点击显示 收起
【摘要】 目的 探讨妊娠高血压疾病母儿血清中瘦素的含量在胎盘中的表达及其意义。方法 采用放射免疫法测定25例正常孕妇、23例妊娠高血压疾病孕妇及其新生儿脐血中的瘦素水平，利用免疫组织化学染色法测定上述孕妇胎盘中瘦素的表达。结果 (1)妊娠高血压疾病组产妇血清中瘦素水平明显高于正常对照组，差异具有非常显著性（P<0.01）。(2)妊娠高血压疾病组脐血瘦素水平与母血水平呈正相关（P＜0.01），正常对照组无相关性。(3)妊娠高血压疾病组脐血瘦素表达明显增多（P＜0.01）。(4)脐血瘦素水平与新生儿体重呈正相关（P＜0.01）。结论 (1)孕期瘦素主要来自胎盘。(2)瘦素与妊娠高血压疾病发病相关。(3)脐血瘦素水平升高是导致巨大儿的危险因素。
【关键词】 瘦素;高血压,妊娠性;胎儿体重;胎盘
Study on the effects and clinical meanings of leptin levels in women with hypertensive disorder complicating pregnancy and cord and its expression in the placenta
YUE Qi,YANG Yan-qi, HAN Shi-yu.Department of Obstetrics and Gynecology, The First Hospital,Harbin 150010,China
【Abstract】 Objective To research the effects and clinical meanings of leptin levels in pregnant women with hypertensive disorder complicating pregnancy (HDCP) and cord and its expression in the placenta.Methods Immunohistochemical technique and radioimmunoassay was used to detect the leptin levels and its expression in pregnant womens blood with HDCP, cord serum and placenta.Results (1)The serum leptin levels was elevated in pregnant women with HDCP, compared with healthy pregnant woman.(2)Cord leptin levels of HDCP was associated with the pregnant womans serum leptin levels.But there was no relationship between them in nomal pregnant woman.(3)The high expression was found in HDCP placenta.(4)A positive correlation was found between cord leptin level and neonatal weight.Conclusion (1)Leptin was mainly producted by placenta during pregnancy.(2)The association was found between leptin and HDCP.(3)Cord leptin was a risk factor to a high birth weight.
【Key words】 leptin;hypertension,pregnancy-induced;fetal weight;placenta
妊娠高血压疾病是最常见的产科并发症之一，其原因尚未阐明。目前多数学者较为认同的是免疫学说和子宫胎盘缺血学说，此外血浆内皮素、一氧化碳、钙离子、心钠素等均与妊娠高血压疾病有关。最近有一些研究发现瘦素与妊娠高血压疾病也有一定关系。本研究旨在了解正常妊娠及妊娠高血压疾病母儿血清瘦素水平、胎盘瘦素表达的差异，以探讨瘦素对妊娠高血压疾病及其新生儿的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 标本来源 2004年6月～2005年6月间在哈尔滨医科大学附属第四院妇产科、哈尔滨市第一医院门诊检查而住院分娩的产妇及其新生儿。于孕晚期（30～39周）给予诊断、分组［1］。所有孕妇月经规律、末次月经准确。采集标本前无吸烟及服药史。妊娠高血压组23例，其中轻度7例、中度7例、重度9例，平均年龄(27.31±3.32)岁；正常妊娠对照组25例，平均年龄(27.31±2.37)岁。
1.1.2 试剂 瘦素放射免疫药盒、兔抗人多克隆抗体、二步法免疫组化试剂盒及二氨基联苯胺（DAB）试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术公司。
1.1.3 主要仪器 SN-695智能计算器、石蜡切片机、光学显微镜、微波炉、温箱。
1.2 方法 所有标本均用无菌试管收集，入院后，取孕妇肘前静脉血2～3ml，新生儿娩出后2min，取脐静脉血3～4ml，3000r/min，分离血清，置-20℃保存待测。胎盘娩出后30min内在直视下剪取胎盘胎儿面中央血管少的组织块，切成10mm×10mm大小，生理盐水冲洗干净后，固定于10%多聚甲醛中。将固定的标本石蜡包埋，制成4μm厚的切片。
