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【摘要】 目的 进一步探讨免疫表型在急性白血病诊断、分型、治疗及预后中的作用。方法 应用ABC-AP免疫二步法检测104例急性白血病患者白血病细胞14种标记抗原结合细胞形态学观察，并对白血病进行分类、分型。结果 104例初发急性白血病中，T淋巴细胞白血病(T-ALL)4例(3.8％)，B淋巴细胞白血病(B-ALL)38例(36.5％)，急性髓细胞白血病(AML)58例(55.8％)，急性混合性白血病(MAL)2例(1.9％)，未行明确分类的2例(1.9％)。结论 ABC-AP免疫二步法检测白血病细胞免疫标记方法简单，只须普通光学显微镜就能开展实验，可为白血病的诊断、分型、分类乃至白血病靶向治疗提供可靠依据。
【关键词】 白血病；急性；免疫表型
【Abstract】 Objective To study the significance of immunophenotype analysis in the diagnosis,the prognosis of acute leukemia.Methods By using ABC-AP immune two step method,we detected 14 antigens on leukemic cells of 104 patients with acute leukemia and ,in combination with the observation of cell morphology, classified their type and subtype. Results Among the 104 primary acute leukemia patients, the number of patients with T lymphocyte leukemia,B lymphocyte leukemia,acute myeloblastic leukemia,mixed phenotype acute leukemia and umclassified leukemia were 4(3.8％)，38(36.5％)，58(55.8％)，2(1.9％),and 2(1.9％),respectively.Conclusion Detecting immune marker on leukemic cell by ABC-AP two step immune method is very simple which can be finished with a light microscope,and it can provide a reliable basis for the diagnosis and classification of leukemia and even the targeting therapy for leukemia.
【Key words】 leukemia；acute；immunopheno type
对104例在我院门诊或住院治疗的初发急性白血病患者应用ABC-AP免疫二步法检测其白血病细胞抗原，并对其白血病进行分类、分型。现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 104例患者均为2003年9月～2006年4月在我院门诊或住院治疗的初发急性白血病患者,其中男56例,女48例；年龄1～80岁,中位年龄31.12岁(14岁以下儿童25例)。所有患者临床外周血及骨髓形态学诊断标准符合《血液病诊断及疗效标准》［1］。
1.2 试剂 白血病免疫分型测定试剂盒购自上海太阳生物技术公司。单克隆抗体，T细胞系列：CD3、CD5、CD7，B细胞系列：CD10、CD19、CD20，髓细胞系列：CD13、CD14、CD33、CD41、CD68、MPO，非系列特异性：CD34、HLA-DR。
1.3 方法 取患者化疗前骨髓涂片，应用抗生物素蛋白生物素复合物(ABC-AP)免疫二步法常规操作，显色后以苏木素复染，甘油明胶封片，显微镜观察，并计数阳性细胞百分数。阳性判断标准：原始细胞(白血病细胞)阳性率≥20％者判为阳性。所有患者骨髓涂片同时做常规瑞氏染色，过氧化物酶(POX)染色，糖原(PAS)染色，氯乙酸AS-D萘酚酯酶(AS-DNCE)染色，醋酸AS-D萘酚酯酶(AS-DNAE)染色及NaF抑制试验，外周血涂片做瑞氏染色。
2 结果
104例初发急性白血病患者中，T淋巴细胞白血病(T-ALL)4例(3.8％)，B淋巴细胞白血病(B-ALL)38例(36.5％)，急性髓细胞白血病(AML)58例(55.8％)，急性混合性白血病(mixed phenotype acuta leukemia MAL)2例(1.9％)，未行明确分类的2例(1.9％)。
