钠氢交换子1短发夹RNA抑制醛固酮引起的系膜细胞纤连蛋白增生

2008年08月06日 《中华肾脏病杂志》-2007年23卷10期 -635-639页 医学空间（MEDcyber.com）8月6日消息，该项研究目的是构建钠氢交换子1（NHE1）的短发夹RNA（shRNA）,用来抑制NHE1表达,进一步明确NHE1是否直接介导醛固酮引起的细胞外基质增生。采用的方法是构建靶向NHE1的短发夹状双链RNA的真核表达质粒（shRNA-NHE1）,并将该质粒转染体外培养的大鼠肾小球系膜细胞。分别于转染后1、3、4 d用荧光定量PCR（real-time PCR）和Western印迹观察NHE1 mRNA和蛋白的表达。选择shRNA-NHE1质粒转染后第4天,给予醛固酮（10^-7mol/L）干预24 h,用ELISA法检测培养上清液中细胞外基质成分纤连蛋白（FN）的表达。结果PCR结果显示转染后24 h,shRNA-NHE1组NHE1 mRNA表达下降36.9%;转染第3、4天NHE1 mRNA表达降低69.2%和77.9%。Western印迹显示转染后24 h NHE1的蛋白表达无明显变化;3 d后蛋白水平显著下降,4 d后抑制作用更明显。ELISA结果显示,在未转染的系膜细胞中,醛固酮刺激后上清液中FN水平比对照组明显升高[（51.78±1.15）比（17.74±1.38）μg/L,P〈0.05],而当细胞转染shRNA-NHE1质粒后,醛固酮的上述作用被明显抑制[（28.07±1.73）μg/L,P〈0.05]。由此得出结论靶向NHE1的shRNA真核表达载体导入可以特异性抑制大鼠肾小球系膜细胞NHE1的表达,同时显著抑制醛固酮引起的FN增生,提示NHE1在醛固酮诱导的肾小球硬化中起重要作用。