但病理学改变程度以直接感染组最为明显，感染前给药组次之，感染后给药组最轻。结论 强力霉素对预防钩端螺旋体病有一定的效果，可减少发病率和减轻病理变化程度。
关键词 强力霉素 钩端螺旋体 预防 动物实验
Animal experimental researal of doxycyclinum’s preventing leptospirosis
Zhang Chengfeng，Mei Jiamu，Xu Jianmin，Li Zhihong，Hu Qiang
Jiangxi Provincial Center for Disease Prevention and Control，Nanchang330029.
【Abstract】 Objective In order to observe the real effect that Doxycyclinum prevent on Leptospirosis，find a quick method to control the emergent disaster of Leptospira prevention，we did animal studies of Doxycyclinum’s preˉventing Leptospirosis.Methods Force one to take Doxycyclinum before24hours or after72hours that the golden hamster were infected，then raised for21days.Observed the results of clinic observation and heart blood plant and urine plant and pathological.Results Golden hamster is a sensitive animal to Leptospira;all of antibodies were proˉduced when Golden hamster were attacked by the Pomona in fifteen kinds of standard bacterium of Leptospira in fifteen groups.No significant difference of clinic observation and temperature were found in each group of Golden hamster Leptospirosis.Bloody urine，andyellowish urine of the dosed group after affected were observed when the dose of inocˉulate bacterium liquied was increased，but the directly affected group without dose was not.In three groups of directly affected，dosed before affected and dosed after affected，there were no big differences in heart blood plant，Urine plant and pathological changes.But the order of Pathological changes is below:the group directly affected>the group dosed before affected>the group dosed after affected.Conclusion Doxycyclinum has a good efficacy on preventing Lepˉtospirosis，can decrease the rate of Leptospirosis and lighten the level of pathological.Key words doxycyclinum leptospira prevent animal-experiment
强力霉素对钩端螺旋体抑杀效果实验研究表明强力霉素对钩端螺旋体有较好的抑杀作用。为了寻找一种钩端螺旋体病紧急疫情的应急控制措施，为口服强力霉素预防钩端螺旋体病提供科学依据，我们进一步开展了强力霉素预防钩端螺旋体病的动物实验研究 ［2］ ，现将研究结果报告如下。
1 材料和方法
1.1 实验材料 （1）实验动物:武汉生物所提供的金黄地鼠;（2）实验菌株:北京国家药品生物制品鉴定所提供的15群15型标准菌株中的波摩那群波摩那型;（3）培养基:Koˉrthof培养基;（4）强力霉素 ［3］ :常州制药三厂生产（批号:006001，0.1g/片，10万U）;
1.2 实验方法 采用随机分组方法将实验动物分成感染前给药组、感染后给药组、直接感染组和空白对照组共4个 ˇ 基金项目:国家“洪涝灾害对钩体病流行因素的影响及防治对策研究”重点攻关课题（WKJ-1999-01-01）。实验组，实验周期为21天。实验期间，定期观察所有实验动物临床表现、体温变化、心脏血和尿液培养等结果，对实验中途死亡和实验结束后仍存活的动物全部进行病理检查，观察其病理变化，并取其血液采用MAT实验检测其是否有抗体产生。
1.3 实验步骤 本动物实验共进行了2次，实验方法和结果基本一致。
