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【摘要】 目的 建立WG胶囊中维生素E的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，采用Agilent ZORBAX Extend C18柱，流动相为纯甲醇，流速为1.5ml/min，检测波长为285nm。结果 维生素E线性范围314～5024μg/ml，r=1.000，平均回收率为95.51%，RSD=2.21%。结论 采用本法测定WG胶囊中维生素E的含量，灵敏度高，结果可靠准确，可为WG胶囊的质量控制方法提供依据。
【关键词】 WG胶囊;维生素E;HPLC;含量测定
WG胶囊为维生素E及其他多种营养成分配伍制成的保健食品。维生素E可使垂体前叶促性腺分泌细胞亢进，分泌增加。临床用于习惯性或先兆性流产，女性不育，脂肪吸收异常等维生素E缺乏症，对于防止动脉硬化、肌肉萎缩、男性不育也有一定作用。在处方中，维生素E用量较大，而且在发挥处方疗效中起主要作用。因此，选择维生素E作为指标性成分对此保健食品进行质量控制。目前维生素E的主要分析方法有气相色谱法[1]与高效液相色谱法[2，3]等。本研究采用HPLC法对WG胶囊中维生素E的含量进行了测定。
1 仪器与试药
Waters 2695型高效液相色谱仪，Empower色谱工作站。SHIMADZU AY220型电子天平(准确到0.1mg)，Sartotius BP211D型电子天平(准确到0.01mg)。
维生素E对照品(购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号100062-200608)，甲醇为色谱纯(江苏汉邦科技有限公司，批号100056)，其余试剂均为分析纯。WG胶囊(自制，批号20100120、20100125、20100128)。
2 色谱条件
色谱柱：Agilent ZORBAX Extend C18柱，流动相为纯甲醇，流速为1.5ml/min，检测波长为285nm。理论板数按维生素E峰计算应不低于3000。
在此色谱条件下，维生素E与其他色谱峰分离良好，见图1、图2、图3。图1 阴性制剂色谱图 图2 维生素E对照品色谱图 图3 WG制剂色谱图
3 对照品贮备液的制备
精密称取维生素E对照品25.12mg，置10ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得维生素E对照品贮备液(2.512mg/ml)。
4 供试品溶液的制备
取本品装量差异项下的内容物，混匀，取约0.5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，避光，称重，超声处理(功率250W，频率 50EHz)20min，取出放冷，再称定称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
5 线性关系考察
精密量取维生素E对照品贮备液2ml，置10ml棕色量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀，即得5#对照品溶液;精密量取5#对照品溶液5ml置10ml棕色量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀，即得4#对照品溶液;以此类推，分别制得3#、2#、1#对照品溶液。
分别精密吸取以上1#至5#对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，依法测定，记录峰面积。每份溶液平行进样2次，以峰面积平均值为横坐标(X)，对照品溶液浓度(mg/ml)为纵坐标(Y)，进行线性回归。得维生素E回归方程为Y=-2329.75+1553149X(r=1.000)，结果表明维生素E进样量在314～5024μg范围内线性关系良好。见表1表1 维生素E线性关系考察浓度
6 精密度试验
以3#对照品溶液为测定对象，依法连续进样6次，记录峰面积，得维生素E峰面积的RSD为0.22%，结果表明本法测定维生素E精密度良好。见表2 表2 维生素E精密度试验
7 重复性试验
取批号为20100120的本品6份，按“4供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取以上供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，依法测定，记录峰面积。每份溶液平行进样2次，以峰面积平均值按标准曲线法计算含量。重复性试验结果表明供试品中维生素E的平均含量为7.184mg/g，RSD为2.52%。见表3。含量(mg/g)=(平均峰面积-截距)(mg/ml)×25(ml) 斜率×称样量(g)表3 维生素E重复性试验
8 稳定性试验
以“7重复性试验”第一份供试品溶液为研究对象，每隔2h进样1次，每次精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，记录峰面积，共测定7次，RSD为1.34%，表明供试品溶液中维生素E在12h内稳定。见表4。表4 维生素E稳定性试验时间(h) 峰面积 平均峰面积 RSD
9 加样回收率试验
精密量取浓度为2.512mg/ml的维生素E对照品贮备液6.4～50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得浓度为0.3215mg/ml加样回收率试验用对照品溶液。
取批号为20100120的本品6份，每份约0.25g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入浓度为0.3215mg/ml的维生素E对照品溶液5ml，再精密加入甲醇20ml，依法制备加样回收率试验供试品溶液，依法测定。并计算维生素E平均回收率为95.51%，RSD=2.21%。见表5。加样回收率(%)=测得量(mg)-理论量(mg) 加入量(mg)×100% 测得量(mg)=(平均峰面积-截距)(mg/ml)×25(ml) 斜率理论量(mg)=称样量(g)×重复性试验平均含量(mg/g)表5 维生素E加样回收率试验
10 含量测定
取批号为20100120、20100125、20100128的本品，每批2份，照“4供试品溶液的制备”依法制备供试品溶液。
分别精密吸取以上供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录峰面积。每份溶液连续进样2次，以峰面积平均值按标准曲线法计算含量，结果见表6。表6 维生素E含量测定
11 讨论
本品三批中试产品中维生素E的平均含量为3.606mg/粒，如以-20%为下限，含量限度应为含维生素E不低于2.885mg/粒。因此初步将含量限度定为：本品每粒含维生素E，不少于2.8mg/粒。
药典中维生素E为维生素E的醋酸酯，采用气相色谱法测定含量。保健品中当维生素E与维生素A共存时，采用皂化水解，然后采用反相高效液相色谱法测定维生素E含量，因皂化后为生育酚，故测定波长为294nm。但中科维钙胶囊中未添加维生素A，且经GC-MS法检测亦未检测出维生素A的存在，故不需采用皂化法，而可以直接测定。因维生素E紫外最大吸收为285nm，故本方法检测波长选择为285nm。
因维生素E为脂溶性化合物，在甲醇中溶解性较好，故溶剂选择为甲醇，且流动相亦选择为纯甲醇。经本方法学考察，所建方法柱简便、快速、可行，且柱压低，对仪器损伤小。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中国药典，2005年版(二部).北京：化学工业出版社，2005,674.
2 宋金春，李韵秋，曾俊芬. HPLC法测定注射用12种复合维生素中维生素D2、维生素A与维生素E的含量. 中国药房，2007，18(31)：2456.
3 李桂华，郭良玉，付黎敏. 高效液相色谱法测定精制程度不同的植物油中各种生育酚的含量. 郑州粮食学院学报，1994，15(2)：3439.