体外受精过程中胚胎污染的处理

　　在体外受精胚胎移植治疗过程中胚胎污染的发生是极少见的，我们在完成的1500多个治疗周期中，仅发生1例，胚胎经处理后进行了冻融胚胎移植获临床妊娠。现将有关资料报告如下，并进行文献复习探讨污染的来源和预防处理方法。

　　1  临床资料

　　患者，28岁，上海市人，因结婚2年不孕，于2004年3月来我中心就诊。患者1998年因意外妊娠行清宫术。HSG提示“宫腔密度不均，双侧输卵管未显影，近段阻塞”。患者要求行体外受精胚胎移植(IVF-ET)治疗，常规检查基础FSH 7.64u/L，双方HIV(-)、RPR(-)，女方阴道分泌物解脲支原体、衣原体培养(-)；男方精液常规检查：1.2ml、46×10６/ml，前向运动精子31%、畸形28%，白细胞2个/HP，精液解脲支原体、衣原体培养(-)。于2004年10月28日起进入治疗周期，常规使用GnRH-a/FSH/HCG方案，2005年11月24日晚注射HCG(Profasi,Serono) 10000IU,11月26日上午经阴道超声引导下穿刺取卵，穿刺卵泡31个获卵26个。男方精液用上游法处理，精子密度调整为20×106/ml，前向运动精子75%以上。受精方法采用100μl HTF液滴法，组织培养油(4008，SAGE)遮盖微滴。每孔加入4～5个卵，加入精子悬浮液10μl。次日去除颗粒细胞后观察发现，22个成熟卵中6个可见第二极体和2个原核，同时发现每个受精液滴中均有杆状的细菌生长。在精子悬浮液中也见同样形状细菌生长。立即对受精卵移入加有5%的庆大霉素卵裂液进行多个液滴的冲洗；同时将受精液、精子悬浮液和男方当日的新鲜精液送细菌培养。11月29日胚胎生长良好，8细胞胚胎3个、5细胞胚胎2个、3细胞胚胎1个，均未见碎片且卵裂球圆整。因患者子宫内膜过厚(19mm)，行全胚冷冻。同时将胚胎培养液滴送细菌培养。细菌培养结果：受精液、精子悬浮液和男方当日的新鲜精液中均有亚利桑那沙门菌(沙门菌属)，最后一液胚胎培养液未见细菌生长。可以确定污染源为精液。2005年2月16日，行冻融胚胎移植。解冻胚胎3个，移植一个6细胞(原8细胞)胚胎和一个3细胞胚胎。2月30日留晨尿作妊娠试验阳性，并于第7周行B超检查提示宫腔内单胎，确定为临床妊娠，现在继续妊娠中。

　　2  讨论

　　体外培养胚胎污染的发生率是极低的，笔者已完成体外培养1500余例仅1例发生。国内朱桂金［1］等人报道发生率为0.51%，与国外报道的0.1%～1.0%基本一致。目前大部分文献认为污染的主要来源是精液，精液细菌培养的阳性率达到63%～100%［2，3］；其次是卵泡液，其细菌培养阳性率为9%～27%；培养液(包括矿物油)和培养环境也可引起污染。引起污染的细菌主要是大肠埃希菌和真菌，笔者发现的是亚利桑那沙门菌(沙门菌属)，未见报道。

　　胚胎污染的处理主要是胚胎的反复清洗。培养液中一般都加有抗生素，笔者在处理中另外加入了庆大霉素，经过多个液滴的清洗后，再进行培养，一般到48h后在倒置显微镜下检查没有细菌发现，同时要将最后一液的培养液送细菌培养。污染的胚胎一般不主张用于移植，本例患者因移植日子宫内膜过厚(19mm)，没有进行新鲜胚胎移植；清洗后的最后一液培养液细菌培养未见细菌生长，所以可以考虑进行冻融胚胎的移植，如培养为阳性，则放弃移植。

　　胚胎污染的发生率虽然很低，但预防是很重要的。(1)术前准备要充分，要排除现在或近期有泌尿道感染病史的患者，要进行尿常规检查和精液的解脲支原体、衣原体的培养；精液的细菌培养因阳性率很高，笔者认为可以不作为常规检查，也没有必要常规在术前使用抗生素。(2)取精和精液处理环境以及手术室、培养室的建立要按卫生部的有关要求，这样可以避免许多污染可能的发生。(3)精液处理时可以使用上游法，许多学者发现上游法可以去除90%～100%的细菌［4］。取卵时尽量不要重复使用试管。另外，在受精时可以采用短时间的精卵的方法，可以减少污染机会。有人报道对于精液污染导致胚胎反复污染的患者，可以考虑进行附睾微穿刺活检后行单精子卵胞质注射术［5］。

　　参考文献

　　1  朱桂金，魏玉兰，胡娟，等.体外受精过程中胚胎污染及其来源的探讨.中华妇产科杂志，2004，39(6)：382-384.

　　2  Gregoriou O,Botsis D,Papadias K,et al.Culture of seminal fluid in infertile men and relationship to semen evaluation.Int J Gynaecol Obstet,1989,29:149-153.

　　3  Cottell E,McMorrow J,Lennon B,et al.Microbial contamination in an in vitro fertilization-embryo transfer system.Fertil Steril,1996,66:776-780.

　　4  Cottell E,Lennon B,McMorrow J,et al.Processing of semen in an antibiotic-rich culture medium to minimize microbial presence during in vitro fertilization.Fertil Steril,1997,67:98-103.

　　5  Seian DS,Madjar I,Levron J,et al.Testicular sperm aspiration and intracytoplaic sperm injection for persistent infection of the ejaculate.Fertil Steril,1999,71:564-566.

　　作者单位： 200040 上海市第一妇婴保健院辅助生殖技术中心

　　(编辑 唐  城)