1.3.1 第一次实验 采用随机分组方法将实验动物分成4 个小组，每组20只，雌雄各10只，为成年金黄地鼠，体重为80～100g。接种时波摩那的菌液浓度为6.25×10 8 /ml。强力霉素悬液配制方法为先将2片强力霉素研碎溶解于500ml蒸馏水中，充分溶解并混匀备用。（1）感染前给药组按1ml/100g鼠体重采用灌胃法给强力霉素，于24h内再采用腹腔注射法按0.5ml/100g鼠体重接种钩端螺旋体;感染后给药组按0.5mg/100g鼠体重接种钩端螺旋体，于第3天再按1ml/100g鼠体重采用灌胃法给强力霉素;直接感染组仅按0.5mg/100g鼠体重接种钩端螺旋体;空白对照组即不接种钩端螺旋体，也不给强力霉素。（2）将所有实验动物置同一地点进行饲养，每天于固定时间测量1次体温并观察2次金黄地鼠表现，每3天称1次体重;于接种钩端螺旋体后第3、7、15天采1次心脏血进行培养。对实验期间死亡的金黄地鼠立即取血液进行抗体检测，并解剖取、肾标本观察其病理学改变。（3）实验进行到第21天，将所有动物处死采血测其抗体水平，并解剖取肝、肾组织进行病理学检查。
1.3.2 第二次实验 实验步骤与第1次基本一致，但金黄地鼠改为未成年鼠（体重为50～70g），每组实验动物数量减为10只，钩端螺旋体接种剂量增大为1ml/100g，心脏血采集时间为接种钩端螺旋体后的第3、5、7天，并于接种钩端螺旋体后的第5、7、9、11天各采1次膀胱尿进行培养。
2 结果
2.1 血清抗体比较 见表1。结果显示除对照组外，3个实验组的感染动物均有抗体产生，最低滴度为1:400，最高为1:3200，说明动物感染是成功的。
表1 强力霉素预防服药实验动物血清抗体比较(略)
将每天所测量的各鼠体温输入计算机用EPI6软件进行统计分析，结果显示第1次实验中感染前给药组于接种钩端螺旋体后第7、10天体温升高且差异有显著性（F=4.581，P=0.0134;F=3.704，P=0.0472）;直接感染组于接种钩端螺旋体后第7天体温升高且差异有显著性（F=8.638，P=0.0033<0.05）其它天体温变化差异无显著性，感染后给药组和对照组在整个实验期内体温无显著性变化。第2次实验结果显示各组实验动物体温变化差异无显著性，但在实验期间观察到直接感染组和感染前给药组有的金黄地鼠出现血尿、尿色金黄等钩端螺旋体病临床表现，见表2，且直接感染组与感染后给药组和对照组间差异有显著性（P<0.022），而感染前给药组与直接感染组间差异无显著性（P=0.5238）。
表2 第一次动物实验金黄地鼠临床表现结果(略)
2.3 心脏血培养观察 第1次实验于接种钩端螺旋体的第3、7、14天，第2次实验于接种钩端螺旋体后第3、5、7天各采1次心脏血进行分离培养，见表3。结果均表明感染前给药组、直接感染组、感染后给药组之间差异无显著性。
表3 金黄地鼠感染钩端螺旋体后心脏血培养结果组别鼠尿培养（略）
第2次实验于接种钩端螺旋体后的第5、7、9、11天各采1次膀胱尿进行分离培养，结果均为阴性。
2.5 病理学变化比较 第1次实验结束后将所有动物处死，采用随机抽样方法每组抽取10只鼠采集肝、肾进行病理学检查;第2次实验结束后将所有动物处死取肝肾作病理学检查，结果见表4、5。第1次动物实验所有动物肝、肾组织受损均不重，主要为退行性病变，3个实验组间肝组织（X 2 =3.750，V=2，0.1<P<0.25）、肾组织（X 2 =0.3409，V=2，P>0.05）病理学检查差异均无显著性，但肾组织直接感染组略高于其它2个组，且受损程度稍重。为进一步观察病理学改变，第2次实验加大钩端螺旋体接种剂量，但因第3天采心脏血时因麻醉剂量过大致直接感染组和感染前给药组一些实验动物死亡，病理学检查显示直接感染组5只鼠中肝、肾未受侵害1只，其余4只均出现肝细胞坏死、出血和肾小球、肾小管出血;感染前给药组4只鼠中肝、肾未 受侵害1只，肝组织可见轻度变性2只，肾髓质轻度出血2 只;感染后给药组10只鼠中肝、
肾未受侵害3只，1只可见肝细胞坏死、肾小球出血，余为肝细胞肿胀、肾小管管型，各组间肝组织、肾组织病理学发生变化的数量差异无显著性，但病变程度以直接感染组最为明显，感染前给药组次之，感染后给药组最轻。
表4 第一次动物实验金黄地鼠病理学改变结果（略）
表5 第二次动物实验金黄地鼠病理学改变结果（略）
3 讨论
金黄地鼠是钩端螺旋体的敏感动物。强力霉素对钩端螺旋体抑杀效果研究结果表明，强力霉素对钩端螺旋体有较好的抑杀作用。本动物实验结果表明，两次实验用钩端螺旋体标准菌株的15群15型中的波摩那型攻击金黄地鼠经过21天后均有抗体产生，说明感染模式是成功的。实验期间未见明显的钩端螺旋体病临床表现，各实验动物体温升高亦不典型，可能是因为金黄地鼠体温个体差异（35.2～ 38.8℃）和每天变化较大（可达1.5℃）、实验用菌的毒性不够强有关，第2次实验在加大接种量情况下有的出现血尿、尿黄现象，直接感染组与感染后给药组差异有显著性，说明感染后服用强力霉素有减轻或防止临床表现出现的作用，感染前给药组效果不明显。心脏血、尿液培养结果差异均无显著性，后期所采心脏血培养可以转阴，尿液培养一直为阴性可能与:（1）金黄地鼠有较强的自身抵抗作用;（2）菌株毒力经多次传代后下降有关。病理学观察结果显示:两次实验的各组间差异均无显著性，但从病变程度来看以直接感染组为重，感染前服药组次之，感染后服药组较轻，表明强力霉素对钩端螺旋体有一定的预防效果，至少可起到减轻病变程度的作用。强力霉素对其它群型钩端螺旋体和野生型菌群菌型效果如何有待更进一步地研究。
参考文献
1 S.Fainey.钩端螺旋体病防治指南，北京:人民卫生出版社，1985，211-214.
2 于恩庶，徐秉臣.中国人兽共患病学，福州:福建科学技术出版社，1988，332-357.
3 国家药典委员会主编.临床用药须知，第3版.北京:化学工业出版社，2001，667.
（收稿日期:2004-05-16） （编辑香 江）
作者单位:330029江西省疾病预防控制中心