【摘要】 目的 根据胸腺肽
制剂的产品特性，对其生产工艺进行改进，以提高原料的利用率和产品活性检测结果。 方法 利用酸性提取和碱性提取相结合，并适当延长提取周期。 结果与结论 改进后的工艺和原工艺相比，提高了收率及活性。
【关键词】 胸腺肽 生产工艺
胸腺肽（Thymus Peptides）是从小牛胸腺中提取的具有高活性的混合肽类制剂。
临床主要用于治疗各种原发性或继发性T细胞缺陷症。根据十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明，胸腺肽中主要成分是相对分子量为9600和7000左右的两类蛋白质（胸腺组分5） ［1］ ，而在胸腺组分5中，胸腺素α1是主要的活性物质，但在胸腺素α1一级结构28肽氨基酸排列中，肽片段赖19～天28又具有较强的生物活性。陈妍柯等对胸腺肽活性进行测定，认为胸腺肽中多肽浓度在20～200ug/ml时，E-花环形成效果较好，浓度太高时具有抑制作用 ［2］ 。目前，国家对该产品的
检验标准中，至少强调了与此相关的两个方面的要求，即胸腺素α1的含量和产品的生物活性 ［3］ 。
胸腺肽的提取工艺较多，主要有离心法、超滤法、透析法、冻干法、葡聚糖凝胶层析法、冷乙醇抽提等方法，具体操作也有差异，其产品质量也不易控制。随着技术手段的提高，近年来胸腺肽分离纯化多采用超滤法，透析法（Laurence法）仅在实验室使用。相比之下，超滤法更适合大批量生产及质量控制。目前该制剂收率按每公斤胸腺提取的胸腺肽制剂多肽含量（g）计算，基本在3.0～6.0g/kg，根据国家对该产品的要求 ［4］和相关资料报道 ［5］ ，对其生产工艺进行了改进，旨在提高产品的收率及活性，取得了较好的效果，现报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料 小牛胸腺，浓盐酸（化学纯），氢氧化钠（化学纯）。
1.2 方法 旧工艺:以小牛胸腺为原料，除脂肪，去杂，用浓盐酸调纯化水至pH值为3.0后，加入2倍体积纯化水匀浆，加热至80℃，保持10min，以氢氧化钠调上清液至符合国家标准要求（6.0～7.5），超滤，即得。
改进工艺:以小牛胸腺为原料，除脂肪，去杂，用浓盐酸调纯化水至pH值为3.0后，加2倍体积纯化水匀浆，加热至80℃，保持10min，冷藏过夜，次日离心，上清液加热至80℃，保持10min，冷置过夜，次日以氢氧化钠调上清液至pH值为11.0，微沸，冷藏过夜，次日离心，并将上清液以盐酸回调至符合国家标准要求（6.0～7.5），超滤，即得。
2 结果
按国家标准规定，以Folin-酚法测定多肽含量，E-玫瑰花结法测定产品活力，并计算收率。其结果如下（其中，收率按每公斤胸腺提取其制剂中多肽的克数），见表1。
表1 两种工艺比较（略）
3 讨论
该制剂生产工艺较多，根据产品特性进行的改进，其结果和预期目的一致:多肽含量比原工艺增加了3倍，收率提高较多，活力也有所增加，特别是紫外吸收更符合国家标准要求（260±3nm处有最大吸收） ［4］ 。
国家标准控制该产品的分子量为10000道尔顿以下，国内对该产品分子量范围定位在9700和7600两部分，准确选用超滤柱对提高产品收率有较好的作用。
李光谱等对胸腺肽利用双离子交换层析法纯化后认为相对分子量为3108左右的胸腺肽α1部分是使E-玫瑰花结率提高的主要成分 ［6］ ，使胸腺肽α1游离至溶液中对该产品的检验结果影响较大。
与胸腺肽α1部分同样具有生物活性的胸腺五肽（精-赖-天-缬-酪）是否存在于混合物中，检测活性是否是二者（胸腺肽和胸腺五肽）的叠加效应尚需进一步研究。
参考文献
1 李良铸，李明晔.最新生化药物制备技术，北京:中国医药科技出版社，2001，121.
2 陈妍柯，王亚鹏.E花环法测定胸腺肽活性剂量效应.中国生化药物杂志，2001，（5）:245-246.
3 国家药品监督管理局.国家药品质量标准·化学药品地标升国标（第16分册），119-120.
4 张旭东.小牛胸腺肽生产工艺的改进.中国生化药物杂志，1996，（6）:264-265.
5 侯淦泉，王厚行.胸腺肽提取工艺初探.中国生化药物杂志，1993，（2）:21-22.
6 李光谱，迟春萍.胸腺肽纯化工艺的改进.中国生物制品学杂志，2003，（3）:177-178.
作者单位:723000陕西东盛生物制品有限公司
作者：
赵炜 2005-8-3