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【摘要】 目的 了解标本稀释度为1:100时健康献血员的抗核抗体（ANA）检测结果。方法 选择48份健康献血员血清样本，分别按三种稀释度1:100、1：200、1：400稀释，采用间接荧光免疫法检测。结果 标本稀释度为1：100时，献血员血清中ANA阳性率为71%；标本稀释度为1：200时，ANA阳性率为19%；标本稀释度为1：400时， ANA阳性率为2%。结论 欧蒙公司建议定性检测时推荐的样品稀释度为1：100过高。
【关键词】 抗核抗体；间接荧光免疫法
ANA测定在自身免疫性疾病的临床检测中是一个很重要的初筛试验。间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence IIF）是检测血清总ANA的常规方法。病人血清中ANA定性检测时推荐的样品稀释，一直采用1：100这样的标本稀释度，如果标本阴性，细胞核无特异性荧光，标本阳性的细胞核有特异性荧光。但近来，临床反映ANA阳性率过高，与某些病人临床症状不相符。为了解是否存在假阳性问题，笔者选择部分健康献血员血清标本，分别采用1：100、1：200、1：400三种标本稀释度，比较其ANA结果。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 样本来源
收集我院输血科当日的48份健康献血员样本，年龄18～22岁，男女各半。血样采集使用普通真空管（无抗凝剂）。离心后取血清分析。
1.1.2 试剂
欧蒙人血清中抗核抗体体外检测试剂盒(含有HEp-2与猴肝冰冻组织切片的联合生物薄片),批号T041127TA，有效期：2005-11-26；FITC标记的抗人免疫蛋白直接使用。生产厂商：德国医学实验诊断股份有限公司。
1.1.3 仪器设备 OLYMPUS BX15荧光显微镜;北京医用离心机厂出产的离心机LD5-10B;上海跃进医疗器械厂生产的电热恒温水温箱，型号HH.W21.Cu600；TECAN 公司生产的RSP150型标本前处理仪。
1.2 实验方法
1.2.1 抗核抗体的检测
同时采用猴肝片和HEp-2细胞作为抗原基质，采用间接免疫荧光法检测抗核抗体，根据猴肝片和HEp-2细胞核能否产生特异性的荧光来判断标本中抗核抗体的有无。
1.2.2 标本稀释度
(1)1:100（欧蒙试剂盒推荐稀释度）取10μl血清用1.0ml标本缓冲液稀释并混匀,同时进行手工稀释和仪器（RSP150型标本前处理仪）稀释,比较两者有无差异；(2)1:200 用移液器取10μl血清加入2.0ml标本缓冲液稀释并混匀; (3)1:400 用移液器取10μl血清加入40ml标本缓冲液稀释并混匀;试验中同时设置阳性和阴性对照。
1.2.3 结果判断
荧光显微镜下观察细胞核特异的荧光模型，如果标本阴性,细胞核无特异性荧光。
2 实验结果与分析
2.1 实验中ANA检测的阳性对照及阴性对照结果均符合试剂盒说明书要求。说明该实验结果可靠。
2.2 标本稀释度为1：100时，48份献血员中有34份阳性结果（包括弱阳性±），阳性率约为71%;标本稀释度为1：200时，48份献血员中有9份阳性结果（包括弱阳性±），阳性率约为19%；标本稀释度为1：400时，48份献血员中有1份阳性结果（包括弱阳性±），阳性率约为2%。
3 结论
欧蒙试剂盒推荐使用1：100这样的标本稀释度。文献［1，2］报道中也多以抗核抗体的滴度>1:100为阳性。但是近几个月临床反馈阳性率偏高，引起我室高度重视。笔者从本院输血科挑选当日部分健康献血员的血样，选择标准是甲、乙、丙肝、艾滋和梅毒检测指标均为阴性，年龄均在16～22岁，男、女标本各半数。通过实验，笔者发现：标本稀释度为1：100时，献血员ANA检测结果中约有72%阳性率，定性结果多在弱阳性与阳性之间,阳性率过高。稀释度为1：200，献血员ANA阳性率为18%，大大降低。稀释度为1：400，献血员阳性率为2%。因此，笔者建议：将标本稀释度由1：100改为1：200。关于仍有18%献血员的ANA检测结果为阳性，笔者认为，虽然这些献血员没有上述传染性疾病，但并不排除个别献血员有自身免疫性疾病。有资料［3］显示：20岁以下健康人阳性率为0～4%，40岁以上健康人阳性率为20%。
【参考文献】
1 李一荣，吴健民.血小板减少性紫癜患者抗心磷脂抗体及抗核抗体的检测.中华检验医学,2001,24:111.
2 闫惠平,庄辉,刘燕敏.原发胆汁性肝硬化患者的免疫学特点分析.中华肝脏病杂志,2005,13(1):12-16.
3 吴健民.免疫学检验-理论与临床.北京：人民卫生出版社,2003，307.
作者单位： 230032 安徽合肥，安徽医科大学附属第一医院检验科
(编辑：邓 锋)