弓形虫GRA6可溶性蛋白在大肠埃希菌中的表达及纯化

2006年08月28日 中华传染病杂志 2006 Vol.24 No.3 P.148-151 8 （苏州）为了在大肠埃希菌中高效表达及纯化弓形虫GRA6抗原，为制作弓形虫感染基因工程诊断试剂盒奠定基础。研究者将重组pGEX-GRA6表达载体转化大肠埃希菌BL21-Codon Plus(DE3)-RP菌株，在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达。超声破壁后，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物的表达形式，并对表达产物以硫酸铵沉淀、Sephedax G50脱盐和GST亲和层析柱进行目的蛋白的纯化。通过Western blotting检测其纯化的重组抗原的免疫反应性。结果GRA6以融合蛋白(GST-GRA6)的形式在大肠埃希菌中得到了高效表达。对表达产物可溶性分析表明，表达蛋白在上清液中和包涵体中均有表达。在上清液中表达的可溶性蛋白经纯化后蛋白纯度可达90%以上.Western blotting分析表明纯化蛋白能被弓形虫感染的人血清所识别。可见GRA6在大肠埃希菌中得到了高效表达，重组抗原经纯化后能特异性地被弓形虫感染者血清所识别。