国产与进口苯磺酸氨氯地平片的人体生物等效性研究

【摘要】  目的 研究国产与进口苯磺酸氨氯地平片的人体生物等效性。方法 20名健康男性受试者随机交叉单剂量口服国产或进口苯磺酸氨氯地平片10mg后，用HPLC-MSD测定血浆中苯磺酸氨氯地平浓度。结果 国产及进口苯磺酸氨氯地平片的AUC0-144分别为（378.8±73.36）、（385.5±83.62）（ng·h）/ml； AUC0-∞分别为（414.8±72.03）、（415.2±82.1）（ng·h）/ml；Cmax分别为（8.26±1.48）、（8.25±1.91）ng/ml；tmax分别为（7.40±0.94）、（7.60±0.75）h；t1/2分别为（39.64±8.31）、（37.00±10.75）h。国产制剂相对于进口制剂的人体生物利用度为（99.2±9.4）%。结论 国产与进口苯磺酸氨氯地平片具有生物等效性。

【关键词】  苯磺酸氨氯地平；HPLC-MSD；生物等效性

    Study on bioequiavailability in human body between domestic and imported amlodipine besylate tablets

    JIN Chun-hui,BAO Li-zeng,SUN Cheng-chun.Zhejiang De’ende Pharmaceutical Co,Ltd,Xinchang  312560,China

    【Abstract】  Objective  To study the bioequiavailability of domestic amlodipine besylate tablets and imported ones.Methods  20 male healthy volunteers took single dose of 10 mg amlodipine besylate tablets orally in a random crossover design,blood concentrations were determined by HPLC-MSD.Results  The main pharmacokinetic parameters of domestic and imported tablets were determined respectively as follows: AUC0-144 were （378.8±73.36）and（385.5±83.62）（ng·h）/ml，AUC0-∞ were （414.8±72.03）and（415.2±82.1）（ng·h）/ml,Cmax were （8.26±1.48）and（8.25±1.91）ng/ml；tmax were （7.40±0.94）and（7.60±0.75）h；t1/2 were（39.64±8.31）and（37.00±10.75）h. The relative bioequiavailability of the home made tablet to imported one was （99.2±9.4)%.Conclusion  Domestic and imported amlodipine besylate tablets were bioequiavalent.

    【Key words】  amlodipine besylate tablets; HPLC-MSD; bioequiavailability

    苯磺酸氨氯地平属于第二代二氢吡啶类钙通道阻滞剂，临床主要用于治疗高血压和心绞痛。与同类型其他药物相比，该药有服用剂量小，药效维持时间长等特点，同时其对血压正常者无明显影响，副作用少而轻微，主要有踝部水肿、头痛和面部潮红等。因此，该药物有广泛的临床应用前景。本试验通过测定血浆中苯磺酸氨氯地平的浓度，观察健康志愿者分别口服国产和进口苯磺酸氨氯地平片的生物等效性，为临床用药提供参考。

    1  材料与方法

    1.1  仪器  HP1100LC-MSD液相色谱质谱联用仪，美国Agilent公司生产，TDL-4型离心机，上海安亭科学仪器厂生产，XK96-A快速混匀器，姜堰市新康医疗器械有限公司生产。

    1.2  试药  受试制剂：苯磺酸氨氯地平片，规格：每片5mg，批号：0403112，浙江得恩德制药有限公司生产；参比制剂：苯磺酸氨氯地平片（商品名：络活喜），每片5mg，批号：55805022，辉瑞制药有限公司生产；氨氯地平对照品 （含量>99%)，批号100374-200301；米氮平对照品 （含量99.8%)，批号010728；购自中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯，为美国TEDIA公司生产。

    1.3  研究对象  20名健康男性志愿者，年龄（21.20±1.60）岁，体重（60.31±1.72）kg，身高（170.84±4.23）cm。体格检查显示其血、尿常规、血糖、肝肾功能、心率、血压、心电图等各项指标均为正常，且无心、肝、肾、消化道、神经系统异常及代谢异常等病史。试验前2周内及试验期间未用过任何药物。本试验方案经伦理委员会讨论通过，受试者均自愿签署知情同意书。

    1.4  苯磺酸氨氯地平血药浓度的测定

    1.4.1  色谱条件  色谱柱：Zorbax Eclipse XDB C8柱（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇∶0.1％醋酸-0.2％醋酸铵缓冲液（68∶32）；流速：0.6ml/min；柱温：20℃；进样量为50μl；检测器为MSD质谱，质谱条件：AP-ESI，正离子模式，雾化压力30psi，保护气为N2，流速10L/min，毛细管电压4000V，碎裂电压为110V，采集方式为SIM模式，正离子采集：苯磺酸氨氯地平m/z=409.20（M＋H），431.10（M＋Na）。内标米氮平m/z=266.20（M＋H）。

    1.4.2  标准溶液的制备  精密称取氨氯地平10mg，置于100ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成浓度为100μg/ml的储备液，置于4℃冰箱中储存。

    1.4.3  样品处理  在10ml干净离心管中准确加入待测血浆1.0ml，加入内标米氮平（0.1μg/ml)100μl,1mol/L NaOH 0.2ml，加乙醚-二氯甲烷（2∶1) 5ml萃取，充分振荡4min，离心后分离有机相，取有机相4.5ml，于40℃水浴中用氮气吹干溶剂，残留物用100μl流动相溶解，取50μl进样测定。

