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【Abstract】 Objective To observe the level of TGF-βin the aging diabetic patients and the effects of the Puerarin.Methods We estimated the concentration of serum TGF-βfor42patients with2type diabetes mellitus and22aging persons control.Twenty-seven patients with incipient diabetic nephropathy（Urinary Albumin excrete rate，UAER≥20μg/min and<200μg/min）received the treatment for Puerarin400mg to be intravenous injected，for14days.Results Conclusion SerumTGF-βconcentration was significantly higher in patients with2type DMthan control group.The level of TGF-βhad tightly relationship with the course of diabetic disease，age，and diabetic nephropathy.Puerarin Could inhibit the nonenzymatic glycation，then reduced TGF-βexpression.We demonstrated that Puerarin could decrease the level of serum TGF-βand UAER of incipient diabetic nephropathy.
【Key words】 Diabetic nephropathy TGF-β puerarin
随着社会老龄化发展趋势，老年糖尿病发病率不断上升，而糖尿病肾病是其致死、致残的主要原因之一，在终末期肾病透析病人中约1/3是由糖尿病肾病引起 ［1］ ，它的主要病理改变是毛细血管基底膜的增厚及基底膜区基质的增加，最终导致弥漫性或结节性肾小球硬化。糖尿病肾病的产生和发展受多种因素的影响，近年研究表明，多种细胞因子分泌增多和细胞外基质（ECM）蛋白代谢异常在糖尿病肾病发病机制的各个环节发挥作用，而其中转化生长因子（TGF-β）是重要的中枢环节 ［2］ ，因而寻找影响TGF-β的因素及降低TGF-β的水平，改善糖尿病肾病的进展则是临床医生密切关注的问题，我们通过葛根素对老年糖尿病肾病的治疗，进一步观察TGF-β水平的变化。
1 对象和方法
1.1 对象和分组 病例组:我院老年内分泌病房及专科门诊病人42例，均符合1999年WHO糖尿病诊断标准，其中男36例，女6例，年龄60～84岁，病程6个月～30年，所有患者排除心肺肝疾病，泌尿系感染及其他肾脏疾病，在1个月内未发生过糖尿病酮症酸中毒及其它急性并发症，近期未使用过对肾脏有害的药物。所有入选患者血肌酐<136μmol/L，凡有高血压者继续给予抗高血压药物治疗，服用血管紧张素转换酶抑制剂者换用其他降压药物，并于换药2周后再进入试验期。对照组:22例，男18例，女4例，年龄:60～85岁，排除糖尿病、高血压和心肾疾病。
1.2 实验方法 收集糖尿病患者24h尿液，不加防腐剂，混匀准确记录尿量留取8ml，以测定尿肌酐（Cr）、尿白蛋白（ALB），根据24h尿白蛋白排泄率（UAER）分为两组，糖尿病正常白蛋白尿组（A组）:UAER≤20μg/min，共15例，糖尿病白蛋白尿组（B组）:20μg/min<UAER≤200μg/min，共27例，B组在原降血糖、血压治疗方案的基础上加用葛根素注射液400mg静脉注射，每天1次，14天为1个疗程，此产品由广东燕塘生物化学药业有限公司生产，批号:粤卫药准字（1996）第161006号。
所有入选者详细询问病史，体检，测量身高、体重、血压，监测尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）及肝功能。治疗前后测定糖基化血红蛋白（HBA lc ）、胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白等。在葛根素治疗前后留空腹血3ml，置干燥管留血清，储存于-40℃冰箱中，待测TGF-β。
