安蓝风湿药液急性毒性实验和镇痛作用的研究

【关键词】  安蓝风湿药液；急性毒性试验；镇痛实验

    Research on the acute toxic test and the analgesia effect of the Anlar fengshi solution

    ZENG Ze-min,LI Xue-yan,XIAO Xiang-shu,et al.TCM Hospital,shaoyang Hunan 422000,China

    【Abstract】  Objective  （1）Observation mice with oral Anlan fengshi solution produces acute toxic response and death situation, provides the material for the clinical test security.（2） Through mice analgesia experiment observation, provides the basis with the medicine. Method  （1） After 10 mice preparations, ig cannot measure LD50,therefore carries on survey quota for most greatly gives the doses.（2） To acetic acid causes the ache mice sways from side to side the body number of times;Of Reban method causes the ache mouse ache scope influence. Results  （1） Mice ig Anlan fengshi solution most greatly gives the dose every day is 180g drugs/kg,equal to clinical 60 kilograms grown-up person every day amount used 400 times;（2） Anlan fengshi solution high, middle,smaller three amount used with aspirin tablets positive comparison group all obvious suppression the acetic acid causes the ache of the mouse sways from side to side the bodily number of times the increase,all can obviously enhance for drugs after 30th, 60, 90, 120min.The heat stimulates mouse’s pain threshold value，among Anlan fengshi solution high, middle amount used with aspirin tablets positive comparison group all can obviously enhance the acetic acid causes the ache mouse sways from side to side of the body for bends down the time. Conclusion  （1） Anlan fengshi solution toxicity is small,uses under the medicine dosage in the clinical recommendation the use is safe; Anlan fengshi solution possess obvious analgesia function.

    【Key words】  Anlan fengshi solution; acute toxicity test; analgesia experiment

    安蓝风湿药液是邵阳市中医医院经多年临床观察治疗“风寒湿痹”具有显著疗效的中药方剂。“风寒湿痹”［1］是采用病因分类的方法，是“五因痹”中风痹、寒痹、湿痹的合称，不包括热痹、燥痹。其病因是正虚、邪侵、痰瘀三大主要因素，病机相当复杂，常有“虚”、“邪”、“痰”相互搏结，“不通”、“不荣”同时并见。方中以鬼毛针配蚂蚁活血通络止痛，绞股蓝、蚂蚁补肝肾，强筋骨，三药合用祛邪扶正共为君药；半夏、天南星祛痰，助鬼毛针、蚂蚁使痰瘀不能互结，淫羊藿助君药补肝肾、强筋骨、祛风湿，增加主药疗效，故半夏、天南星、淫羊藿为臣药；水蛭生用量微，意在破瘀通经而不伤正气，改变血流，使血液粘稠度下降为佐药；甘草能减少蚂蚁、水蛭等药物的过敏反应，兼益气扶正，调和诸药，为佐使药。全方共奏活血通络，益肾健骨，除湿止痛之功。这样阻断了“正虚”、“痰瘀”两个关节的病理环节，全方以祛邪为第一要务，邪去则正安，兼顾扶正，组方主次分明有序，直达病所，创“活血通络，益肾健骨，除湿止痛”之法治疗风寒湿痹，意在治病求因。下面将安蓝风药液急性毒性实验和镇痛作用的研究介绍如下。

    1  安蓝风湿药液的急性毒性实验研究

    1.1  实验材料

    1.1.1  药物  安蓝风湿药液，规格：500ml/瓶，每1ml含生药0.225g，批号：20060816，由湖南省邵阳市中医医院提供。取安蓝风湿药液2瓶，即1000ml，水浴浓缩至100ml，即每1ml含生药2.25g，此浓度为最大浓度。

    1.1.2  动物  清洁级昆明种小鼠，18～22g，50只，雌雄各半，由湖南长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供；实验动物生产许可证：SCXK（湘）2006-0001号。湖南省药品检验所动物房，实验动物使用许可证：SYXK（湘）2003-0006号。实验室温度18～28℃，自制标准颗粒饲料喂养，自由摄食、摄水。

    1.2  实验方法［2，3］

    1.2.1  经10只小鼠预试，ig测不出LD50，故进行最大给药量测定。

    1.2.2  取小鼠40只，20～22g，雌雄各半，均分成两组（n=20），给药组和对照组。隔食不隔水12h后，给药组动物灌胃上述安蓝风湿药液浓缩液0.8ml/20g，对照组动物灌胃等体积注射用水，每次间隔12h，共给药2次，给药后连续观察7天动物的毒性反应，包括行为活动、精神状态、食欲、大小便，以及毛发、呼吸、口、鼻、眼、耳、肛门等有无异常分泌物，体重变化及死亡等情况。