    1.4.4  标准曲线的绘制  取氨氯地平标准液（100μg/ml）适量，加空白血浆稀释，配制成含氨氯地平血浆浓度为0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、15.0和30.0ng/ml的系列血样，分别按“1.4.3” 项下方法处理后进样测定。

    1.4.5  回收率与精密度试验  取氨氯地平标准液（100μg/ml）适量，用空白血浆稀释，配制成含氨氯地平对照品低、中、高3种不同浓度（0.5、5.0、15.0ng/ ml）的血浆样品各5份，按“1.4.3” 项下方法处理后进样测定，考察方法的回收率及日内（5次）、日间（5天）精密度（RSD）。

    1.5  试验方案  将20名受试者随机分为2组，每位受试者按双交叉设计表服用受试制剂或参比制剂10mg，早晨空腹用200ml温开水送服。服药后2h内不饮水，不做剧烈活动，4h后统一进低脂肪标准餐。试验期间按要求统一配餐，经过2周清洗期后进行交叉试验。给药前禁食12h，受试者于试验前1天和试验期间禁止饮酒及咖啡类饮料，并避免剧烈运动。分别于给药前和给药后2、3、4、5、6、7、8、10、12、24、48、72、96、120和144h取肘静脉血4ml，肝素抗凝，于30min内2000rpm，4℃离心10min，迅速取血清分双份于-20℃贮存，备测。

    1.6  数据处理和统计学分析  采用中国药理学会数学专业委员会编制的3p97程序，以非房室模型统计矩计算法，经处理自动求算药动学参数。在90%置信区间内对tmax和经对数转化后的Cmax、AUC0-144和AUC0-∞进行双单侧t检验及方差分析，评价两制剂的是否具有生物等效性。

    2  结果

    2.1  方法专属性考察  在“1.4.1”色谱条件下，氨氯地平与内标米氮平分离良好，保留时间分别为5.6min和4.3min，血中内源性杂质不干扰样品测定，详见图谱1。

    2.2  标准曲线与线性范围  以氨氯地平与内标物浓度比值为横坐标（X），氨氯地平与内标物的峰面积比值为纵坐标（Y），求得线性回归方程。方程为：Y=1.02×10-1X+3.93×10-3（r=0.9957，n=8）。线性范围为0.2～30ng/ml；最低检测限0.1ng/ml （以S/N≥2计）。

    2.3  回收率与精密度试验  回收率与精密度试验结果详见表1。表1  回收率与精密度试验结果由表1可见，血浆中氨氯地平3种浓度的相对回收率范围为96.2%～101.2%，日内RSD≤9.38%，日间RSD≤9.69%。

    2.4  药动学参数  20名健康受试者口服国产与进口苯磺酸氨氯地平片10mg后的主要药动学参数详见表2；平均药-时曲线见图2。表2  2种制剂的药动学参数

    2.5  生物利用度计算  以辉瑞制药有限公司生产的苯磺酸氨氯地平片（批号：55805022）为标准参比制剂，按F=受试制剂AUC0-144/参比制剂AUC0-144×100%和F=受试制剂AUC0-∞/参比制剂AUC0-∞×100%计算苯磺酸氨氯地平片（批号：0403112）的相对生物利用度，结果受试制剂的平均相对生物利用度分别为（99.2±9.4）%和（98.9±9.6）%。

    2.6  生物等效性评价  采用中国药理学会数学专业委员会编制的3p97生物等效性程序自动求算。AUC由3p97程序用统计矩法计算得出，Cmax、tmax由实际血药浓度经-时读出。方差分析及双单侧t检验结果表明，受试制剂AUC0-144和AUC0-∞的90%可信区间分别为88.2%～111.5%和87.5%～109.4%，均在参比制剂苯磺酸氨氯地平片的80%～125%范围内；Cmax的90%可信区间为86.7%～110.3%，在参比制剂的80%～125%范围内；tmax的90%可信区间为92.5%～116.4%，在参比制剂的80%～125%范围内。因此，受试制剂与参比制剂具有生物等效性。

    3  讨论

    苯磺酸氨氯地平由于服药剂量小，半衰期长，血药浓度低，HPLC-UV检测灵敏度不够。有人曾采用HPLC-电化学检测法测定血浆中氨氯地平［1］，但方法需要很高的工作电压，对仪器的稳定性及样品处理要求很高。也有人用GC-ECD法或GC-MS法测定血浆中氨氯地平［2，3］，但预处理时需进行衍生化处理，误差较大。我们建立HPLC-MSD法测定血浆中氨氯地平，该方法简单，操作方便，精密度好，回收率高，成功地用于该药的药代动力学分析。

【参考文献】
  1 Sbimooka K,Sawada Y,Tatematsu H.Analysis of amlodipe in serum by a sensitive bigh-performance liquid cbromatographic method with amperoetric detection.J Pharm Biomed Anal,1989,7（11)：1267.

2 Faulkner JK,McGibney D.The pharmacokinetics of amlodipine in healthy volunteers after single intravenous and oral doses and after 14 repeated oral doses given once daily.Br J Clin Pharmacol,1986,22（1):21.

3 Beresford AP,McGibney D,Humpbrey MJ,et al.Metabolism and kinetics of amlodipine in man.Xenobiotica,1988,18（2):245.

作者单位：1 312560 浙江新昌，浙江得恩德制药有限公司 2 250031 山东济南，济南军区总医院药理科