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【摘要】 目的 探讨不同年龄组的儿童特发性血小板减少性紫癜与病毒感染及血小板相关抗体的关系。方法 应用PCR技术检测117例患儿VB19、CMV和EBV三种病毒的感染情况，并用ELISA技术测定患儿外周血中pAIgG和pAIgM。结果 117例患儿VB19，CMV，EBV的感染率分别为35%、3.4%和3.4%。VB19感染率在≤3岁组为60%，而在>3岁组其感染率仅为25%，经χ 2 检验，P<0.01，差异有显著性。血小板相关抗体pAIgG，pAIgM在≥2岁，<6岁组的检测阳性率分别为29%和55%;而在≥6岁，≤14岁组其检测阳性率分别为88%和53%;经χ 2 检验pAIgG在两组间差异有显著性。结论 ≤3岁组儿童ITP发生与VB19感染关系密切;≥2岁，<6岁组ITP患儿血小板相关抗体产生主要为pAIgM。而pAIgG和pAIgM在≥6岁，≤14岁组ITP发生中均起了作用。
关键词 病毒 抗体 紫癜 血小板减少性 儿童
The study of relationship among idiopathic thrombocytopenic purpura，virus
infection and platelet-associated autoantibody in different age children
Zhu Jie，Chai Yihuan，Ji Zhenghua，et al.
Department of Pediatrics，Children Hospital，Suzhou University，Suzhou215003.
【Abstract】 Objective The study of relationship among idiopathic thrombocytopenic purpura，virus infection and platelet-associated autoantibody in different age children.Methods One hundred and seventeen peripheral blood samples were collcced from children who were diagnosed as ITP.The PCR was performed to detect the DNA of CMV，EBV and VB19.ELLSA was performed to determine platelet-associated autoantibodies.Results Infection rate of VB19，CMV and EBVwas35%，3.4%and3.4%，respectively.The infection rate of VB19in children of≤3years old was much higher than that in children of>3years old，which was60%and25%，respectively（P<0.001）.The pAIgG positivity in children of≥2，<6years old was much lower than that in children of≥6，≤14years old，which was29%and88%，respectively（P<0.001）.The pAIgM positivity was similar between two groups.Conclusion The infection rate of VB19is the highest among three different virus in ITP children of≤3years old.Both pAIgM and pAIgG play important role in ITP children of≥6，≤14years old.However，the pAIgM plays major role in ITP chilˉdren of≥2，<6years old.
Key words virus antibody purpura thrombocytopenic children
血小板减少性紫癜在临床上可分为两类:（1）继发性血小板减少性紫癜;（2）特发性血小板减少性紫癜（ITP）。前者系骨髓巨核细胞数量减少而导致的外周血小板数量减少，它可继发于多种疾病或病毒感染直接侵犯巨核细胞。后者则是由于机体免疫系统失调导致外周血小板破坏过多，而骨髓巨核细胞正常或增高，故特发性血小板减少性紫癜又被称为免疫性血小板减少性紫癜 ［1］ 。现认为病毒与ITP发生很密切，临床上大多数患儿在发病前3周左右有病毒感染史。由于CMV，EBV，VB19在儿童中感染率较高，我们用PCR法检测了117例ITP患儿CMV，EBV，VB19感染情况，及用ELISA法检测外周血血小板相关抗体pAIgG和pAIgM。通过比较≤3岁组和>3岁组的病毒感染情况及2～6岁组与6～14岁组血小板相关抗体的阳性率，进一步了解不同年龄组血小板减少性紫癜的发生、发展，以期进一步指导临床用药。
1 对象和方法
1.1 对象 病例:117例（男71例，女46例）ITP患儿，年龄1个月～14岁。系我院自2003年1月～2004年3月收治的初诊住院病人。诊断标准按《血液病诊断及疗效标准》 ［2］ 。上述病例均有不同程度的皮肤出血点，瘀点、瘀斑、鼻衄、牙龈出血，偶有消化道出血，泌尿道出血，颅内出血未见。且上述病例患病前均有呼吸道或消化道病毒感染史。
1.2 方法
