MDR1基因短发卡样RNA表达载体逆转K562/A02人白血病细胞多药耐药的研究

2007年01月08日 中华肿瘤杂志 2006 Vol.28 No.6 P.422-425 11 （长沙）为了构建MDR1基因短发卡样RNA(shRNA)真核表达载体，观察对K562/A02人白血病细胞株MDR1基因的沉默作用以及对P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响。研究者 以基因重组技术构建表达质粒，转染重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B至K562/A02细胞株，通过半定量RT-PCR和蛋白质印迹法，检测MDR1基因表达及P-gp表达水平的变化；以MTT法检测阿霉素(ADM)对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC50)；高效液相色谱(HPLC)法检测细胞内ADM含量。结果 构建的2种重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B均明显抑制K562/A02细胞株MDR1基因表达，抑制率最高为48.2%±2.5%；同时抑制P-gp蛋白的表达，抑制率最高为50.67%。对ADM药物敏感性的相对逆转效率分别为40.8%和62.4%；同时使K562/A02细胞内ADM含量增加。可见 shRNA表达载体可明显抑制K562/A02细胞MDR1 mRNA的转录和P-gp蛋白的表达，增加K562/A02细胞内ADM含量，恢复K562/A02细胞对化疗药物的敏感性，逆转MDR1基因编码蛋白P-gp介导的多药耐药。