    2  安蓝风湿药液的镇痛作用的研究

    2.1  实验材料

    2.1.1  药物  安蓝风湿药液，规格：500ml/瓶，每1ml含生药0.225g，批号：20060816，由湖南省邵阳市中医医院提供；阿司匹林片，批号：060807，舒泰神（北京）药业有限公司。

    2.1.2  动物及仪器  清洁级昆明种小鼠，由湖南长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供；实验动物生产许可证：SCXK（湘）2006-0001号。GJ-8402型热板测痛仪。

    2.2  实验方法［4］

    2.2.1  药物配制方法和实验动物分组  实验动物分为5组，第一组为对照组，第二组为阳性药物组，第三、四、五分别为安蓝风湿药液高、中、低剂量组（16.4g生药/kg、8.2g生药/kg、4.1g生药/kg），取安蓝风湿药液，在水浴上浓缩至0.655g生药/ml和0.328g生药/ml、或加蒸馏水稀释成0.164g生药/ml的浓度供动物用（按体表面积计，分别相当于人用等效剂量的4倍、2倍和1倍）；阳性药物用阿司匹林片，用蒸馏水分别配成0.91mg/ml的浓度供动物用（按体表面积计，相当于人用等效剂量的2倍）；所有动物均灌胃给药，动物给药体积为25ml/kg体重。除另有规定外，一般每天给药一次，实验室温度控制在18～28℃，自制标准颗粒饲料喂养，自由摄食、摄水。

    2.2.2  对醋酸致痛小鼠扭体次数的影响  清洁级昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分为5组（n＝10），按2.1方法给药，每天1次，共给药8天，在末次给药后60min，各组分别腹腔注射0.7％冰醋酸（0.15ml/10g），观察每只小鼠15min内扭体的潜伏期和因疼痛引起的扭体次数（腹部内凹，伸展后肢，臀部抬高视为扭体反应）。结果见表1。 表1  安蓝风湿药液对醋酸致痛小鼠扭 体次数的影响注：与模型对照组比较，*P＞0.05，  **P＜0.05，   ***P＜0.01

    2.2.3  对热板法致痛小鼠痛阈的影响  筛选合格小鼠：热板温度恒定在55±0.5℃10min后，取体重18～22g雌性清洁级昆明种小鼠若干。凡舔后足时间<5s或>30s或跳跃者弃之不用。选合格小鼠50只，随机分为5组（n＝10），测其正常痛阈值，作为该鼠给药前痛阈值。按2.2.1方法给药，每天1次，共给药5天，在末次给药后30、60、90、120min分别测小鼠痛阈值。结果见表2。表2  安蓝风湿药液对热刺激小鼠疼痛反应的影响注：与正常对照组比较，*P＞0.05，**P＜0.05，  ***P＜0.01

    3  实验结果

    3.1  安蓝风湿药液急性毒性实验结果  动物全部成活，对照组体重平均增加16.7％，给药组体重平均增加16.3％。第8天处死小鼠解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等主要脏器，均未见表面与切面异常。结果小鼠ig安蓝风湿药液每日最大给药量为180g生药/kg，相当于临床60kg成人一日用量（120ml/日，120×0.225/60＝0.45g生药/kg）的400倍。见表3。表3  安蓝风湿药液小鼠急性毒性实验结果

    3.2  安蓝风湿药液的镇痛作用研究结果  结果表明，安蓝风湿药液高、中、低三个剂量和阿司匹林片阳性组均明显抑制醋酸致痛小鼠扭体次数的增加，其中安蓝风湿药液高、中剂量组和阿司匹林片阳性组均能明显提高醋酸致痛小鼠扭体的潜伏期；安蓝风湿药液高、中、低三个剂量和阿司匹林片阳性组均能明显提高给药后30、60、90、120min热刺激小鼠的痛阈值。

    4  实验结论

    安蓝风湿药液小鼠灌胃180g生药/kg，相当于临床60kg成人一日用量400倍，提示本品毒性小，在临床推荐的用药剂量下使用是安全的。

    动物实验结果表明，安蓝风湿药液高、中、低三个剂量组均能显著降低醋酸致痛小鼠扭体的次数，其中高、中剂量组能明显提高醋酸致痛小鼠扭体的潜伏期。安蓝风湿药液高、中低三个剂量组均能明显提高给药后30、60、90、120min热刺激小鼠的痛阈值。提示安蓝风湿药液具有明显的镇痛作用。

【参考文献】
  1 娄玉钤.中国风湿病学.北京：人民卫生出版社， 2001，69.

2 中华人民共和国卫生部药政局.中药新药研究指南,1999.

3 陈奇.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，1993.

4 卫生部药政局.中药新药研究指南,1994.

作者单位：422000 湖南邵阳,邵阳市中医医院