4例T-ALL中，CD7+100％(4／4),CD3+50％(2／4),CD5+50％(2／4)，1例伴随CD68+。38例B-ALL中，CD10+、CD19+均占76.3％(29／38)，CD20+52.6％(20／38)，HLA-DR+84.2％(32／38),3例伴随CD68+，1例伴随CD33+。58例AML中MPO+者最多，占96.7％(56／58)，其次为CD68+84.5％(49／58),CD13+82.8％(48／58),再次为CD33+58.6％(34／58)、HLA-DR+65.6％(38／58),CD34+29.3％(17／58),伴随表达者有：伴随CD7+3例，伴随 CD10+3例，伴随CD9+1例。2例MAL中,1例形态学观察发现骨髓涂片中有一大一小两类原始细胞,免疫标记结果为CD3+CD7+MPO+CD68+CD13+，另1例骨髓涂片中细胞成分较杂，多数细胞似L2的原始淋巴细胞，外周血中除大量原始细胞外，还可见部分早幼粒中幼粒和幼稚单核细胞，临床无CML病史，免疫标记结果为CD10+CD19+MPO+CD68+CD13+HLA-DR+，诊断为MAL。2例未能分类的急性白血病患者，1例14种标记中只有CD68+和HLA-DR+，另1例只有CD34+。
42例ALL和58例AML细胞形态学分型及免疫表型见表1、2。表1 42例ALL患者形态学分型及免疫标记结果表2 58例AML患者形态学分型及免疫标记结果
3 讨论
自1986年FAB协作组织提出MIC分型以来,已有越来越多的单克隆抗体被应用于白血病的诊断,使急性白血病(AL)特别是淋巴细胞白血病的分型准确率提高到一个新的水平。Boban等研究了169例成人急性白血病，发现22.5％的病例免疫表型和形态不一致，若将形态与免疫表型结合进行分型，只有1.8％的病例不能分型。免疫表型对于某些难以辨认的细胞或者区分T、B淋巴细胞尤为重要，也有助于MAL的鉴别和诊断。本组104例初发急性白血病，在形态学的基础上结合免疫学分型，102例患者类型基本上确定，只有2例未明确定型。2例未明确定型的病例中，1例骨髓涂片表现为低增生性白血病，所测14种标记中只有CD68+和HLA-DR+；另1例患者骨髓增生极度活跃，原始细胞形态特征不明显，难以辨认，所测定的14种标记中只有CD34+，由于笔者所测标记有限，不能肯定是否急性未分化性白血病(AUL)或极微分化急性髓细胞白血病，所以未确定类型。
HLA-DR是由人类6号染色体上的HLA-DR区基因编码的α和β糖蛋白结构，主要表达于B淋巴细胞和干祖细胞等。本组13例M3患者HLA-DR全部阴性，表明HLA-DR在M3型白血病的鉴别和诊断中有重要的价值，这一观点与国内其他一些研究相一致［2］。CD14+是单核细胞特异性较高的标记物，本组26例M4和M5中CD14+10例(38.5％),而其他各型白血病中无1例阳性，表明CD14+在单核细胞系统白血病诊断中有重要意义，而CD14－却不能排除单核细胞系统白血病的可能。
一般认为CD34、CD7、CD13、HLA-DR强表达的急性白血病CR率低，预后差，CD14+AML有存活期短的趋势，而CD15、CD33、CD10、CD19强表达者预后较好。也有的作者提出CD34表达不能白血病，预后较差［3］。笔者观察42例AL患者CD34和乳酸脱氢酶与白血病预后的关系，结果显示CD34+组CR率低于CD34-组(P＜0.05)［4］。
近年来，单克隆抗体研究发展十分迅速，它不仅用于各种备注病的诊断与分型，而且在恶性血液病的治疗中也显示出广阔的前景，目前已有5种单抗获得了美国FDA批准用于临床，另外还有许多单抗正在进行各期临床试验［5］，而免疫学表型则是其靶向治疗的基础。笔者采用的ABC-AP免疫二步法检测白血病细胞免疫标记，方法简单，容易掌握，不需要特殊仪器设备，只需要普通光学显微镜就能开展实验，同时还可以紧密结合光镜下血细胞形态，对病理细胞做仔细分析，为血液肿瘤的诊断、分型、分类乃至于血液肿瘤的靶向治疗提供可靠依据。
【参考文献】
1 张之南，沈悌.血液病诊断及疗效标准，第2版.北京：北京科学出版社，1998，164-193.
2 张水生，陈世林，王晓莉，等.45例急性淋巴细胞白血病HLA-DR抗原表型分析.江西医学检验，2002，20(1)：31.
3 唐亚军，马葵，李次芬，等.急性白血病形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学分型.中华血液学杂志，2002，23(5)：264-266.
4 沈佳坤.CD34和乳酸脱氢酶在急性白血病预后中的作用. 实用临床医学，2005，6(10)：6-7.
5 扶云碧，孟凡义.单克隆抗体在恶性血液病治疗中的应用. 中华血液学杂志，2005，26(8)：509-511.
作者单位： 334000 江西上饶，上饶市人民医院检验科(Δ血液科)
(编辑：汪 洋)