结核分枝杆菌ESAT-6抗原真核表达质粒的构建及其免疫原性

2006年06月28日 中华传染病杂志 2006 Vol.24 No.1 P.7-11 11 （湛江）为了构建结核分枝杆菌抗原ESAT-6的真核表达质粒，并研究其免疫原性。研究者采用聚合酶链反应(PCR)方法自结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增esat-6基因片段，定向亚克隆入真核表达载体pVAC，构建pVAC-esat-6重组质粒,利用脂质体介导的转染技术，将其导入Vero E6细胞，RT-PCR法检测mRNA表达情况，Western-blot法鉴定表达产物；重组质粒经基因枪免疫小鼠后，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清抗ESAT-6特异性抗体以及小鼠脾淋巴细胞培养上清液干扰素-γ(IFN-γ)含量。结果成功构建了真核表达重组质粒pVAC-esat-6，并可在VeroE6细胞中表达；重组质粒免疫小鼠3次后，抗体滴度达到了1:1600，重组质粒组(pVAC-esat-6组)小鼠脾淋巴细胞培养上清液IFN-γ水平明显高于对照组(pVAC组)(P＜0.01)。可见成功构建结核分枝杆菌抗原ESAT-6的真核表达质粒pVAC-esat-6，免疫小鼠后诱导产生了特异的体液免疫应答和细胞免疫应答。