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【摘要】 目的 研究动员自体干细胞治疗糖尿病足的疗效，探讨糖尿病足的治疗方法。方法 利用白细胞集落刺激因子动员自体干细胞，动态观察糖尿病足部损伤组织的免疫细胞CD34+的表达情况与糖尿病足治疗愈合相关性。结果 患者足部组织中发现治疗后有免疫组织CD34+表达者与糖尿病足治愈呈正相关。结论 利用白细胞集落刺激因子动员自体干细胞治疗糖尿病足，可以明显提高疗效，降低截肢率。
【关键词】 糖尿病足；免疫组织化学；CD34+细胞表达
糖尿病足是糖尿病严重并发症之一，其致残、致死率很高，临床治疗难度大，近年寻求治疗糖尿病足方法备受各国医学界重视，采用自体干细胞动员，重建下肢血管，改善下肢血液循环，治疗糖尿病足，多有报道；但是干细胞是否能在足部坏疽的损伤组织中表达，上皮细胞组细胞能否归巢病变部位，是治疗的关键。为找到客观依据，对我院住院的30例糖尿病足患者，采用白细胞集落刺激因子动员自体干细胞，并采取创伤组织，做免疫组织化学检测CD34+细胞、上皮细胞及新生血管，并观察糖尿病足临床疗效，具体情况报告如下。
1 对象与方法
1.1 研究对象 糖尿病足患者60例，均为2004年1月~2005年3月我院住院患者，男32例，女28例，年龄（64.5±6.9）岁，糖尿病病程（8.2±3.2）年，根据Wagner分级法［1］，0级即高危足0例；1级即浅表性溃疡8例；2级即深部溃疡，常穿过皮下脂肪达筋膜或韧带，但无脓肿形成及骨受累18例；3级深部感染如蜂窝组织炎或脓肿形成，有骨受累，常致骨髓炎者16例；4级局部坏疽如足尖、足跟或远端更大范围者12例；5级全足坏疽6例。所有患者均符合1999年WHO糖尿病诊断标准，并签署同意参与该项研究志愿知情书。随机分成两组，治疗组、对照组各30例。
1.2 方法 60例患者于入院即取创面组织，采用针吸法或直接取标本，做免疫组织化学检查。治疗方法：两组一般治疗相同，用胰岛素控制血糖、根据足分泌物细菌培养及药敏实验选用敏感抗生素、足部清创换药、积极治疗相应并发症。治疗组：皮下注射人体重组白细胞集落刺激因子（瑞白）200μg，每日1次，连续用药5天，停用皮下注射瑞白7天，为1个疗程，共3个疗程。动态检测外周白细胞情况，白细胞上升后，从足部取组织做免疫组织化学检查，每5天取3次（注射后的第1、3、5天），动态随访1年。标本取材尽量取新生肉芽组织。
2 结果
2.1 两组住院时免疫组织化学检测情况 见表1。
表1 两组住院时免疫组织化学检测情况 （略）
注：* P＞0.05
2.2 治疗组动员干细胞后免疫组织化学检测及预后情况 见表2。
表2 治疗组动员干细胞后免疫组织化学检测及预后情况 （略）
2.3 动态随访1年后的情况 见表3。
表3 两组免疫组织化学检测情况、治愈及复发情况比较 （略）
注：**P＜0.001，△P＜0.05
3 讨论
利用干细胞来修复因为缺血而损伤的脏器及组织，是近年医学界研究重要课题，利用自体干细胞治疗糖尿病下肢缺血性病变——糖尿病足，在这方面工作国内刚开始。无论是利用药物动员自体干细胞，或提取外周血中骨髓干细胞体外培养后局部介入治疗。都涉及干细胞是否在局部表达，是否能形成新生血管，能否改变局部血液循环，及对预后影响等方面问题。糖尿病患者内皮细胞功能失调导致外周侧支血管供血不足，而骨髓、外周血、脐血中存在能进一步分化为内皮细胞并参与血管新生的内皮祖细胞（EPC）［1］，EPC的特征性表面标志是CD133、CD34、血管内皮生长因子受体（VEGFR）-2，CD133为造血干/祖细胞标志，随着EPC向成熟内皮的分化逐渐消失，目前CD34+是EPC细胞局部表达的重要标志，是公认可以分化为上皮细胞，进而形成毛细血管，修复缺血引起组织损伤［2］，但是在糖尿病足发病后，足部损伤组织中是否有CD34+细胞局部表达，药物动员自体干细胞后，CD34+细胞能否归巢局部，为此，笔者对60例糖尿病足病患者利用白细胞集落刺激因子动员自体干细胞，并取患者受伤足部组织做组织免疫化学检测CD34+细胞、新生血管情况，并设立对照组观察预后情况，从观察看糖尿病足病患者，当足部发生缺血、损伤，发生组织坏死时，机体开始自发动员干细胞释放，并在体内一些因子作用下，归巢足部损伤、坏死部位分化、繁殖、再生上皮细胞，形成毛细血管，进行创伤修复，本组病例中入院治疗前查足部组织中已有5例检出有CD34细胞，正说明这一点。同时从治疗前后及对照组观察，治疗组药物动员自体干细胞后，CD34细胞归巢率明显增多，占76.67%，明显优于对照组，1年后治疗组复发率为0。这说明远程疗效好，这可能与CD34细胞归巢，形成毛细血管，改善局部血液循环，改善足的营养与创伤修复能力，本组60组病例，治疗前后，1年后均做眼底免散瞳数码照相，未发现因CD34细胞归巢引起视网膜新生血管形成。两组间无明显差异，但应进一步研究。总之，该项研究从一个方面提供应用干细胞治疗糖尿病足的客观依据，这种利用自体干细胞治疗糖尿病足方法行之有效。
【参考文献】
1 De AS Vriese,T Verbeuren J,Vna de Voorde J,et al.Endothelial dysfunction in diabetes.Br J Pharmacol,2000,130（5）:963-974.
2 Lsner JM,Asahara T.Angiogenesis and vasculogenesis as therapeuticstr-ategies for postnatal neovascularization.J Clin Invest, 1999, 103: 1231-1236.
(编辑：夏 琳)
作者单位： 071000 河北保定，保定市第一中心医院内分泌科