正交设计法优选葛根中葛根素提取工艺

　　葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata（willd）ohwi或甘葛藤P.thomosoni Benth的干燥根，其化学成分复杂，含有异黄酮、葛根素、葛根素木糖苷、大豆黄酮、大豆黄酮苷及β-谷甾醇、大豆苷、大豆苷元、多量淀粉等，主要有效成分为大豆苷元和葛根素，以葛根素含量最高 ［1］ 。具有降低心肌耗氧量、增加冠脉血液量、缓解心绞痛、抗心律失常、抗氧化、增强机体抵抗力、生津止渴等多种功效 ［2］ 。葛根的各种制剂均以葛根素含量为主要质量检测指标 ［3］ 。为更好的发挥葛根的药理作用，本实验以葛根素为检测指标，用正交试验法对其生产工艺进行了优选。

　　1 仪器与试药
    
　　仪器:美国Waters高效液相色谱仪（515泵）;Lambda-Max481检测器;745DataModule数据处理机;U6K-W/Hous-ing进样器;Millipore MILLIQ-2超纯水制备仪。
   
　　试剂均为色谱纯和分析纯;葛根为山东益都产。

　　2 色谱条件
    
　　色谱柱:Resolve C 18 经向加压柱（5μm，8×100mm）。流动相:MeOH:H 2 O（32:68）。检测波长:λ=250nm。流速1.0ml/min。
    
　　3 对照品溶液的制备
    
　　精密称取在105℃干燥至恒重的葛根素对照品适量，用30%的甲醇溶液配制成浓度约为0.1mg/ml溶液作为对照品溶液。
    
　　4 标准曲线的制备
    
　　取葛根素对照品溶液，按照色谱条件分别进样0.204、0.408、0.612、0.812、1.020、1.224、1.428μg，测得峰面积与进样量作图，在0.2～1.4μg范围内呈良好线性关系，回归方程为Y=3331631.30x-41466.85，r=0.9991。
    
　　5 精密度试验
    
　　取葛根素对照品溶液，按照色谱条件进样8次，测得峰面积X=1643465，RSD=0.73%。说明本方法精密度较高。

　　6 提取工艺优选
    
　　6.1 正交表设计 本试验主要考察葛根素的浸出率，进行L 9 （3 4 ）的正交试验，以便选择出最佳的提取工艺。正交试验因素、水平见表1。
    
　　表1 正交试验因素、水平表（略）
   
　　6.2 样品的提取与葛根素的含量测定 取葛根20g，粉碎称定重量;置500ml圆底烧瓶中按照表2设定的条件进行加热回流提取，合并提取液，置1000ml容量瓶中，用30%MeOH溶液定容。含量测定吸取对照品和样品溶液各5μl注进色谱仪测定。
   
　　6.3 葛根药材中葛根素的提取与含量测定 含量测定称取葛根粉末0.5g于500ml烧瓶中，加甲醇250ml，称重，加热回流提取5h，放冷称重用甲醇补充至原重，过滤，滤液作为供试品溶液取5ml注进色谱仪测定，计算葛根素的含量为441%。正交试验以此含量为比较，计算葛根素的浸出率。
   
　　浸出率（%）=样品中葛根素提取量/葛根药材中葛根素含量×100%
   
　　正交试验以葛根素浸出率为指标进行计算和统计学处理，L 9 （3 4 ）的计算见表2，方差分析见表3。

　　表2 L 9 （3 4 ）计算（略）
    
　　表3 方差分析（略）
    
　　7 结果与讨论
    
　　以上实验及方差分析的结果显示:A:乙醇浓度是最显著性因素;B:溶剂量和提取次数为较显著性因素;C:提取时间为不显著性因素。为了尽量多的提取出葛根素又节省能源，提取工艺的最佳条件应为A 3 B 2 C 2 D 3 ，即用80%的乙醇浓度10倍剂量，回流提取3次，每次2h，此工艺可供葛根素提取及其制剂大批量生产时参考。
    
　　参考文献
    
　　1 何惟胜.葛根及其提取物治疗心脑血管疾病药理和临床研究进展.时珍国医国药，2001，12（5）:470-471.
   
　　2 王永泽，何照范.均匀设计对葛根异黄酮提取率的影响.贵州大学学报，2002，21（6）:420-423.
   
　　3 中国现场统计研究会三次设计组.全国总工会电教中心.正交法和三次设计，北京:科学出版社，1987，19.

　　作者单位:250062山东省医科院药物研究所