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【摘要】 目的 探讨淋巴结核的免疫发病机制。方法 采用流式细胞术对76例淋巴结核患者外周血中T细胞亚群水平进行了检测，并与初治肺结核进行比较。结果 外周血中CD+3、CD+4、CD+8、CD+4 /CD+8、T细胞水平两组病例间差异无显著性（P＞0.05）。结论 对于淋巴结核患者发病不能简单归于细胞免疫功能低下，应考虑存在更深层次的免疫功能紊乱，即免疫网络的失衡。
【关键词】 结核，淋巴；T淋巴细胞；流式细胞术；免疫发病机制
Changes and significance of T lymphocytes subsets in peripheral blood of patients with lymphoid tuberculosis
HAO Xiao-hui，GU Jin,LIU Yi-dian,et al.Shanghai Pulmonary Hospital affiliated to Tongji University，Shanghai 200433,China
【Abstract】 Objective To investigate the immune pathogenesis of lymphoid tuberculosis.Methods The percentages of T lymphocytes subsets in peripheral blood of 76 cases of lymphoid tuberculosis were measured by flow cytometry,and compared with those of 120 cases of new pulmonary tuberculosis.Results There were no significant differences in the percentages of CD3+、CD4+、CD8+ T lymphocytes and the ratios of CD4+ /CD8+between the two groups （P>0.05）.Conclusion The low immune function of T lymphocytes is not the single immunological pathogenesis of lymphoid tuberculosis, and the unbalance of immunological systemmay play an important role on pathogenesis of lymphoid tuberculosis.
【Key words】 tuberculosis, lymphpoid; T lymphocytes; flow cytometry; immune pathogenesis
近年来，国内外学者对结核病的免疫机制进行了广泛深入的研究。结核病的免疫是依赖于细胞介导的免疫反应（cell-mediated immunity,CMI），多种免疫细胞参与的过程〖1～5〗。此外，多种细胞因子也在结核病免疫发病中起着重要作用〖6〗。然而，迄今结核病确切的发病机制还未完全阐明。同时结核感染，可表现出不同部位发病，淋巴结核是肺外结核最常见的部位，对于淋巴结核免疫发病机制的研究国内外报道甚少。为此，笔者对76例淋巴结核患者外周血中CD+3、CD+4、CD+8、CD+4 /CD+8等水平进行了检测，并与120例初治肺结核进行比较，旨在进一步探讨结核病尤其是淋巴结核的免疫发病机制，现将研究结果报告如下。
1 对象和方法
1.1 研究对象 所有病例均为我院2005年12月—2008年2月期间住院患者，共196例。所有病例均无免疫系统疾病史或近1个月内未使用过糖皮质激素等免疫抑制剂。（1）淋巴结核组（淋巴组）：76例，男31例，女45例，年龄15～78岁，平均45.6±18.7岁。入选标准：①淋巴结穿刺涂片（和/或培养）抗酸杆菌阳性和（或）淋巴结活检病理学诊断；②肺部无病灶或仅有纤维条索及少许小结节灶。（2）初治肺结核组（初治组）：120例，男76例，女44例，年龄15～83岁，平均47.2±27.6岁。所有患者均系新发初治痰结核分枝杆菌涂片和（或）培养阳性。肺部典型结核表现，浅表淋巴结无明显肿大者。以上病例均于入院第二天清晨采空腹血，进行T淋巴细胞亚群检测。
1.2 方法 采用流式细胞仪对外周血中的CD+3（%）、CD+4（%）、CD+8（%）等T细胞水平进行检测。取100μl全血加入至12×75mm试管中，并添加适量带有异硫氰酸荧光素（FITC）、R-藻红蛋白（PE）和R-藻红蛋白-花青苷5（PE-Cy5）等标记的相关单克隆抗体。在室温下避光孵育20min后，再加入500μl的Optilyse C裂解液，室温下避光10min。随后加500μl PBS缓冲液，再室温避光10min。并以rpm速度离心5min，弃上清，1ml PBS缓冲液悬浮细胞，然后上机检测。
