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【摘要】 目的 本实验研究脓毒血症大鼠肾组织匀浆TNF-α、MCP-1含量变化。方法 通过对SD大鼠盲肠结扎及贯穿，建立大鼠的脓毒血症模型，分别取肾组织通过组织裂解液，形成组织匀浆液，取匀浆上清测定TNF-α、MCP-1含量。结果 在SD大鼠脓毒症早期，肾组织匀浆中TNF-α、MCP-1含量明显增高。结论 TNF-α、MCP-1是脓毒血症早期激活的细胞因子，脓毒症引起肾功能改变与细胞因子大量释放有关。
【关键词】 脓毒症；肿瘤坏死因子-α；单核细胞趋化蛋白-1
Effects of sepsis early on SD rats renal expression of TNF-α、MCP-1
REN Yan-bo，ZHANG Yu，JIANG Li.
Department of Emergency ICU，Dalian Medical Collage Hospital，Dalian 116011，China
【Abstract】 Objective To observe the changs of SD rats renal levels of tumor necrosis factor-α(TNF-α)、monocyte chemotactic protein-(MCP-1)in sepsis early.Methods Sepsis was produced in rats by local ligation and puncture.Changes in TNF-α、MCP-1 levels in renal tissues were determined by enzyme-linked immunosorbent assay，respectively.Results TNF-α and MCP-1 levels in renal tissus were significant increased in rats with sepsis.Conclusion TNF-α and MCP-1 are cytokines which were activated in sepsis early，and is significantly relate with a great deal of cytokines released.
【Key words】 sepsis;tumor necrosis factor-α；monocyte chemotactic protein-1(MCP-1)
脓毒血症是感染因素所致的全身炎症反应综合征(SIRS)，在SIRS以及继发组织损伤时，释放一些不能控制的细胞因子进入循环，引起血流动力学不稳定、广泛的组织损伤，导致多脏器功能失常综合征(MODS)，是ICU患者中最常见的死亡原因之一，MODS中出现3个脏器衰竭只有不伴肾功能衰竭时，才能生存。如同时存在ARF(急性肾功能衰竭)，其死亡率可达88%。可见及时诊断与防治ARF对防治MODS的发生、降低死亡率是十分重要的。参与调节细胞因子释放与促炎症因子和抗炎症因子的平衡，可能对炎症反应的严重性起决定性作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物和主要试剂 健康雄性SD大鼠，体重180～230g(由大连医科大学动物中心提供)：Tunel细胞凋亡试剂盒购自德国Boehringer Mannheim公司。
1.2 实验步骤
1.2.1 大鼠分组 SD大鼠48只，分成12组，每组4只，其中6组为致伤组，分别在致伤后1h、3h、6h、12h、24h、48h活杀；另外6组为对照组，同样时间活杀。
1.2.2 步骤 各组大鼠均采用腹腔麻醉，12h前禁食水，腹腔局部脱毛，氯胺酮麻醉剂(80mg/kg)0.32ml腹腔注射后，6组大鼠采用腹正中切口，开腹将盲肠取出，在距盲端1cm处结扎，用12号针头贯穿，然后将盲肠移入腹腔，缝合切口，编号(使用两种染料，一种个位，一种十位)，置入笼内自由活动，不限饮食，每隔3～4h观察1次；另外6组，同样开腹，但是不结扎、不穿孔，同样时间活杀，编号。
1.2.3 组织匀浆液的提取 依照Tulzo［1］方法，收集匀浆上清-20℃保存，取匀浆上清测定TNF-α含量、MCP-1含量，ELISA法测定按照试剂盒说明进行。
2 结果
2.1 肾组织匀浆TNF-α水平变化 CLP致伤后1～48h肾组织匀浆TNF-α水平明显升高，于致伤后3h达高峰。与对照组比较差异有显著性。见表1。
2.2 肾组织匀浆MCP-1水平变化 CLP致伤后1～48h肾组织匀浆MCP-1水平明显升高，于致伤后3h达高峰。与对照组比较差异有显著性。见表1。
表1 对照组与模型组的TNF-α、MCP-1、细胞凋亡的结果 (略)
注：与对照组比较，ΔP＜0.01
3 讨论
脓毒血症的发展与系统性炎症反应的宿主对突发的刺激反应程度有关，是宿主对感染刺激过度反应的结果，尽管体内防御机制对机体是有益的，能中和侵入的微生物，清除损伤的细胞和修复破坏组织，但过度的活化可能是有害的［2，3］。在此过程中，细胞因子起信息分子作用，发出不同的细胞反应信号，引起细胞和体液反应。肾脏是全身炎症反应综合征和脓毒血症休克的靶器官，内皮细胞损伤的结果多累及心、肺和肾，特点是生成一些过量的促炎症体液介质。
盲肠结扎穿孔术后，由于组织坏死，肠道组织通透性增加，细菌易位，形成脓毒血症，严重者导致MODS发生。致伤组结果显示，大鼠致伤后，肾组织匀浆液TNF-α、MCP-1水平显著升高，在致伤后3h达高峰。TNF已被认为是机体系统炎症发病机制中的前炎症分子［4］。TNF-α主要来源于单核、巨噬细胞等，主要通过诱导其他细胞因子的产生和释放，如白介素-1β(IL-1)、IL-6等造成对机体的损伤的同时，再激活炎症效应细胞，释放更多的炎症因子，使炎症信号进一步放大和加强，产生“级联放大”作用。
单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)是几种类型细胞分泌的一种强效化学激活合成物［5，6］，如单核细胞、人肾小管上皮细胞。并通过实验证实MCP-1能刺激真核细胞转录因子－κB(NF-κB)的活性，NF-κB是急性炎症反应的中枢环节，通过调节炎症因子的基因表达，控制SIRS的发展。
脓毒血症直接导致MODS往往由于开始感染的轻重，坏死是严重的炎症反应伴随而来，然而凋亡时，潜在的炎症反应的危害是有限的。因此，脓血症时，凋亡有减少对炎症控制的作用［5］。在严重的脓毒血症中，呈瀑布样释放的前炎症因子和抗炎症细胞因子也调节细胞的死亡程序，因此，伴随系统性器官功能障碍的脓毒血症病人，组织中的凋亡比循环细胞中的凋亡重要的多。凋亡可能通过清除产生前炎症因子的单核细胞而有益处，也可能使宿主防御能力下降而起坏的作用，如肾小管细胞凋亡直接导致通透性增加；局部淋巴细胞凋亡使抵抗力下降，易发生感染。
本研究显示脓毒血症早期，炎性因子TNF-α、MCP-1的增加，有资料显示应用TNF-α抗体可明显减少肠集合淋巴结中淋巴细胞凋亡［7，8］。早期的肾小管细胞结构重建是以凋亡的方式参与，而晚期细胞凋亡数目减少，使其不能参加结构重建，坏死细胞增多，进一步加重了肾功能的损害。炎性因子TNF-α、MCP-1的表达对肾功能衰竭的早期诊断提供预警、判断预后提供依据和指标。
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(编江：罗 彬)
作者单位： 116011 辽宁大连，大连医科大学附属第一医院急诊科