1.3 测定方法 肝肾功能及血脂等采用本院生化全自动分析仪。尿ALB和HBA 1C 采用BAYER公司生产的DC2000型测定仪测定，TGF-β用美国BIO-RAD公司的550型微孔板酶标仪检测，TGF-β 1 EASIA试剂盒购自华美生物制品经营公司，（比利时Blosource公司产品）其原理为辣根过氧化酶标记的TGF-β和样品中未标记的TGF-β竞争和包被的TGF-β抗体结合。样品先经酸化激活，测定血清中总TGF-β，严格按照说明书操作。
1.4 统计学处理 数据用均数±标准差（ˉx±s），用SPSS软件进行t检验，相关分析及线性回归分析。
2 结果
TGF-β水平在所有病例组分析和年龄有相关性（r:0.396，P<0.05），和老年糖尿病病程有关（r:0.437，P<0.01），和糖尿病肾病相关性最强（r:0.695，P<0.01）。病例组与对照组比较TGF-β值为96.57±31.68vs68.51±17.23，P<0.05，差异有显著性。
葛根素治疗前后尿白蛋白变化及血清TGF-β水平变化如表1所示。经葛根素治疗后尿白蛋白排泄率明显降低，同时血清TGF-β水平亦有显著性降低，伴有收缩压及舒张压的降低，28例治疗者6例有头疼症状，但能耐受，坚持应用。患者无恶心、呕吐等消化道症状，无肝肾功能等显著性变化，无出血症状及体征。
表1 葛根素治疗前后尿白蛋白及血清TGF-β水平变化 略
3 讨论
3.1 TGF-β和老年糖尿病肾病的相关性 TGF-β的分子量为25KD，活性形式TGF-β的结构为二硫键相连的2条相同多肽链的二聚体。机体大部分细胞都能合成TGF-β。此细胞因子通过受体信号传递发挥以下生物学作用:调节细胞增殖和分化;增加细胞外基质含量;参与炎性反应、组织修复;胚胎发育和免疫调节等过程 ［2］ 。由此而增加肾脏系膜细胞，肾小球上皮细胞，近曲小管上皮细胞和成纤维细胞外基质蛋白分子的合成，从而导致肾脏基底膜增厚和肾脏细胞外基质的增多，现已证实高糖可刺激肾小球系膜细胞（GMC）合成和分泌TGF-β增加 ［3］ ，可能的机制为高糖经非酶糖基化反应，形成终末期糖基化产物（AGEs），此产物可与其受体结合，促进靶细胞TGF-β等细胞因子的过度表达 ［4，5］ 。在人体中随机体老化亦存在缓慢非酶糖基化反应，随着年龄的增加体内AGEs水平升高，从本课题表明，老年2例糖尿病患者TGF-β水平明显高于对照组，同时与年龄有明显的相关性，在糖尿病肾病组中TGF-β和尿白蛋白排泄率明显相关，说明TGF-β水平和肾脏损伤的程度明显相关，因此推断血清中TGF-β的水平是糖尿病肾病的产生和发展的重要危险因素，在临床糖尿病肾病的诊断及预后判断具有重要指导意义。
3.2 葛根素对血清TGF-β水平及尿白蛋白排泄率的影响葛根素是中医用于活血化瘀，改善循环的中药，其化学成 分为4，7-二羟基，8-B-D葡萄糖异黄酮，此药物临床多用于冠心病、脑缺血及眼底视网膜动静脉阻塞等，能够抑制血小板聚集，改善微循环，同时由于葛根素对快速及缓慢非酶糖基化反应具有抑制作用 ［6］ ，我们用于老年2型糖尿病肾病的治疗以取得较好的疗效 ［7］ ，从本组观察资料看28例老年2型糖尿病肾病患者应用葛根素治疗后，不但有尿蛋白的降低，同时伴有血清中TGF-β水平的降低，从而推断血清中TGF-β水平和AGEs有关，有报道当非酶糖基化反应受到抑制后，相应血清中TGF-β水平降低，因此对2型糖尿病患者肾小球基底膜增厚及细胞外基质的增多有抑制作用 ［8］ ，对糖尿病肾病的产生和发展有其治疗作用，亦有资料表明，黄芪可抑制糖尿病大鼠肾皮质TGF-β的表达，从而减轻肾脏改变 ［9］ ，由此可见中医、中药治疗糖尿病肾病虽具有悠久历史，但只有通过现代科学技术对其进一步验证、开发，才能被世界承认。
综上所述，老年2型糖尿病患者TGF-β的水平和年龄、病程及糖尿病肾病明显相关，也是导致糖尿病肾病产生和发展的重要危险因素，葛根素通过其非酶糖基化反应的抑制作用，可降低2型糖尿病肾病患者TGF-β水平，对糖尿病患者尿白蛋白的排泄率有降低作用。中医中药治疗糖尿病肾病一直是我们关注的课题，只有利用现代科学和技术，进一步探讨其作用机制，才能为中医、中药走向世界奠定基础。
参考文献
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作者单位:210029南京医科大学第一附属医院老年医学科