1.3 统计学处理 数据均以〖x〗±s表示，并采用SPSS13.0软件包进行处理，多个样本组间采用单因素方差分析（ANOVA），两组间比较采用独立样本t检验及配对样本t检验。以P≤0.05为差异有显著性。
2 结果
不同组别外周血中T细胞水平测定结果，见表1。从表1可见，外周血中CD+3、CD+4、CD+8、CD+4 /CD+8淋巴组均略高于初治组，但两组病例间差异无显著性（P＞0.05）。表1 不同组别外周血中T细胞水平的比较
3 讨论
据估计世界1/3人口感染了结核分枝杆菌，其中一部分发展为活动性结核病，除主要发展为肺结核外，最常见的肺外结核之一是淋巴结核，但同样是结核感染，却表现为不同部位的结核病，原因尚未完全明了，研究表明，结核分枝杆菌存在于感染宿主器官肉芽肿巨噬细胞中，肉芽肿由巨噬细胞、郎格汉斯巨细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞和成纤维细胞组成。结核分枝杆菌可能以休眠、非复制状态，也可呈主动复制状态但不被机体免疫反应所杀死，或代谢方式发生改变以有限的或少见复制周期。一旦免疫反应平衡被打破则可导致结核分枝杆菌的再活化和复制，并伴组织的坏死和破坏，从而产生了活动性结核病。而在结核病肉芽肿的形成和维持过程中需要活化的T细胞，结核分枝杆菌作为一种抗原藉抗原提呈细胞（antigen presenting cells,APCs）通过主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）Ⅱ类分子途径和MHC-Ⅰ类分子途径提呈给T细胞，同时激活机体的T细胞，从而启动了以T细胞为主的细胞免疫反应。T细胞在结核病的免疫保护性反应中起着重要作用，CD+4T细胞表达α/βT细胞受体，其与吞噬体处理过的抗原识别以及APCs表面MHC-Ⅱ类分子某些小肽片段提呈有关。CD+8T细胞则识别胞液处理过的抗原，并提呈细胞表面MHCⅠ类分子。一般来说，CD+4T细胞通过激活效应细胞以及使其他免疫细胞聚集于感染部位以增强宿主免疫反应，并可分泌多种细胞因子来发挥保护作用〖1，2，7，8〗。而CD+8T细胞更有可能主要通过TCR识别细胞内感染，抑制细胞内结核菌的生长，对靶细胞产生细胞毒作用（cytotoxicity），在潜伏感染结核菌的鼠实验中鼠接受异烟肼和利福平的治疗后，其细菌处于相对稳定、低感染状态，当CD8细胞减少时，结核菌快速恢复活性，提高体内的负荷〖9〗，此外，CD8细胞也可产生少量IFN-γ、IL-4等〖1，2，10〗。结核性肉芽肿中含有CD+4和CD+8T细胞，参与肉芽肿内感染的控制和预防再活化。此外，T细胞凋亡在结核病的发生与发展过程中也起着重要的作用〖11〗。Rodrigues等〖12〗研究发现，结核病患者外周血中CD+4 T细胞降低，而CD+8T细胞升高。Natalya等〖9〗研究发现，在结核分枝杆菌感染时CD+8T细胞发挥细胞毒作用需要CD+4 T细胞的参与。Barcelos等〖13〗对11例初治肺结核患者外周血中CD+4 、CD+8 、活化CD+4T细胞和活化CD+8T细胞水平进行了检测，结果显示肺结核患者外周血上述T细胞水平与正常健康人相比差异无显著性，但肺结核患者经过抗结核治疗后活化CD+8T细胞水平明显降低（P<0.05）。我们的研究结果显示，外周血中CD+3、CD+4 、CD+8 、CD+4 /CD+8 水平肺结核、淋巴结核两组病例间差异无显著性（P＞0.05），表明，CD+4 T细胞降低或CD+8T细胞升高并非是促进结核病发生发展的重要原因，从而也证实CD+4和CD+8T细胞在结核病时发挥着相辅相成的作用，一方面，CD+4和CD+8T细胞通过不同的作用机制控制结核分枝杆菌感染；另一方面，它们的作用也是相互依赖的，并伴随多种细胞因子水平的改变〖9，10，14〗。由T淋巴细胞介导的CMI和与其相伴生的迟发性变态反应（delayde-type hypersensitivity,DTH）之间的关系亦对临床结核病的发病、演变及转归具有重要的影响。CMI与DTH现在被认为是由不同T细胞亚群介导的两种不同细胞炎症免疫反应。介导CMI的主要是Th淋巴细胞，介导DTH的主要是抗原特异性TDTH淋巴细胞，亦有观点认为以Th1型反应起主导优势时表现为CMI,以Th2型反应为优势时表现为DTH，CMI主要通过激活巨噬细胞来杀灭细胞内吞噬的结核菌，而DTH则通过杀死含菌的未激活的巨噬细胞来起作用。轻度的DTH可达到杀菌效果，但剧烈的DTH则会造成组织溃烂、坏死、液化和空洞等损伤形成，同时结核菌被释放到细胞外，引起播散。人体的免疫系统是一个复杂的处于动态变化中的系统，结核病的免疫反应实质是机体动态平衡的破坏。若调节适当可协助机体杀灭结核菌，若调节不当将造成机体的损伤，希望将来进一步的深入研究更有助于结核病的治疗。
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（编辑：黄 杰）
作者单位：200433 上海，同济大学附属上海市肺科医院，上海市结核（肺）重点实验室