1.2.1 血清瘦素测定采用放射免疫法 (1)将所有试剂、样品放置室温下。(2)将所有试管编号，分别为标准管和样品管。(3)向标准管中加入标准液100μl，样品管中加入样品液100μl。充分混匀，置37℃ 30min。(4)所有试管中加入标记抗体溶液200μl。充分混匀，置室温1.5h。（5）37℃下温育2h。（6）用计算器测定试管中放射性活度，至少测量1min。
1.2.2 胎盘瘦素表达测定采用免疫组织化学染色法 （1）脱蜡、水化组织切片。（2）3%过氧化氢去离子水孵育5～10min，阻断内源性过氧化物酶。(3)对组织切片进行预处理。(4)滴加兔来源的一抗，37℃孵育1～2h，PBS冲洗2min，3次。（5）滴加山羊抗兔IgG抗体-HRP多聚体，37℃孵育20～30min，PBS冲洗2min，3次。（6）选用DAB染色。（7）蒸馏水充分冲洗。（8）细胞核用苏木精复染。（9）封片剂进行封片，显微镜观察。
1.3 结果判定标准 磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照，脂肪组织作为阳性对照，细胞核用苏木精复染。根据细胞核着色强度和着色细胞占有百分比判断瘦素的表达情况。着色强度分为不着色：0分；轻度着色：1分；中度着色：2分；重度着色：3分。着色细胞占有百分比为无细胞着色0分，<25%的细胞着色1分，25%～50%的细胞着色2分，>50%的细胞着色3分。若积分之和为0～1分，则为表达（-），积分之和为1～2，则为表达弱阳性（+），积分之和为3～4分，则为表达阳性（++），积分之和为5～6分，则为表达强阳性（+++）。
1.4 统计学方法 采用SPSS 11.0软件包进行统计学分析，资料中数据均以均数±标准差（x±s）表示。统计方法采用t检验、直线相关性分析等。
2 结果
2.1 两组孕妇的一般性指标比较 见表1。两组孕妇的年龄、孕周、胎儿身长等比较差异均无显著性。妊娠高血压组BMI、孕前BMI高于正常对照组（P＜0.05）。
表1 两组孕妇的各项指标 （略）
2.2 两组孕妇母血及脐血瘦素含量比较 见表2。妊娠高血压组母血瘦素水平明显高于正常对照组（P＜0.01）。妊娠高血压组、正常对照组母血瘦素水平明显高于新生儿脐血瘦素水平，其中妊娠高血压组母血与儿血瘦素水平明显正相关，而正常对照组母血与儿血瘦素水平无相关性。另外两组脐血瘦素水平与胎儿体重成正相关。
表2 两组孕妇母血及脐血瘦素含量 （略）
2.3 两组胎盘中瘦素表达情况比较 见表3。妊娠高血压组胎盘中瘦素阳性表达率为91%，而正常妊娠对照组胎盘中瘦素阳性表达率为52%，妊娠高血压组胎盘中瘦素表达明显高于正常妊娠对照组，差异具有非常显著性（P＜0.01）。
表3 两组胎盘中瘦素表达情况 例（略）
3 讨论
3.1 母血瘦素水平的意义 瘦素具有广泛的生物学效应。正常妊娠时，血浆瘦素水平较非妊娠时升高［2］，妊娠高血压疾病患者血浆瘦素水平可进一步升高［3］。本研究结果显示，妊娠高血压疾病孕妇BMI较正常孕妇高，产前瘦素水平也较正常孕妇显著升高，提示肥胖孕妇有发生妊娠高血压疾病的倾向。
3.2 胎儿脐血瘦素水平的意义 本试验结果显示，妊娠高血压疾病组新生儿脐静脉瘦素水平与孕妇血清瘦素水平呈正相关，与新生儿体重呈显著正相关关系，而正常对照组，新生儿脐血瘦素水平与母血瘦素水平无相关性。其原因可能是瘦素分子量大，胎盘功能正常时，不能透过胎盘屏障，而在妊娠高血压疾病时，胎盘功能受损，母儿瘦素可通过受损的胎盘屏障互相影响。
3.3 胎盘中瘦素表达水平的意义 本研究表明妊娠高血压疾病者，胎盘瘦素表达明显增加，胎盘组织分泌瘦素的增加与妊娠高血压疾病发病有关。胎盘组织产生的瘦素有98.4%输送给母亲，从而使循环中的瘦素增加，交感神经活性增高，血压升高。而妊娠高血压疾病时交感神经活动增加［4］，因而推断瘦素可能通过肾素—血管紧张素—醛固酮系统参与妊娠高血压疾病的发病［5］。Mise等［6］证实，妊娠高血压病患者胎盘中瘦素mRNA表达增加的同时，胎盘神经肽Y的mRNA表达下降，推测瘦素可能通过抑制具有血管舒张作用的神经肽Y的分泌，使胎盘血管收缩，导致胎盘缺血、缺氧、内皮细胞损伤，释放炎性细胞因子，参与妊娠高血压疾病的发病。
【参考文献】
1 乐杰.妇产科学,第6版.北京：人民卫生出版社，2004，114-123.
2 Steppan CM, Crawford DT, Chidsey-frink KL.Leptin is a potent stimulater of bone growth in ob/ob mice.Regul Pept, 2000,92:72-78.
3 Odabasi E, Ozata M, Turan M, et al.Plasma leptin concentrations in postmenopausal woman with osteoporosis.Eur J Endocrinal, 2000,142:170-173.
4 彭萍，李文玲，江悦华，等.正常妊娠和妊娠高血压综合征妇女血清瘦素水平的动态监测.中华妇产科杂志,2002，37（8）：529-532.
5 Suhonen L, Teramo K.Hypertention and preeclampsia in woman with gestional glucose intolerance.Acta Obstet Gynecel Scand,1993,72:269-272.
6 Mise H, Sagawa CM, Matsumoto T,et al.Augmented placental production of leptin in preeclampsia:possible involvement of placental hypoxia.J Chin Endocrinol Metab, 1998,83:3225-3229.
作者单位： 1 150010 黑龙江哈尔滨,哈尔滨市第一医院妇产科
2 黑龙江哈尔滨,哈尔滨医科大学附属第四医院妇产科
(编辑：于 伽)