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【摘要】 目的 验证注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠的无菌检查法。 方法 本实验采用《中国药典》2005年版二部（附录取ⅪH）所载的“无菌检查法”项下进行实验。 结果 样品管无菌生长，5株阳性菌生长良好。 结论 经方法学验证，该方法准确可靠，可作为注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠的无菌检查法。
【关键词】 注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠；无菌检查法（薄膜过滤法）；方法验证
注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠是头孢哌酮钠与舒巴坦钠（1：1）均匀混合的无菌粉末。头孢哌酮钠主要抑制细菌细胞壁的合成，舒巴坦钠本身抑菌作用较弱，与头孢哌酮联合应用后可产生明显的增效作用。为确保临床用药安全，《中国药典》2005年版二部规定需做无菌检查。本实验旨在按《中国药典》2005年版二部所载无菌检查法（附录取ⅪH）建立注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠的无菌检查法［1］。
1 材料与试药
1.1 供试品 注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠（规格：1g/瓶，批号：07061601，生产厂家：山东瑞阳制药有 限公司）。
1.2 培养基及冲洗液 硫乙醇酸盐液体培养基（批号：070215），改良马丁培养基（批号：070309），营养肉汤培养基（批号：080410），营养琼脂培养基（批号：070522），pH7.0氯化钠-蛋白胨（批号：070524）。均为干燥培养基，临用前按说明书称量配制灭菌。
1.3 验证实验用菌种（第三代） （1）金黄色葡萄球菌（Staphylococcus）［CMCC（B）26 003］;（2）铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）［CMCC（B）10 104］;（3）枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）［CMCC（B）63 501］;（4）生孢梭菌（Clostridium sporogenes）［CMCC（B）64 941］;（5）白色念珠菌（Candida albicans）［CMCC（F）98 001］。
1.4 仪器 开放式薄膜过滤器（孔径0.45μrn,滤膜直径50mm）,恒温培养箱、培养皿,抽滤泵。
2 方法与结果
2.1 菌液制备 （1）分别取金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤中，于35℃培养18～24h，用无菌0.9%氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液备用。（2） 取生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐培养基中，于35℃培养18～24h，用无菌0.9%氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu备用。 （3）取白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于25℃培养24h，用无菌0.9%氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu备用。
2.2 菌液计数 每种菌液接种2个平皿，取平均值。 取上述5种菌液，金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各1ml用营养琼脂培养基平皿35℃培养；白色念珠菌1ml用改良马丁琼脂培养基平皿25℃培养，计数。菌数为2个平皿的平均数。
2.3 实验方法 薄膜过滤法：取本品10瓶按薄膜过滤法过滤，用pH7.0氯化钠-蛋白胨冲洗3次，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu/ml的实验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐培养基或改良马丁培养基中，另取一装有同体积培养基的容器，加入等量实验菌，作为阳性。按规定温度培养3～5天，各实验菌同法操作。结果五株阳性对照菌正常生长，实验组：样品+菌+培养基；对照组：菌+培养基；阴性对照组：改良马丁培养基及硫乙醇酸盐培养基。
2.4 样品的无菌检查 取本品11瓶，按薄膜过滤法过滤，用pH7.0氯化钠-蛋白胨冲洗3次，每次100ml，取出滤膜，将其剪成三等份，两份分别置于含50ml硫乙醇酸盐培养基的容器中，其中一管接入小于100cfu/ml的金黄色葡萄球菌作为对照，第三份置于含50ml改良马丁培养基的容器中，按规定温度培养14天，逐日观察，供试品管均澄清，阳性对照管生长良好，判定供试品符合规定。
3 讨论
因为注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠是抗生素药品，对金黄色葡萄球菌，生孢梭菌等有抑制作用，用pH7.0氯化钠-蛋白胨冲洗能消除其抑菌成分，从而避免了假阳性的出现，提高了阳性检出率，保证了结果的准确性。所以，从结果可以看出方法验证的重要性，即采用的方法条件是否适合于该品种的无菌检查具有重要意义。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中国药典,二部.北京：化学工业出版社，2005，89．
2 中国药品生物制品检定所．中国药品检验标准操作规程．
3 苏德模．微生物学检验手册．北京：科学出版社，2000，197．
（编辑：汪 洋）
作者单位：657000 云南昭通，昭通市食品药品检验所