1.2.1 标本制备 （1）2ml枸橼酸钠抗凝静脉血，以2000r/min离心15min后，取白细胞层置于-80℃冰箱中保存，待行病毒DNA测定。（2）5ml枸橼酸钠抗凝静脉血，以900r/min离心5min，取血浆层后高速离心得血小板沉淀后用试剂盒提供的血小板专用的破板剂破坏血小板游离出血小板抗体置-20℃冰箱保存，待行血小板相关抗体检测。
1.2.2 病毒DNA检测 用聚合酶链反应方法检测。VB19，HCMV，EBV试剂盒购自于中山医科大学达安基因股份有限公司和华美生物工程公司（具体实验步骤见产品说明书）。
1.2.3 血小板相关抗体（pAIgG，pAIgM）检测 采用ELISA法，试剂购自上海太阳生物技术公司。（具体实验步骤见产品说明书）。
1.3 统计学处理 将检测结果用SAS软件包行χ 2 检验。
2 结果
2.1 临床资料分析 117例ITP患儿，其中0～3岁（包括3岁）32例，3～14岁85例，2～6岁（包括2岁，不包括6例）65例，6～14岁（包括6岁及14岁）34例。全部病例均在治疗前进行血小板病毒及相关抗体的检测，并行骨髓细胞形态学检查，髓象符合ITP改变（巨核细胞明显增多，以颗粒巨为主，呈成熟障碍表现，血小板少见），外周血象血小板<20×10 9 /L42例，20×10 9 /L～50×10 9 /L53例，>50×10 9 /L21例。
2.2 病毒检测结果 117例ITP患儿中VB19阳性41例（35%），EBV阳性4例（3.4%），HCMV阳性4例（3.4%），其中4例为同时两种病毒阳性（有2例是VB19与EBM同时感染，有1例是VB19与HCMV同时感染，另1例是EBV与HCMV同时感染）。
2.3 血小板相关抗体检测结果 117例ITP患儿中pAIgG阳性（结果高于正常值）57例（49%），pAIgM阳性（结果高于正常值）60例（51%）。
2.4 ITP不同年龄HPV-B19-DNA的检测结果 ≤3岁32例，其中阳性19例，>3岁85例，其中阳性22例。比较两组病人HPV-VB19感染率的差异，经统计学样本率的χ 2 检验，P<0.01，两组差异有显著性。见表1。
表1 ITP不同年龄HPV-B19-DNA的检测结果略
2.5 ITP不同年龄血小板相关抗体的检测结果 ≥2岁，<6岁组65例，其中pAIgG阳性19例，pAIgM阳性36例;≥6岁，≤14岁组34例，其中pAIgG阳性30例，pAIgM阳性18例。比较两组病人血小板相关抗体pAIgG和pAIgM阳性率差异，经统计学处理，样本率的χ 2 检验，前组P<0.01，差异有显著性，后组P>0.05，差异无显著性，见表2。
表2 ITP不同年龄血小板相关抗体的检测结果 略
3 讨论
随着对特发性血小板减少性紫癜（ITP）的深入研究发 现，在ITP的发展过程中均有免疫机制参与，故又称此为免疫性血小板减少性紫癜。同时有资料表明，约有80%的ITP患儿在发病前3～8周有上呼吸道感染或肠道病毒感染史 ［1］ 。故ITP的发生大部分是由病毒感染后引发了免疫反应，产生了血小板抗体从而进一步破坏外周血小板导致血小板减少。但ITP发生究竞与哪种病毒关系更为密切呢?现仍无法确定。目前已发现十余种DNA或RNA病毒与ITP的发生有关，其中包括疱疹病毒，麻疹病毒，人类微小病毒B19，风疹病毒，流行性腮腺炎病毒，肺炎病毒和肝炎病毒等 ［3］ 。近年来有许多报道认为EBV，CMV，HPV-B19这种病毒与ITP的发生更为密切 ［4～6］ 。本文也因此通过PCR法对117例ITP患儿外周血进行CMV，EBV，VB19此三种病毒的DNA检测，结果显示VB19在儿童ITP中感染率较其它两种病毒高，且该病毒感染主要集中于≤3岁组病人，故VB19与小年龄组ITP发病关系更为密切。CMV，EBV在本研究中对ITP的发生意义不大。大年龄组ITP的发生可能存在此三种病毒以外的病毒感染。
有资料表明儿童ITP有90%是急性过程，且这些病人主要集中在2～5岁年龄段。大年龄组儿童ITP发病率相对较少，但大年龄组儿童ITP以慢性过程较多见，并且与成人的慢性ITP有许多相似之处 ［7］ 。本文分别比较≥2岁<6岁与≥6岁≤14岁两年龄段的ITP病人外周血pAIgG，pAIgM的阳性率发现，≥2岁，<6岁年龄段ITP患儿的pAIgG的阳性率明显低于≥6岁，≤14岁该年龄段的患儿，而pAIgM在两组之间没有明显差别。此结果的获得可能与儿童的免疫学特性有关。IgG在生后一段时间产生量很少，直到6～7岁左右该抗体产生量才接近成人水平，而IgM的产生在1岁左右已接近成人水平。故两组间pAIgG有显著差别，而pAIgM无显著差别。同时由于IgM在急性感染中可迅速产生，并随着时间的推移，IgM的效价慢慢减退，然而IgG则可以由反复病毒感染其效价呈持续上升趋势。边一免疫学特点并结合本文结果不难解释为什么2～5岁儿童急性ITP发病率高，且在6月以内可以自然康复，而年龄越大则发生慢性ITP的可能性越大。
总之，大部分儿童ITP属于急性型，小年龄组尤为多见。随着年龄的增长发生慢性ITP的可能性越大。对不同年龄组ITP的免疫学机制进一步探讨及免疫学方面的实验室检测水平不断完善，将有助于临床的诊断及治疗。
参考文献
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2 张之南，沈娣.血液学诊疗及疗效标准，第2版.北京:科学出版社，1998，279.
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7 Gent D J.Childhodd immune thrombooy topenic purpura.Blood rev，2002，16:27-29.
作者单位:215003苏州大学附属儿童医院
（收稿日期:2004-10-11） （编辑青 山）